MethodsPlasmid construction and P.

Methods
Plasmid construction and P. tricornutum transfection
Plasmid pBHR68 [25] was used as template for amplification
of phaA, phaB and phaC genes from R. eutropha
H16. For in vivo localization studies sequences were
cloned upstream to the eGFP (enhanced green fluorescent
protein) sequence into the vector pPha-NR, which
is a derivative of pPhaT1 with endogenous nitrate
reductase promoter/terminator flanking the multiple
cloning site [GenBank:JN180663]. The inducible nitrate
reductase promoter system was established earlier in the
diatom C. fusiformis by Poulsen et al. 2005 [26]. Transfection
proceeded as described previously [27] with the
exception that cells were grown under non-induced conditions
with NH4
+ as sole nitrogen source. For PHB
synthesis in P. tricornutum, the sequence for phaC was
cloned into the vector pPha-NR (not containing eGFP),
and sequences of phaA and phaB were inserted into the
vector pPha-DUAL[2xNR], which is a pPha-NR derivative
with two multiple cloning sites both under the control
of endogenous nitrate reductase promoter
[GenBank:JN180664]. Both plasmids were mixed and
co-transfected under non-induced conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการก่อสร้าง
พลาสมิดและพี tricornutum transfection
พลาสมิด pbhr68 [25] ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบสำหรับการขยาย
ของ phaa ยีน phab และ phac จาก r eutropha
H16 ในร่างกายสิ่งมีชีวิตท้องถิ่นลำดับการศึกษาที่ถูกโคลน
ต้นน้ำเพื่อ egfp (เพิ่มสีเขียวเรืองแสง
โปรตีน) ลำดับลงในเวกเตอร์ PPHA NR-ซึ่ง
เป็นที่มาของไนเตรตด้วย pphat1 ภายนอก
reductase ก่อการ / จบขนาบหลาย
โคลนเว็บไซต์ [genbank: jn180663] ระบบการก่อการไนเตรต
reductase กระตุ้นก่อตั้งขึ้นก่อนหน้านี้ใน
ไดอะตอมค fusiformis โดยพูลเอตอัล 2005 [26] transfection
ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [27] ​​ด้วย
ข้อยกเว้นว่าเซลล์ที่ปลูกภายใต้เงื่อนไขที่ไม่เกิดด้วย

NH4 แหล่งไนโตรเจนเป็น แต่เพียงผู้เดียว เพื่อ PHB
สังเคราะห์ในพีtricornutum ลำดับเพื่อ phac
ถูกโคลนเข้าไปในเวกเตอร์ PPHA NR-(ไม่ได้มี egfp)
และลำดับของ phaa และ phab ถูกแทรกลงในเวกเตอร์
PPHA คู่ [2xnr] ซึ่งเป็น PPHA NR-
อนุพันธ์ด้วย สองเว็บไซต์โคลนหลายทั้งสองภายใต้การควบคุมของไนเตรต
ภายนอก reductase ก่อการ
[genbank: jn180664] พลาสมิดทั้งสองผสมและ
ร่วม transfected ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่เกิด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธี
ก่อสร้าง Plasmid และ transfection P. tricornutum
Plasmid pBHR68 [25] ใช้เป็นต้นแบบสำหรับขยาย
ของยีน phaA, phaB และ phaC R. eutropha
H16 สำหรับการศึกษาในสัตว์ทดลองแปล ลำดับ
cloned ต้นน้ำไป eGFP (เพิ่มสีเขียวเรืองแสง
โปรตีน) ลำดับเป็นแบบเวกเตอร์ pPha-NR ซึ่ง
เป็นอนุพันธ์ของ pPhaT1 ด้วยไนเตรต endogenous
เทอร์มิเน reductase โปรโมเตอร์/เตอร์ flanking คูณ
โคลนไซต์ [GenBank:JN180663] ไนเตรต inducible
ระบบโปรโมเตอร์ reductase ได้ก่อตั้งขึ้นก่อนหน้านี้ในการ
ไดอะตอม fusiformis C. โดย Poulsen et al. 2005 [26] Transfection
ครอบครัวตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [27] กับการ
ว่า เซลล์เติบโตขึ้นภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ทำให้เกิดข้อยกเว้น
กับ NH4
เป็นแหล่งไนโตรเจนแต่เพียงผู้เดียว สำหรับ PHB
สังเคราะห์พี tricornutum ลำดับสำหรับ phaC ถูก
cloned เป็นแบบเวกเตอร์ pPha-NR (ไม่ประกอบด้วย eGFP),
และลำดับของ phaA phaB ถูกแทรก
เวกเตอร์ pPha-สอง [2xNR], ซึ่งเป็นอนุพันธ์ pPha NR
กับสอง โคลนหลายไซต์ทั้งภายใต้การควบคุม
ของโปรโมเตอร์ reductase ไนเตรต endogenous
[GenBank:JN180664] Plasmids ทั้งถูกผสม และ
transfected บริษัทภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ทำให้เกิดการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการ
plasmid การก่อสร้างและ p . tricornutum transfection
plasmid pbhr 68 [ 25 ]ได้ถูกใช้เป็นเทมเพลตสำหรับใช้การขยายเสียง
ของ phaa phac ยีนและ phab จาก R . H 16 eutropha
สำหรับในการศึกษาการแปลเอกสารข้อมูลเป็นลำดับไปยังสถานี Vivo
ตามลำดับต้นน้ำเพื่อ egfp (เพิ่มสีเขียวฟลูออเรสเซนต์
โปรตีน)จำลองไว้ในเวกเตอร์ที่ ppha - หมายเลขที่
ซึ่งจะช่วยเป็นงานที่ดัดแปลงมาจาก pphat 1 ด้วยดินประสิวเองในระยะยาว
ขนาบข้าง reductase ผู้ก่อการบริษัท/เพชฌฆาตไซต์การลอกแบบหลาย
[เลี้ยงดู: JN 180663 ] ระบบแนะนำจากแพทย์ inducible ดินประสิว
reductase ที่ถูกสร้างขึ้นเมื่อต้นในสำรวจ C .
diatom โดย poulsen et al . 2005 [ 26 ] transfection
ซึ่งจะช่วยดำเนินการตามที่ได้อธิบายไว้ก่อนหน้านี้[ 27 ]ด้วย
ยกเว้นที่เซลล์ได้เติบโต ภายใต้ เงื่อนไขไม่ก่อขึ้น

ด้วย NH 4 เป็นแหล่งไนโตรเจนแต่เพียงผู้เดียว สำหรับการสังเคราะห์ phb
ใน P .tricornutum ,ที่ตามลำดับสำหรับ phac
ซึ่งจะช่วยได้จำลองไว้เข้าไปในเวกเตอร์ ppha - หมายเลข(ไม่มี egfp ),
และลำดับของ phaa และ phab ก็ใส่เข้าไปใน
เวกเตอร์ ppha - คู่ xnr [ 2 ],ซึ่งเป็น ppha - NR ดัดแปลงมาจาก
พร้อมด้วยสองหลายสถานที่ทั้งการโคลนมนุษย์ ภายใต้ การควบคุม
เองในระยะยาว reductase ดินประสิวแนะนำจากแพทย์
[เลี้ยงดู: JN 180664 ] plasmids ทั้งสองเป็นแบบผสมและ
ร่วม - transfected ภายใต้ เงื่อนไขไม่ก่อขึ้น