2. Materials and methods2.1. Plasmi

2. Materials and methods
2.1. Plasmid construction
Plasmids were constructed using standard recombinant technique
[14]. The codon-optimized GLP-1 analogue gene was synthesized by
PCR based on the designed sequence using long sense and antisense
oligonucleotides with overlaps of 18 nt as primers using high fidelity
Taq polymerase. This GLP-1 analogue gene was introduced between
amino acid positions 109 and 110 of 26 kDa globulin cDNA by two-
overlap extension PCR method, and then fused to 980 bp globulin
promoter. The EcoRI–Sse8387I fragment of Glb promoter-globulin
(GLP-1 analogue)-Nos terminator was ligated into the EcoRI–
Sse8387I site of pTL7 to produce pGlbGLP. The KpnI fragment of
the CaMV35S promoter-hph-Nos terminator was ligated into the inter-
nal KpnI site of the R/RS cassette of pNPI130PUC to produce
pNPI130Hm [12]. The Sse8387I fragment of pNPI130Hm was cloned
into the Sse8387I site of pGlbGLP to produce pGlbGLP130Hm.
2.2. Transformation
This pGlbGLP130Hm was introduced into Agrobacterium tumefac-
iens strain EHA105 by electroporation [15].
Corresponding author. Fax: [phone].
E-mail address: takaiwa@nias.affrc.go.jp (F. Takaiwa).
1
*
These authors contributed equally to the paper.
0014-5793/$30.00 Ó 2005 Federation of European Biochemical Societies. Published by Elsevier B.V. All rights reserved.
doi:10.1016/j.febslet.2004.12.082

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. plasmid ก่อสร้าง Plasmids ถูกสร้างโดยใช้เทคนิค recombinant มาตรฐาน[14] . การปรับรหัสพันธุกรรม GLP 1 อนาล็อกยีนถูกสังเคราะห์โดยตามลำดับที่ออกแบบโดยใช้ความยาวและ antisense PCRoligonucleotides มีการทับซ้อนของ 18 nt เป็นไพรเมอร์ที่ใช้ fidelity สูงพอลิเมอเรส Taq ยีนนี้อนาล็อก GLP-1 ถูกนำมาใช้ระหว่างกรดอะมิโนตำแหน่ง 109 และ 110 26 kDa กลอบูลิน cDNA โดย 2ทับซ้อนนามสกุลวิธี PCR แล้ว fused ไป 980 bp กลอบูลินโปรโมเตอร์ ส่วน EcoRI – Sse8387I ของกลอบูลิน Glb โปรโมเตอร์(อนาล็อก GLP 1) -หมายเลขเทอร์มิเนเตอร์ถูกควบเข้า EcoRI –เว็บไซต์ Sse8387I ของ pTL7 ในการผลิต pGlbGLP ส่วน KpnI ของเทอร์มิเนเตอร์หมายเลข hph โปรโมเตอร์ CaMV35S ถูกควบเข้าอินเตอร์-nal KpnI ไซต์ของเทป R/RS ของ pNPI130PUC ในการผลิตpNPI130Hm [12] ส่วน Sse8387I ของ pNPI130Hm ถูกโคลนในเว็บไซต์ Sse8387I ของ pGlbGLP ในการผลิต pGlbGLP130Hm2.2 การเปลี่ยนแปลง PGlbGLP130Hm นี้ถูกนำเข้าสู่อโกรแบคทีเรียม tumefac-iens สายพันธุ์ EHA105 โดย electroporation [15] ผู้ที่เกี่ยวข้อง โทรสาร: [phone]ที่อยู่อีเมล์: takaiwa@nias.a ffrc.go.jp (F. Takaiwa)1*ผู้เขียนเหล่านี้ส่วนเท่า ๆ กับกระดาษ0014-5793 / $30.00 Ó 2005 สภาของสังคมยุโรปชีวเคมี เผยแพร่ โดย Elsevier b.v สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดdoi:10.1016/j.febslet.2004.12.082

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 พลาสมิดก่อสร้าง
พลาสมิดที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้เทคนิค recombinant มาตรฐาน
[14] GLP-1 ยีนอะนาล็อก codon ที่ดีที่สุดได้รับการสังเคราะห์โดย
วิธี PCR ขึ้นอยู่กับลำดับการออกแบบโดยใช้ความรู้สึกยาวและ antisense
oligonucleotides ทับซ้อนกับ 18 เอ็นทีเป็นไพรเมอร์โดยใช้ delity ไฟสูง
โพลิเมอร์ Taq นี้ GLP-1 ยีนอะนาล็อกได้รับการแนะนำระหว่าง
กรดอะมิโนตำแหน่ง 109 และ 110 26 กิโลดาลตันโกลบูลิ cDNA โดยสอง
ขยายทับซ้อนวิธี PCR และหลอมรวมแล้ว 980 bp โกลบูลิ
โปรโมเตอร์ EcoRI-Sse8387I ส่วนของ Glb โปรโมเตอร์ globulin
(GLP-1 แบบอะนาล็อก) เทอร์มิ -Nos ถูกผูกเข้า EcoRI-
เว็บไซต์ Sse8387I ของ pTL7 การผลิต pGlbGLP ส่วน KpnI ของ
CaMV 35S ต่อเทอร์มิโปรโมเตอร์ HPH-Nos ถูกผูกเข้าระหว่าง
เว็บไซต์ KpnI NAL ของเทป R / อาร์เอสของ pNPI130PUC การผลิต
pNPI130Hm [12] ส่วน Sse8387I ของ pNPI130Hm เป็นโคลน
เข้าไปในเว็บไซต์ของ Sse8387I pGlbGLP การผลิต pGlbGLP130Hm.
2.2 การเปลี่ยนแปลง
pGlbGLP130Hm นี้ถูกนำเข้าสู่ Agrobacterium tumefac-
โดยไป EHA105 ความเครียดโดย electroporation [15].
ผู้เขียนที่สอดคล้องกัน แฟกซ์: 81 29 838 8397.
อีเมล์:. takaiwa@nias.a FF rc.go.jp (เอฟ Takaiwa)
1
*
ผู้เขียนเหล่านี้มีส่วนอย่างเท่าเทียมกันกับกระดาษ.
0014-5793 / $ 30.00 Ó 2005 สภาสังคมชีวเคมียุโรป . จัดทำโดย Elsevier BV สงวนลิขสิทธิ์.
ดอย: 10.1016 / j.febslet.2004.12.082

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . พลาสมิดที่สร้างขึ้นโดยใช้มาตรฐานแนนท์พลาสมิด

) [ 14 ] รหัสของกรดอะมิโนที่ดีที่สุด glp-1 อนาล็อกยีนถูกสังเคราะห์โดย
PCR ตามออกแบบลำดับการใช้ความรู้สึกและ antisense
โอลิโกนิวคลีโอไทด์กับทับ 18 NT เป็นไพรเมอร์ใช้วิธีสูง delity
จึงได้ดี . นี้ glp-1 อนาล็อกเป็นที่รู้จักระหว่าง
ยีนกรดอะมิโนตำแหน่ง 109 และ 110 26 kDa กลอบูลิน cDNA โดยสอง -
ซ้อนส่งเสริมวิธีพีซีอาร์ แล้วผสมกับ 980 bp เมืองน้ำหอม
โปรโมเตอร์ ชิ้นส่วนสำหรับชิ้นส่วนของโปรโมเตอร์ที่ sse8387i GLB
( glp-1 อนาล็อก ) - NOS Terminator เป็นผูกเข้าด้วย -
sse8387i เว็บไซต์ของ ptl7 ผลิต pglbglp . ในส่วนของการ kpni
camv35s hph NOS Terminator ถูกผูกลงในอินเตอร์ -
จำหน่าย kpni เว็บไซต์ของ R / RS เทปของ pnpi130puc ผลิต
pnpi130hm [ 12 ] ในส่วนของ pnpi130hm sse8387i ถูกโคลนเข้าไปในเว็บไซต์ของ pglbglp
sse8387i ผลิต pglbglp130hm .
2.2 . การเปลี่ยนแปลงนี้ใช้เป็น pglbglp130hm
-
iens เชื้อ Agrobacterium tumefac ถ่ายยีนพบในสายพันธุ์ EHA105 โดย electroporation [ 15 ] .
เขียนที่สอดคล้องกัน โทรสาร : 0 29 แล้ว 8397 .
e - mail address : takaiwa @ Nias . ff rc.go.jp ( Ftakaiwa )
1
*
เหล่านี้ผู้เขียนมีส่วนร่วมอย่างเท่าเทียมกันในกระดาษ 0014-5793 /
$ 30.00 Ó 2005 สหพันธ์สมาคมเคมียุโรป ที่ตีพิมพ์โดยเอลส์เท่าสงวนลิขสิทธิ์ ดอย : 10.1016 /



2004.12.082 j.febslet .