Clones were hybridized to total DNA

Clones were hybridized to total DNA samples (7 pg) from seven unrelated individuals that had been digested with vari- ous restriction endonucleases according to the manufacturer (Boehringer), separated on 0.8% agarose gels in 1X TBE buffer, pH 8.3, for 18-20 hr and transferred to nylon mem- branes (AmershamH ybondN ) by aP harmaciaV acuGene apparatus. DNA was fixed to the filters by baking for 2 hr at 80”. Membranes were prehybridized for 2 hr at 42“ in 55% formamide, 5X SSPE, 5X Denhardt’s solution, 0.5% SDS, and 200 pg/ml RNA (from Torula yeast) in a Robbins hybridiza- tion incubator. Hybridizations were carried out overnight in 55% formamide, 5X SSPE, 0.2% SDS and 200 pg/ml RNA at 42”. Filters were washed twice for 20 min in 2X SSC, 0.2% SDS at room temperature. Restriction fragments were detected by the chemiluminescent assay of TIZARD et al. (1990) by applica- tion of 0.125 mM AMPPD (Tropix) to the filters and subse- quent exposure to Kodak XK-1 X-ray film for 4-5 hr. The criteria set for identifying a polymorphism was the observation of at least one heterozygote amongt he seven individuals scored for at least one of the four restriction enzymes repre- sented on a screening blot. See POGSON (1994) and POGSON and ZOUROS (1994) for more details

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โคลนได้ไฮบริดเพื่อรวมตัวอย่างดีเอ็นเอ (7 pg) จากเจ็ดคนไม่เกี่ยวข้องที่มีการย่อยสลาย ด้วยภาพ ou ที่อยู่จำกัด endonucleases ตามที่ผู้ผลิต (Boehringer), แยกบนเจ agarose 0.8% ใน 1 X TBE บัฟเฟอร์ pH 8.3, 18-20 ชั่วโมง และโอนไปไนล่อน mem-branes (AmershamH ybondN) โดย aP harmaciaV acuGene เครื่อง ดีเอ็นเอถูกแก้ไขตัวกรองการเอ่ยชม 2 ที่ 80" เยื่อหุ้มถูก prehybridized สำหรับ 2 ชั่วโมงที่ 42 นิ้วใน formamide 55%, 5 X SSPE, 5 X Denhardt ของโซลูชัน 0.5% SDS และ 200 pg/ml RNA (จากยีสต์ Torula) ในตู้อบ hybridiza-ทางการค้าที่ร็อบบินส์ Hybridizations ดำเนินการใน 55% formamide, 5 X SSPE, 0.2% SDS และ 200 pg/ml RNA ที่ 42 นิ้ว ตัวกรองถูกล้างสองครั้งสำหรับ 20 นาทีใน 2 X SSC, 0.2% SDS ที่อุณหภูมิห้อง บางส่วนของข้อจำกัดถูกตรวจพบ โดย assay chemiluminescent ของ TIZARD et al. (1990) โดยทางการกอนหนาค้า 0.125 มม. AMPPD (Tropix) ฟิลเตอร์และแสงเข่น quent ฟิล์มเอ็กซเรย์ Kodak XK-1 4-5 ชั่วโมง ตั้งค่าเงื่อนไขสำหรับการระบุความแตกต่างถูกสังเกตน้อยหนึ่ง heterozygote amongt เขาเจ็ดคนของเอนไซม์จำกัดสี่ยิ่ง sented ในบล็อทคัดกรองอย่างน้อยหนึ่งทำประตู ดู POGSON (1994) และ POGSON และ ZOUROS (1994) รายละเอียดเพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โคลนถูกไฮบริดรวมตัวอย่างดีเอ็นเอ (7 PG) จากเจ็ดบุคคลที่ไม่เกี่ยวข้องที่ได้รับการย่อยด้วยข้อ จำกัด ภายใต้กฎระเบียบตัวแปร endonucleases ตามที่ผู้ผลิต (Boehringer) แยกจากกันบน 0.8% agarose เจลใน 1X TBE บัฟเฟอร์ค่า pH 8.3 สำหรับ 18- 20 HR และโอนไปยังหน่วยความ Branes ไนลอน (AmershamH ybondN) โดยอุปกรณ์ AP harmaciaV acuGene DNA ถูกจับจ้องไปที่ฟิลเตอร์โดยการอบเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 80 " เยื่อถูก prehybridized เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 42 "ใน 55% formamide, 5X SSPE วิธีการแก้ปัญหาของ 5X Denhardt, 0.5% SDS 200 และ PG / ml อาร์เอ็นเอ (จาก Torula ยีสต์) ในร็อบบินส์ hybridiza- ศูนย์บ่มเพาะการ Hybridizations ได้ดำเนินการค้างคืนใน formamide 55% 5X SSPE, SDS 0.2% และ 200 PG / ml RNA ที่ 42 " ฟิลเตอร์ถูกล้างสองครั้งเป็นเวลา 20 นาทีใน 2X SSC 0.2% SDS ที่อุณหภูมิห้อง ชิ้นส่วนข้อ จำกัด ถูกตรวจพบโดยการทดสอบ chemiluminescent ของเซอร์ด et al, (1990) โดยการประยุกต์ใช้ของ 0.125 มิลลิ AMPPD (Tropix) การกรองและการสัมผัส Quent subse- เพื่อ Kodak ฟิล์ม XK-1 X-ray สำหรับ 4-5 HR เกณฑ์ที่กำหนดสำหรับการระบุความแตกต่างคือการสังเกตอย่างน้อยหนึ่ง heterozygote amongt เขาเจ็ดบุคคลที่ได้คะแนนอย่างน้อยหนึ่งในสี่ของเอนไซม์ข้อ จำกัด repre- sented บน blot การตรวจคัดกรอง ดู Pogson (1994) และ Pogson และ ZOUROS (1994) สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม