A previous study by Kolacna et al.

A previous study by Kolacna et al. reported that B31 strain (ena1- 4Δ nha1Δ) lacking the K + and Na + efflux system shows sensitivity to higher external concentrations of alkali–metal–cation salts when transformed with a mammalian Kir2.1 channel [16]. We explored the potential of B31 cells as a tool for identifying the structural determinants of Kir2.1 channel functions by testing the mutants of Kir2.1. We selected V302M and 314/315 mutants, which are both responsible for human Andersen–Tawil syndrome that causes periodic paralysis and ventricular arrhythmias [20]. The V302M mutation is reported to disrupt K + ion conduction through G-loop without reducing the cell surface expression of the channel [21], while 314/315 (deletion of aa 314 and 315) is known to retain the channel in the Golgi [20,22]. Our flow cytometry (FCM) and western blot analyses of the transfected HEK293 cells confirmed the cell surface phenotypes of these mutant Kir2.1 channels (Fig. 1A). Slightly elevated surface expression of V302M mutant compared with the wild-type (Wt) Kir2.1 was consistent with the observations from other studies [21]. On this basis, we tested the growth of B31 cells transformed with these Kir2.1 constructs. Consistent with the previous report [16], the expression of Wt Kir2.1 showed a marked growth inhibition of B31 cells in high external KCl conditions such as 200 mM and higher (Fig. 1B, 2nd row). In contrast, both of the mutants V302M and 314/315 allowed growth of B31 at comparable level to that of vector-transformed cells (Fig. 1B, 1st, 3rd, and 4th rows). In B31 yeast cells, the 314/315 mutant channel showed somewhat lower expression than Wt and V302M channels did (Fig. 1C). This may represent possibly higher susceptibility of the intracellularly retained Kir2.1 channels to the proteolytic pathways in yeast, relative to the surface trafficking-competent channels

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การศึกษาก่อนหน้านี้โดย Kolacna et al. รายงานที่ B31 ต้องใช้ (ena1-4Δ nha1Δ) ขาด K + และ Na + efflux ระบบแสดงความไวต่อความเข้มข้นสูงไปที่ภายนอกของเกลือแอลคาไลโลหะ-cation เมื่อแปลงกับช่องสัญญาณ Kir2.1 mammalian [16] เราสำรวจศักยภาพของเซลล์ B31 เป็นเครื่องมือสำหรับระบุดีเทอร์มิแนนต์โครงสร้างของฟังก์ชันช่อง Kir2.1 โดยทดสอบสายพันธุ์ของ Kir2.1 เราเลือก V302M และสายพันธุ์ 314/315 ซึ่งทั้งสองรับผิดชอบกลุ่มแอนเดอร์ – Tawil มนุษย์ที่ทำให้เกิดอัมพาตเป็นครั้งคราวและหัวใจห้องล่าง arrhythmias [20] การกลายพันธุ์ V302M มีรายงานรบกวน K + ไอออนจึงผ่านวง G โดยไม่ลดค่าผิวเซลล์ของช่อง [21], ในขณะที่ 314/315 (ลบของ aa 314 และ 315) เป็นที่รู้จักกันเก็บไว้ช่องใน Golgi [20,22] ของเราเซลล์กระแส (FCM) และการวิเคราะห์คืนในตาตะวันตกของเซลล์ HEK293 transfected ยืนยันฟีผิวเซลล์เหล่านี้ช่อง Kir2.1 กลายพันธุ์ (Fig. 1A) ค่าสูงขึ้นเล็กน้อยพื้นผิวของ mutant V302M เปรียบเทียบกับ Kir2.1 (Wt) ชนิดของป่าสอดคล้องกับข้อสังเกตจากการศึกษาอื่น [21] ในนี้ เราทดสอบการเจริญเติบโตของเซลล์ B31 ที่แตกต่างโครงสร้างเหล่านี้ Kir2.1 สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ [16], นิพจน์ของ Wt Kir2.1 พบการเติบโตเครื่องยับยั้งเซลล์ B31 สูงภายนอก KCl สภาพ เช่น 200 มม. และสูง (Fig. 1B แถวที่ 2) ในทางตรงกันข้าม ทั้งสายพันธุ์ V302M และ 314/315 ได้เจริญเติบโตของ B31 ที่ระดับเทียบกับเวกเตอร์แปลงเซลล์ (Fig. 1B, 1, 3 และ 4 แถว) ในเซลล์ยีสต์ที่ B31, 314/315 กลายพันธุ์ช่องแสดงนิพจน์ค่อนข้างต่ำกว่าช่อง Wt และ V302M ไม่ได้ (Fig. 1C) นี้อาจหมายถึงความไวสูงอาจของช่อง Kir2.1 intracellularly สะสมให้มนต์ proteolytic ในยีสต์ สัมพันธ์กับช่องค้าเชี่ยวชาญผิว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษาก่อนหน้านี้โดย Kolacna et al, รายงานว่าสายพันธุ์ B31 (ena1- 4Δnha1Δ) ขาด k + + นาและระบบไหลแสดงให้เห็นถึงความไวต่อความเข้มข้นภายนอกที่สูงขึ้นของเกลือด่างโลหะไอออนบวกกับเมื่อเปลี่ยนช่อง Kir2.1 เลี้ยงลูกด้วยนม [16] เราสำรวจศักยภาพของเซลล์ B31 เป็นเครื่องมือสำหรับการระบุปัจจัยโครงสร้างของฟังก์ชั่นช่อง Kir2.1 โดยการทดสอบการกลายพันธุ์ของ Kir2.1 เราเลือก V302M และ 314/315 กลายพันธุ์ซึ่งมีทั้งความรับผิดชอบสำหรับมนุษย์โรคเซน-ถวิลที่ทำให้เกิดอัมพาตเป็นระยะ ๆ และภาวะมีกระเป๋าหน้าท้อง [20] การกลายพันธุ์ V302M เป็นรายงานที่ส่งผลกระทบต่อการนำ K + ไอออนผ่าน G-ห่วงโดยไม่ต้องลดการแสดงออกเซลล์ผิวของช่อง [21] ในขณะที่ 314/315 (AA ลบ 314 และ 315) เป็นที่รู้จักกันที่จะรักษาช่องทางในกอลไจที่ [ 20,22] โฟของเรา (FCM) และดวงตะวันวิเคราะห์เซลล์ transfected HEK293 ยืนยัน phenotypes เซลล์ผิวของช่องทางเหล่านี้ Kir2.1 กลายพันธุ์ (รูป. 1A) การแสดงออกของพื้นผิวสูงขึ้นเล็กน้อยจากการกลายพันธุ์ V302M เมื่อเทียบกับป่าประเภท (น้ำหนัก) Kir2.1 สอดคล้องกับข้อสังเกตจากการศึกษาอื่น ๆ [21] บนพื้นฐานนี้เราได้ทดสอบการเจริญเติบโตของเซลล์ B31 เปลี่ยนกับโครงสร้าง Kir2.1 เหล่านี้ สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ [16] การแสดงออกของน้ำหนัก Kir2.1 พบว่าการยับยั้งการเจริญของเซลล์ที่ทำเครื่องหมายไว้ B31 ในสภาพ KCl ภายนอกสูงเช่น 200 มิลลิและสูงกว่า (รูป. 1B, แถวที่ 2) ในทางตรงกันข้ามทั้งสองกลายพันธุ์ V302M 314/315 และได้รับอนุญาตให้การเจริญเติบโตของ B31 ในระดับเทียบเท่ากับที่ของเซลล์เวกเตอร์เปลี่ยน (รูป. 1B, 1, 3 และแถวที่ 4) ใน B31 เซลล์ยีสต์ที่ 314/315 ช่องกลายพันธุ์ที่แสดงให้เห็นการแสดงออกที่ค่อนข้างต่ำกว่าน้ำหนักและช่องทาง V302M ได้ (รูป. 1C) นี้อาจเป็นตัวแทนของความไวที่สูงขึ้นอาจจะเป็นของสะสมภายในเซลล์ช่อง Kir2.1 กับวิถีโปรตีนในยีสต์เทียบกับพื้นผิวที่ช่องการค้ามนุษย์ที่มีความสามารถ