The development of a reliable metho

The development of a reliable method of using PCR for detection of Cryptosporidium oocysts in environmental samples with oligonucleotide primers which amplify a portion of the sequence encoding the small (18S) subunit of rRNA producing a 435-bp product was demonstrated. The PCR assay was found to provide highly genus-specific detection of Cryptosporidium spp. after release of nucleic acids from oocysts by a simple freeze-thaw procedure. The assay routinely detected 1 to 10 oocysts in purified oocyst preparations, as shown by direct microscopic counts and by an immunofluorescence assay. The sensitivity of the PCR assay in some seeded environmental water samples was up to 1,000-fold lower. However, this interference was eliminated by either flow cytometry or magnetic-antibody capture. Sensitivity was also improved 10- to 1,000-fold by probing of the PCR product on dot blots with an oligonucleotide probe detected by chemiluminescence. Confirmation of the presence of Cryptosporidium oocysts in water samples from the outbreak in Milwaukee, Wis., was obtained with this technique, and PCR was found to be as sensitive as immunofluorescence for detection of oocysts in wastewater concentrates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การพัฒนาวิธีที่เชื่อถือได้ของการใช้ PCR สำหรับตรวจพบ oocysts เพิ่มในตัวอย่างสิ่งแวดล้อมกับไพรเมอร์ oligonucleotide ที่ขยายส่วนของลำดับการเข้ารหัสย่อยขนาดเล็ก (18S) ของ rRNA ที่ผลิตผลิตภัณฑ์ 435-bp ได้แสดง ทดสอบ PCR พบให้ตรวจเฉพาะสกุลสูงของโอเพิ่มหลังจากการย่อยของกรดนิวคลีอิกจาก oocysts โดยขั้นตอนง่าย ๆ ตรึง-thaw การทดสอบตรวจพบ oocysts 1 ถึง 10 ใน oocyst บริสุทธิ์เตรียม ประจำแสดง โดยนับตรงด้วยกล้องจุลทรรศน์ และการ immunofluorescence assay ความไวของการทดสอบ PCR ในตัวอย่างน้ำสิ่งแวดล้อม seeded ได้ต่ำถึง 1,000-fold อย่างไรก็ตาม สัญญาณรบกวนนี้ถูกตัดออก โดยเซลล์ไหลหรือแม่เหล็กแอนติบอดีจับ ยังได้พัฒนาไว 10 - การ 1,000 - fold โดยอาศัยผลิตภัณฑ์ PCR ในกันบล็อทจุดด้วยโพรบ oligonucleotide ตรวจพบ โดย chemiluminescence ยืนยันสถานะของ oocysts เพิ่มในตัวอย่างน้ำจากการระบาดของโรคในมิลวอกี Wis. กล่าว ด้วยเทคนิคนี้ และ PCR พบน้อยเป็นเป็น immunofluorescence ตรวจ oocysts ในสารสกัดน้ำเสีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การพัฒนาวิธีการที่เชื่อถือของการใช้วิธี PCR ในการตรวจหา Cryptosporidium oocysts ในตัวอย่างด้านสิ่งแวดล้อมที่มีไพรเมอร์ oligonucleotide ซึ่งขยายส่วนของลำดับการเข้ารหัสที่ขนาดเล็ก (18S) หน่วยย่อยของ rRNA ผลิตสินค้า 435 bp ได้แสดงให้เห็น การทดสอบ PCR พบว่าให้การตรวจจับสูงประเภทเฉพาะของเอสพีพี Cryptosporidium หลังจากการเปิดตัวของกรดนิวคลิอิกจาก oocysts โดยขั้นตอนการแช่แข็งละลายง่าย การทดสอบการตรวจพบเป็นประจำ 1-10 oocysts บริสุทธิ์ในการเตรียมการ oocyst ที่แสดงโดยนับกล้องจุลทรรศน์โดยตรงและโดยการทดสอบอิมมูโน ความไวของการทดสอบวิธี PCR ในตัวอย่างน้ำสิ่งแวดล้อมบางเมล็ดเพิ่มขึ้นถึง 1,000 เท่าลดลง อย่างไรก็ตามการรบกวนนี้ถูกกำจัดโดยการไหลทั้งภูมิคุ้มกันหรือจับแม่เหล็กแอนติบอดี ความไวแสงนอกจากนี้ยังได้รับการปรับปรุง 10 ถึง 1,000 เท่าโดยละเอียดของผลิตภัณฑ์ PCR ใน blots จุดที่มีการสอบสวน oligonucleotide ตรวจพบโดย chemiluminescence ยืนยันการปรากฏตัวของ Cryptosporidium oocysts ในตัวอย่างน้ำจากการระบาดในมิลวอกี, Wis. ได้ด้วยเทคนิคนี้และ PCR พบว่ามีความละเอียดอ่อนเป็นอิมมูโนสำหรับการตรวจสอบของ oocysts เข้มข้นในน้ำเสีย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพัฒนาวิธี PCR เพื่อตรวจสอบความน่าเชื่อถือของการใช้ของ Cryptosporidium oocysts ในตัวอย่างสิ่งแวดล้อมด้วย ซึ่งไพรเมอร์ซึ่งขยายส่วนของลำดับการเข้ารหัสเล็ก ( 18S rRNA ) รวมทั้งการผลิตสินค้า 435 เบสอีกด้วย การตรวจวิเคราะห์พบว่ามีการ Cryptosporidium spp . ชนิดที่เฉพาะเจาะจงสูงหลังจากการเปิดตัวของกรดนิวคลีอิก จาก oocysts โดยกระบวนการละลายง่าย ( ตรวจพบ 1 ใน 10 oocysts บริสุทธิ์การเตรียมโอโอซิส ตามที่แสดงโดยนับด้วยกล้องจุลทรรศน์โดยตรงและโดยวิธีการทดสอบ ความไวของวิธี PCR assay ในบางเมล็ดสิ่งแวดล้อมน้ำ จำนวนถึง 1 , 000 เท่า ลด อย่างไรก็ตามการรบกวนนี้ถูกให้ไหล ( หรือจับ ) แม่เหล็ก นอกจากนี้ยังปรับปรุงความไว 10 - 1000 พับโดยละเอียดของผลิตภัณฑ์ PCR ในจุดที่ตรวจพบ ซึ่งไม้เคมีลูมิเนสเซน . การยืนยันการปรากฏตัวของ Cryptosporidium oocysts ในตัวอย่างน้ำจากการระบาดของโรคในมิลวอกี , WIS . ได้ด้วยเทคนิคนี้และ PCR พบว่ามีความไวเป็นวิธีตรวจหา oocysts ในน้ำเสียเข้มข้น .