Rhizoctonia solani RBL1, isolated f

Rhizoctonia solani RBL1, isolated from naturally infected rice plants with typical symptoms of sheath blight in a paddy field of Mazandaran province, Iran, was used in all experiments. R. solani strain RBL1 was obtained from the culture collection of the Iranian Rice Research Institute. The fungus was purified with the hyphal tip method and maintained on potato dextrose agar (PDA, Merck, Germany). To prove pathogenicity, inoculations were done in a glasshouse on Oryza sativa cv. Neda by placing a 5-mm mycelial plug of R. solani between the junction of the basal leaf sheath and the stem above the water line at the maximum tillering stage. R. solani was re-isolated from characteristic lesions of sheath blight. To confirm the anastomosis group (AG) and subgroup, a nuclear rDNA region, containing the ITS1 and 2 as well as the 5.8S gene (accession No. HM211085) was subjected to a BLAST search (Altschul et al., 1997) to find out the most similar sequences in the NCBI GenBank.
For the isolation of Trichoderma strains, soil samples were collected from rice fields located all over Mazandaran province (Figure 1), on the southern coast of the Caspian Sea. Soil was taken with an auger from a depth of 15 cm. Samples were air dried for 3–5 days at room temperature. Trichoderma isolates were obtained by the dilution plate method (Dhingra and Sinclair, 1995) on McFadden & Sutton’s RB-S-F Trichoderma selective medium (Davet and Rouxel, 2000). Sieved soil samples (10 g) were shaken in 90 mL sterile water for 10 minutes. For the isolation of Trichoderma from the rice phyllosphere, the leaves and stems were cut into small pieces (1 cm2), transferred to 500 mL Erlenmeyer flask with 100 mL sterile distilled water and placed on a shaker for one hour. A dilution series up to 10-6 was made from the samples. Aliquots (1 mL) were spread on Petri plates containing a selective medium and were then incubated at 25°C in the dark. Trichoderma isolates were also purified directly from fungal masses on rice debris. Putative Trichoderma colonies (from soil and foliage samples) were purified on PDA plates by the single spore method and deposited in the Microbiological Collection of the University of Szeged (SzMC).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Rhizoctonia solani RBL1 แยกต่างหากจากพืชข้าวที่ติดเชื้อตามธรรมชาติโดยทั่วไปอาการของโรค sheath ในนาจังหวัด Mazandaran อิหร่าน ถูกใช้ในการทดลองทั้งหมด R. solani ต้องใช้ RBL1 ที่ได้จากการรวบรวมวัฒนธรรมของ สถาบันวิจัยข้าวอิหร่าน เชื้อราที่บริสุทธิ์ที่ มีวิธีเคล็ดลับ hyphal และจัดเก็บอยู่ในมันฝรั่งขึ้น agar (PDA เมอร์ค เยอรมนี) พิสูจน์ pathogenicity ประเทศจัดทำในเรือนกระจกสำหรับปลูกต้นไม้บนพันธุ์ซา Oryza Neda โดยทำปลั๊กแบบ mycelial 5 มม.ของ R. solani ระหว่างของ sheath โรคใบไม้และก้านด้านบนสายน้ำที่ tillering ขั้นสูงสุด R. solani ใหม่แยกจากได้ลักษณะของโรค sheath ยืนยันกลุ่ม anastomosis (AG) และกลุ่มย่อย ภูมิภาค rDNA นิวเคลียร์ ประกอบด้วยการ ITS1 และ 2 ตลอดจน 5.8S ยีน (ทะเบียนหมายเลข HM211085) ที่ต้องการค้นหาระเบิด (Altschul และ al., 1997) การค้นหาลำดับที่คล้ายคลึงกันมากที่สุดใน NCBI GenBankสำหรับแยก Trichoderma สายพันธุ์ ตัวอย่างดินจัดเก็บจากข้าวทั่วทั้งจังหวัด Mazandaran (รูปที่ 1), ทางทิศใต้ของทะเลแคสเปียน ดินถูกถ่ายกับชอนจากลึก 15 cm. ตัวอย่างการถูกอากาศแห้ง 3-5 วันที่อุณหภูมิห้อง Trichoderma แยกได้รับ โดยการเจือจางจานวิธี (Dhingra และนแคลร์ 1995) ใน McFadden & ของซัตตั้น Trichoderma RB-S-F เลือกปานกลาง (Davet และ Rouxel, 2000) Sieved ดินตัวอย่าง (10 g) ถูกเขย่าในน้ำฆ่าเชื้อ 90 มล. 10 นาที สำหรับแยกของ Trichoderma จาก phyllosphere ข้าว ใบและลำต้นถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (1 cm2), โอนย้ายไป 500 mL Erlenmeyer หนาว ด้วยน้ำกลั่น 100 mL ใส่ และวางบนเชคเกอร์เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง ชุดเจือจางขึ้นถึง 10-6 ทำจากตัวอย่าง Aliquots (1 mL) ได้แผ่บนจาน Petri ประกอบด้วยสื่อใช้ และถูก incubated แล้วที่ 25° C ในมืด Trichoderma แยกได้ยังบริสุทธิ์โดยตรงจากมวลชนเชื้อราในข้าวเศษ Putative Trichoderma อาณานิคม (จากตัวอย่างดินและใบ) ที่บริสุทธิ์ โดยวิธีสปอร์เดี่ยวบนแผ่น PDA และฝากในการรวบรวมทางจุลชีววิทยามหาวิทยาลัยของ Szeged (SzMC)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Rhizoctonia solani RBL1, การติดเชื้อที่แยกได้จากธรรมชาติพืชข้าวที่มีอาการทั่วไปของโรคกาบใบแห้งในนาของจังหวัด Mazandaran อิหร่านถูกนำมาใช้ในการทดลองทั้งหมด อาร์ solani RBL1 สายพันธุ์ที่ได้รับจากคอลเลกชันวัฒนธรรมของอิหร่านข้าวสถาบันวิจัย เชื้อราบริสุทธิ์ด้วยวิธีการปลาย hyphal และเก็บรักษาไว้ในอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่ง (PDA, เมอร์ค, เยอรมนี) เพื่อพิสูจน์โรค, การฉีดวัคซีนได้ทำในเรือนกระจกใน Oryza sativa พันธุ์ Neda โดยการวางปลั๊ก 5 มมเส้นใยของเชื้อรา R. solani ระหว่างชุมทางกาบฐานและลำต้นเหนือเส้นน้ำในระยะแตกกอสูงสุด เชื้อรา R. solani เป็นอีกครั้งที่แยกได้จากลักษณะของรอยโรคกาบใบแห้ง เพื่อยืนยันกลุ่ม anastomosis นี้ (AG) และกลุ่มย่อยภูมิภาค rDNA นิวเคลียร์ที่มี ITS1 และ 2 เช่นเดียวกับยีน 5.8S (ฉบับที่เข้า HM211085) ได้ภายใต้การค้นหาระเบิด (Altschul et al., 1997) ในการค้นหา ออกลำดับที่คล้ายกันมากที่สุดใน GenBank NCBI.
สำหรับการแยกสายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma ตัวอย่างดินที่เก็บได้จากนาข้าวที่ตั้งอยู่ทั่วจังหวัด Mazandaran (รูปที่ 1) บนชายฝั่งทางตอนใต้ของทะเลสาบแคสเปียน ดินที่ถูกถ่ายด้วยสว่านจากความลึก 15 เซนติเมตร ตัวอย่างอากาศแห้งประมาณ 3-5 วันที่อุณหภูมิห้อง สายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma ที่ได้รับโดยวิธีการเจือจางแผ่น (Dhingra และซินแคล, 1995) ใน McFadden และซัตตัน RB-SF เชื้อรา Trichoderma กลางเลือก (Davet และ Rouxel, 2000) ร่อนตัวอย่างดิน (10 กรัม) ถูกเขย่า 90 มิลลิลิตรน้ำหมันเป็นเวลา 10 นาที สำหรับการแยกเชื้อรา Trichoderma จาก phyllosphere ข้าวใบและลำต้นถูกตัดเป็นชิ้นเล็ก ๆ (1 cm2) โอนไป 500 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer 100 มิลลิลิตรน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและวางไว้บนเครื่องปั่นเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง ชุดลดสัดส่วนถึง 10-6 ทำจากกลุ่มตัวอย่าง aliquots (1 มิลลิลิตร) กระจายอยู่บนจานเพาะเชื้อที่มีสื่อที่เลือกและถูกบ่มแล้วที่ 25 ° C ในที่มืด สายพันธุ์เชื้อรา Trichoderma บริสุทธิ์ยังได้โดยตรงจากฝูงเชื้อราบนเศษข้าว อาณานิคมสมมุติเชื้อรา Trichoderma (จากตัวอย่างดินและใบไม้) ถูกนำมาทำให้บริสุทธิ์บนจาน PDA โดยวิธีสปอร์เดียวและฝากไว้ในคอลเลกชันทางจุลชีววิทยาของมหาวิทยาลัยเกด (SzMC)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เชื้อรา rbl1 , แยกจากธรรมชาติที่ปลูกข้าว กับอาการทั่วไปของกาบใบแห้งในนาข้าว ของจังหวัด อิหร่าน ถูกใช้ในการทดลอง R . solani rbl1 ความเครียดที่ได้รับจากวัฒนธรรมคอลเลกชันของอิหร่านสถาบันวิจัยข้าว . เชื้อราให้บริสุทธิ์ด้วยวิธีปลายเส้นใย และรักษาในอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( Merck , PDA ,เยอรมนี ) เพื่อพิสูจน์การ Inoculations อยู่ในเรือนกระจกในข้าวพันธุ์ นายกวาง 5-mm ปลั๊ก R . solani เส้นใยระหว่างรอยต่อของกาบใบ และลำต้นเหนือน้ำ ( สายที่แตกกอสูงสุดที่ระยะ R . solani เป็นอีกครั้งที่แยกได้จากรอยโรคลักษณะของกาบใบแห้ง . ยืนยันกลุ่มปลาปักเป้าหนามทุเรียน ( AG ) และกลุ่มย่อยนิวเคลียร์ ด้วยพื้นที่ที่มี its1 2 รวมทั้ง 5.8s ยีน ( หนังสือไม่ hm211085 ) คือต้องค้นหาระเบิด ( แอลเชิล et al . , 1997 ) เพื่อหาผู้ที่คล้ายกันมากที่สุดใน ncbi ขนาด .
สำหรับการแยกเชื้อราสายพันธุ์ เก็บตัวอย่างดินจากนาข้าวอยู่ทั้งหมด กว่าจังหวัด ( รูปที่ 1 ) , บนชายฝั่งทางตอนใต้ของทะเลแคสเปี้ยนดินถ่ายด้วยสว่านจากความลึก 15 เซนติเมตร ตัวอย่างแห้ง 3 - 5 วัน ที่อุณหภูมิห้อง เชื้อราไอโซเลทที่ได้จากการเจือจางวิธีเพลท ( และ dhingra ซินแคลร์ , 1995 ) ของ แม็คฟาดเด้น&ซัตตัน rb-s-f Trichoderma เลือกขนาดกลาง ( davet และ rouxel , 2000 ) ขนาดตัวอย่างดิน ( 10 กรัม ) สั่นสะเทือนใน 90 ml หมันน้ำเป็นเวลา 10 นาทีสำหรับการแยกเชื้อราจากผิวใบข้าว ใบและลำต้นมาตัดเป็นชิ้นเล็กๆ ( 1 ตร. ซม. ) โอนไป 500 มล. ขวด 100 ml เออร์เลนเมเยอร์ฆ่าเชื้อน้ำและวางไว้บนเครื่องปั่นเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง เจือจางชุดขึ้นไปสามารถถูกสร้างขึ้นจากตัวอย่างเฉยๆ ( 1 มิลลิลิตรกระจายบนจาน Petri ประกอบด้วยสื่อที่เลือกและบ่มที่อุณหภูมิ 25 ° C ) จากนั้นในที่มืด เชื้อราไอโซเลทยังบริสุทธิ์โดยตรงจากมวลเชื้อราบนเศษข้าวซึ่งเชื้อราอาณานิคม ( จากดินและตัวอย่างใบ ) มีความบริสุทธิ์ใน PDA แผ่นโดยวิธีสปอร์เดี่ยว และฝากในคอลเลกชันทางจุลชีววิทยาของมหาวิทยาลัยเกด ( szmc )