Bovine casein (Sigma Chemical Compa

Bovine casein (Sigma Chemical Company; St. Louis, MO) was dissolved by stirring in buffer at a concentration of 1%. The skim milk powder (SMP; supplied by Fonterra [Australia] Pty. Ltd. Cobden, Australia) substrate was prepared in a similar manner at a concentration of 36 mg mL-1 so that the substrate mixture contained 1%protein. The buffer used was Tris HCl at a concentration of 100 mM(to achieve a final pH in the assay of 7.0) or 3 M(to achieve final pH in the assay of either 7.0 or 8.0). The preservative used was 12 mMthiomersal, of which 92 mL was added per milliliter of assay mixture. The assay mixture comprised 900 mL of substrate and 300 mL of sample. Each mixture was shaken vigorously to ensure thorough mixing. Protease action is reported as the increase in free amino groups, measured by the fluorescamine method, during the incubation period of the assay. For quantification of free amino groups, the results were compared with a standard curve (0–40 mM) of the dipeptide Leu-Gly. The azocasein (Christen and Marshall 1984) and FITCcasein (Christen and Senica 1987) assays were carried out as previously described using chemicals obtained from Sigma Chemical Company. Unless stated otherwise, incubation for 24 h at 37C was used for both the azocasein and FITC-casein assays. The FITC-casein assay mixture comprised 69 mL of 0.25% type III FITC-casein in 10 mM sodium phosphate buffer at pH 8.0, and 17 mL of the UHT milk sample. Prior to fluorometric measurement at a wavelength of 490 nm (excitation) and 515 nm (emission), casein and unreacted FITC-caseinwere precipitatedwith 14 mL of 306 mMtrichloroacetic acid. Following centrifugation, 50 mL of the supernatant was added to 1.2 mL of 300 mM phosphate buffer at pH 8.5.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เคซีนวัว (ซิกเคมี บริษัท St. Louis, MO) มีส่วนยุบ โดยกวนในบัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้น 1% Skim นมผง (SMP โดย Fonterra [ออสเตรเลีย] เนชั่ลแนลจำกัด Cobden ออสเตรเลีย) พื้นผิวเตรียมไว้ในลักษณะคล้ายกันที่ความเข้มข้นของ 36 mg mL-1 เพื่อให้พื้นผิวผสมประกอบด้วยโปรตีน 1% บัฟเฟอร์ที่ใช้มีทริสเรทติ้ง HCl ที่ความเข้มข้น 100 มม. (เพื่อให้ค่า pH สุดท้ายในการทดสอบ 7.0) หรือ 3 M (เพื่อให้ค่า pH สุดท้ายในการทดสอบ 7.0 หรือ 8.0) MMthiomersal 12 ซึ่งเพิ่มมล 92 ละ milliliter ของทดสอบผสม preservative ใช้ได้ วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 900 mL ของพื้นผิว และ 300 มล.ของตัวอย่าง ส่วนผสมแต่ละถูกเขย่าโยคะให้ผสมอย่างละเอียด รติเอสดำเนินการรายงานเป็นการเพิ่มขึ้นในกลุ่มอะมิโนอิสระ วัดระยะฟักตัวของการวิเคราะห์ โดยวิธี fluorescamine การนับกลุ่มอะมิโนอิสระ ผลลัพธ์ถูกเปรียบเทียบกับเส้นโค้งมาตรฐาน (0-40 mM) ของ dipeptide Gly ลัว Azocasein (Christen และมาร์แชล 1984) และ FITCcasein (Christen และ Senica 1987) assays ถูกดำเนินการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็น การใช้สารเคมีที่ได้รับจาก บริษัทเคมีซิก เว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่น คณะทันตแพทยศาสตร์ใน 24 ชมที่ 37C ใช้สำหรับ azocasein และเคซีน FITC assays ผสมทดสอบ FITC-เคซีนที่ประกอบด้วยมล 69 0.25% ชนิด III FITC-เคซีนใน 10 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 8.0 และ 17 มล.ของตัวอย่างนมยูเอชที ก่อน fluorometric วัดที่มีความยาวคลื่น 490 นาโนเมตร (ในการกระตุ้น) และ 515 nm (มลพิษ), เคซีน และ unreacted FITC caseinwere precipitatedwith 14 มิลลิลิตรของกรด mMtrichloroacetic 306 ต่อ centrifugation, 50 mL ของ supernatant ถูกเพิ่มเข้าไป 1.2 mL 300 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 8.5

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เคซีนวัว (Sigma บริษัท เคมีเซนต์หลุยส์) ก็เลือนหายไปโดยกวนในบัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้น 1% นมผงพร่องมันเนย (SMP; จัดทำโดยฟอนเทียร่า [ออสเตรเลีย] Pty จำกัด Cobden, ออสเตรเลีย.) พื้นผิวที่ถูกจัดทำขึ้นในลักษณะที่คล้ายกันที่ความเข้มข้น 36 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร-1 เพื่อให้ส่วนผสมสารตั้งต้นที่มีโปรตีน 1% บัฟเฟอร์ที่ใช้เป็น Tris HCl ที่ความเข้มข้น 100 มิลลิเมตร (เพื่อให้บรรลุความเป็นกรดด่างสุดท้ายในการทดสอบของ 7.0) หรือ 3 เมตร (เพื่อให้บรรลุความเป็นกรดด่างสุดท้ายในการทดสอบทั้ง 7.0 หรือ 8.0) สารกันบูดที่ใช้คือ 12 mMthiomersal ซึ่ง 92 มิลลิลิตรถูกเพิ่มเข้ามาต่อมิลลิลิตรผสมทดสอบ ส่วนผสมทดสอบประกอบด้วย 900 มิลลิลิตรของพื้นผิวและ 300 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่าง ส่วนผสมแต่ละเขย่าแรง ๆ เพื่อให้แน่ใจว่าการผสมอย่างละเอียด การกระทำโปรตีเอสมีรายงานการเพิ่มขึ้นในกลุ่มอะมิโนอิสระที่วัดโดยวิธี fluorescamine ในช่วงระยะฟักตัวของการทดสอบ สำหรับปริมาณของกลุ่มอะมิโนอิสระผลมาเปรียบเทียบกับกราฟมาตรฐาน (0-40 มิลลิเมตร) dipeptide ลื้อ-Gly azocasein (ขนานและมาร์แชล 1984) และ FITCcasein (ขนานและ Senica 1987) การตรวจได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้การใช้สารเคมีที่ได้รับจาก บริษัท Sigma เคมี ถ้าอย่างนั้นบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37C ถูกนำมาใช้สำหรับทั้ง azocasein และการตรวจ FITC-เคซีน FITC-เคซีนส่วนผสมทดสอบประกอบด้วย 69 มล 0.25% ประเภท III FITC-เคซีนในบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต 10 มมที่ 8.0 ค่า pH, และ 17 มลตัวอย่างนมยูเอชที ก่อนที่จะมีการวัดฟลูออโรที่ความยาวคลื่น 490 นาโนเมตร (กระตุ้น) และ 515 นาโนเมตร (ปล่อยก๊าซเรือนกระจก), เคซีนและ unreacted FITC-caseinwere precipitatedwith 14 มิลลิลิตร 306 mMtrichloroacetic กรด ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยง 50 มิลลิลิตรใสถูกบันทึกอยู่ใน 1.2 มิลลิลิตร 300 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ pH 8.5

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เคซีนโปรตีน ( Sigma บริษัทเคมี ; St . Louis , MO ) ถูกละลายโดยกวนในบัฟเฟอร์ความเข้มข้น 1 % ส่วนหางนมผง ( SMP ; จัดโดยฟอนเทียร่า [ ออสเตรเลีย ] Pty . จำกัด Cobden , ออสเตรเลีย ) พื้นผิวที่เตรียมไว้ในลักษณะที่คล้ายกันที่ความเข้มข้นที่แน่นอนเพื่อให้พื้นผิว 36 มิลลิกรัมโปรตีนผสมอยู่ 1%บัฟเฟอร์ที่ใช้โดย HCl ความเข้มข้น 100 มม. ( เพื่อให้บรรลุขั้นสุดท้ายในการทดสอบ pH 7.0 ) หรือ 3 เมตร ( เพื่อให้บรรลุพีเอชสุดท้ายในการทดสอบของ 7.0 หรือ 8.0 ) สารกันบูดที่ใช้ 12 mmthiomersal ซึ่งมล 92 เพิ่มต่อมิลลิลิตร ผสม ตามลำดับ วิเคราะห์ส่วนผสมประกอบด้วย 900 ml ( 300 มล. ของกลุ่มตัวอย่าง ส่วนผสมแต่ละที่ถูกเขย่าอย่างแรงเพื่อให้ละเอียดผสมการสร้างรายงานเป็นเพิ่มอุ้มสม , ที่วัดโดยวิธีฟลูโอเรสคามีน ช่วงฟักตัวของแบคทีเรีย สำหรับปริมาณของหมู่อะมิโนอิสระเปรียบเทียบกับกราฟมาตรฐาน ( 0 – 40 มม. ) ของไดเปปไทด์ลิว GLY .การ azocasein ( คริสเตียน และมาร์แชล 1984 ) และ fitccasein ( คริสเตียน ) หมู่บ้านและ 1987 ) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ที่ใช้สารเคมีที่ได้รับจาก บริษัท ซิกม่า เคมี เว้นแต่จะระบุเป็นอย่างอื่น บ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ที่ 37c ใช้ทั้ง azocasein fitc เคซีนและ ) . การ fitc เคซีน ( ส่วนผสมประกอบด้วย 69 มล. 025% ประเภทที่ 3 fitc เคซีนใน 10 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ที่ pH 8.0 และ 17 มล. ของนม ยูเอชที ตัวอย่าง ก่อนการวัด fluorometric ที่ความยาวคลื่น 290 nm ( กระตุ้น ) และ 515 nm ( มลพิษ ) , เคซีน และเข้าสู่ fitc caseinwere precipitatedwith 14 ml ของ 306 mmtrichloroacetic กรด ปั่นต่อไป 50 ml ของน่านคือเพิ่ม 1.2 ml ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 8.5 300 mm .