To prepare the MALDI target plates,

To prepare the MALDI target plates, 1 mL of the supernatant
containing the bacterial proteins was placed onto
a steel target plate (MSP 96 polished-steel target; Bruker
Daltonics, Bremen, Germany) and allowed to air-dry. The
dried supernatant was overlaid with 1 mL of matrix solution,
which consisted of a-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid
(CHCA) dissolved in 50% acetonitrile and 2.5% trifluoroacetic
acid.
For the intact cell method (ICM), the washed bacteria
pellet (w0.1 g)was diluted in 1 mL ofwater and acetonitrile
(1:1 vol/vol). A volume of 1 mL of the obtained solution was
directly spotted on the MALDI plate and the CHCA matrix
was added as described previously.
The matrix-assisted laser desorption ionization timeof-
flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) analysis
was performed in a Bruker Microflex LT MALDI-TOF-MS
operated in the linear mode and equipped with a 337-
nm nitrogen laser using FlexControl 3.3 software (Bruker
Daltonics). The mass spectra were collected within the
mass range of m/z 2000 to 20,000. The instrument settings
were as follows: ion source 1 at 19.50 kV, ion source 2 at
18.25 kV, lens at 6.49 kV, and an extraction delay time of 4
ns. The instrument was externally calibrated with the
bacterial test standard supplied by Bruker Daltonics. The
bacterial test standard is an Escherichia coli extract
including the additional proteins RNase A and myoglobin.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเตรียมแผ่น MALDI เป้าหมาย 1 mL ของ supernatantประกอบด้วยโปรตีนจากแบคทีเรียถูกวางลงบนจานเหล็กเป้าหมาย (เป้าหมายเหล็กขัดเงา MSP 96 BrukerDaltonics เบรเมน เยอรมนี) และอนุญาตให้ air-dry ที่supernatant แห้งเป็น overlaid กับ mL 1 ของเมตริกซ์ซึ่งประกอบด้วยกรดที่-cyano-4-hydroxy-cinnamic(CHCA) ละลายใน trifluoroacetic acetonitrile และ 2.5% เป็น 50%กรดสำหรับเซลล์เหมือนเดิมวิธี (ICM), แบคทีเรียหินเม็ด (w0.1 g) ถูกทำให้เจือจางใน ofwater 1 มิลลิลิตร acetonitrile(1:1 vol/vol) ปริมาตรของ 1 mL ของโซลูชันที่ได้รับถูกด่างโดยตรงบนแผ่น MALDI และเมทริกซ์ CHCAมีเพิ่มตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เลเซอร์ช่วยเมตริกซ์ desorption ionization timeof-เที่ยวบินโตรเมทรี (MALDI TOF MS) วิเคราะห์มีดำเนินการในการ Bruker Microflex LT MALDI-TOF-MSดำเนินการในวิธีเชิงเส้น และ มี 337 การ -เลเซอร์ไนโตรเจน nm โดยใช้ซอฟต์แวร์ FlexControl 3.3 (BrukerDaltonics) แรมสเป็คตราจำนวนมากถูกเก็บรวบรวมภายในช่วงใหญ่ของ m/z 2000-20000 การตั้งค่าเครื่องมือมีดังนี้: แหล่งไอออน 1 ที่ 19.50 kV แหล่งไอออน 2 ที่18.25 kV เลนส์ที่ 6.49 kV และเวลาที่ล่าช้าการสกัดของ 4ns เครื่องมือถูกปรับเทียบภายนอกด้วยการมาตรฐานทดสอบเชื้อแบคทีเรียโดย Bruker Daltonics ที่แบบมาตรฐานทดสอบแบคทีเรีย Escherichia coli ส่วนรวมทั้งโปรตีนเพิ่มเติม RNase A และไมโยโกลบิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อเตรียมความพร้อมแผ่นเป้าหมาย MALDI, 1 มิลลิลิตรของสารละลาย
ที่มีโปรตีนจากแบคทีเรียถูกวางลงบน
แผ่นเหล็กเป้าหมาย (MSP 96 เป้าหมายขัดเหล็ก Bruker
Daltonics เบรเมนเยอรมนี) และได้รับอนุญาตให้แห้ง
ใสแห้งบุด้วย 1 มิลลิลิตรของสารละลายเมทริกซ์
ซึ่งประกอบด้วย-cyano-4-hydroxy-กรดซินนามิก
(CHCA) ละลายใน acetonitrile 50% และ 2.5% Trifluoroacetic
กรด.
สำหรับวิธีการเซลล์เหมือนเดิม (ICM) ล้าง แบคทีเรีย
เม็ด (w0.1 กรัม) ถูกเจือจางใน 1 มิลลิลิตรน้ำธรรมชาติและ acetonitrile
(1: 1 ปริมาตร / ปริมาตร) ปริมาณของ 1 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาที่ได้มา
เห็นโดยตรงบนแผ่น MALDI และเมทริกซ์ CHCA
ถูกเพิ่มเข้ามาตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้.
เมทริกซ์ช่วยเลเซอร์คายไอออไนซ์ timeof-
มวลสารบิน (MALDI-TOF-MS) การวิเคราะห์
ได้รับการดำเนินการใน Bruker Microflex LT MALDI-TOF-MS
ดำเนินการในโหมดการเชิงเส้นและการติดตั้ง 337-
เลเซอร์ไนโตรเจนนาโนเมตรโดยใช้ซอฟแวร์ flexControl 3.3 (Bruker
Daltonics) สเปกตรัมมวลที่ถูกเก็บรวบรวมใน
ช่วงที่มวลของม. / Z 2000 ถึง 20,000 การตั้งค่าเครื่องมือ
มีดังนี้แหล่งกำเนิดไอออน 1 ที่ 19.50 กิโลโวลต์, แหล่งกำเนิดไอออน 2 ที่
18.25 กิโลโวลต์เลนส์ที่ 6.49 กิโลโวลต์และการหน่วงเวลาการสกัด 4
ns เครื่องมือที่ใช้ในการสอบเทียบที่ได้รับจากภายนอกที่มี
มาตรฐานการทดสอบแบคทีเรียจัดทำโดย Bruker Daltonics
มาตรฐานการทดสอบแบคทีเรียเป็นสารสกัดจากเชื้อ Escherichia coli
รวมทั้งโปรตีนเพิ่มเติม RNase และ myoglobin

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่เตรียมมา ดิ จาน เป้าหมาย 1 มิลลิลิตร และน่าน
ที่มีโปรตีนจากแบคทีเรียที่ถูกวางไว้บน
เหล็กแผ่น ( MSP เป้าหมาย 96 เหล็กขัดเป้าหมาย บรุคเกอร์
daltonics เบรเมน , เยอรมัน ) และอนุญาตให้อากาศแห้ง
น่านแห้งถูกหุ้มด้วย 1 มิลลิลิตรของเมทริกซ์ซึ่งประกอบด้วย a-cyano-4-hydroxy-cinnamic โซลูชัน

( ทั้งสอง ) ที่ละลายในกรดไน 50% และ 2.5% trifluoroacetic
กรด .
สำหรับวิธีการเซลล์เหมือนเดิม ( ICM ) , ล้างแบคทีเรีย
เม็ด ( w0.1 กรัม ) เจือจางในน้ำ 1 มิลลิลิตร และ ไน
( 1 : 1 Vol / Vol ) ปริมาณ 1 มิลลิลิตรของสารละลายด่าง
ได้โดยตรงบนมา ดิ จาน และทั้งสองเมทริกซ์
เพิ่มตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ .
เมทริกซ์ช่วยดูดซับอิออนเลเซอร์เพิ่มเที่ยวบิน Mass Spectrometry ( -

maldi-tof-ms ) การวิเคราะห์แสดงในบรุคเกอร์ microflex มัน maldi-tof-ms
ดำเนินการในโหมดการเชิงเส้นและพร้อม 337 -
เลเซอร์ไนโตรเจน nm ใช้ flexcontrol 3.3 ซอฟต์แวร์ ( BRUKER
daltonics ) มวลสเปกตรัมในการเก็บรวบรวมภายใน
ช่วงมวลของ M / Z 2 , 000 , 000 . การตั้งค่าเครื่องมือ
ดังนี้รายละเอียดแหล่งที่ 1 19.50 กิโลแหล่งกำเนิดไอออน 2 ที่
18.25 KV , เลนส์ที่ 6.49 KV และการสกัดการประวิงเวลาของ 4
2 .เครื่องมือที่ใช้คือภายนอกเทียบกับ
แบคทีเรียทดสอบมาตรฐาน จัดโดย บรูกเกอร์ ดอลโทนิก .
มาตรฐานการทดสอบแบคทีเรียเป็นแบคทีเรีย Escherichia coli โปรตีนสกัด
รวมทั้งเพิ่มเติมเลสและไมโอโกลบิน .