2.9. Production of crude extractsTh

2.9. Production of crude extracts

The isolates showing potential antibacterial activities from the primary screening was subjected to solid state and submerged state fermentation methods to produce crude extracts.

2.9.1. Solid state fermentation method
In this method, 100 g of the substrate (rice grain) was taken in to 500 mL conical flask and 100 mL of distilled water was added and boiled until the rice grains become softened. The mineral salt solution such as K2HPO4 (2.00 g/L), NaCl (1.00 g/L), MgSO4.7H2O (0.10 g/L) and CaCl2 (0.05 g/L) was added for optimization and autoclaved at 121 °C for 15 minutes. Then it was allowed to cool and inoculated with 2 mL of culture suspension from 7 d old actinomycetes culture grown on starch casein agar. After inoculation, flasks were incubated at 30 °C for two weeks. The completely fermented rice grain was ground with mortar and pestle and allowed to dry for 24 h at room temperature. Later, 100 mL of ethyl acetate and 100 mL of methanol was added to the extract and placed on rotary shaker at 120 r/min for 12 h. Finally, the extract was filtered with Whatman No.1 filter paper and the solvent phase was removed by using rotary vacuum evaporator set at water bath temperature of 60 °C[31].

2.9.2. Submerged state fermentation method
In this method, 1 000 mL of yeast and malt extract broth was prepared in which 100 mL was dispensed into 500 mL Erlenmeyer flask, sterilized and cooled. At room temperature broth was inoculated with 2 mL suspension of isolates and kept for 14 d in a rotary shaker at 200 r/min. Then the culture broth was harvested by centrifugation at 4 000 r/min for 15 min. The supernatant was collected and added equal volumes of ethyl acetate (1:1 v/v) then shaken vigorously for 1 h and repeated twice. The solvent phase was separated from aqueous phase by using a separating funnel and subjected to rotary vacuum evaporator at a water bath temperature of 60 °C at 100 r/min to remove solvent and to get crude extracts[32]

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.9 การผลิตสารสกัดจากน้ำมัน

แยกแสดงศักยภาพกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียจากการคัดกรองหลักถูกยัดเยียดให้ของแข็งและวิธีการหมักน้ำท่วมรัฐผลิตสารสกัดหยาบ

2.9.1 วิธีการหมักของแข็ง
ในวิธีการนี้ 100 กรัมของพื้นผิว (เมล็ดข้าว) ถ่ายไป 500 mL ทรงกรวยหนาว และเพิ่ม 100 mL ของน้ำกลั่น และต้มจนเม็ดข้าวกลายเป็นก่อ การแก้ปัญหาเกลือแร่เช่น K2HPO4 (2.00 g/L), NaCl (1.00 g/L), MgSO4.7H2O (0.10 g/L) และ CaCl2 (0.05 g/L) ถูกเพิ่มสำหรับการปรับ และ autoclaved ที่ 121 ° C 15 นาที จากนั้น จะได้อนุญาตให้เย็น และ inoculated มี 2 mL ของวัฒนธรรมระงับจาก 7 d วัฒนธรรม actinomycetes เก่าปลูกในแป้งเคซีน agar หลังจาก inoculation น้ำถูกจัด incubated ที่ 30 ° C สำหรับสองสัปดาห์ เมล็ดข้าวสมบูรณ์หมักดินกับโกร่ง และอนุญาตให้แห้งสำหรับ 24 ชมที่อุณหภูมิห้อง ภายหลัง เอทิล acetate และ 100 mL ของเมทานอล 100 มลเพิ่มการดึงข้อมูล และวางลงในเชคเกอร์โรตารี่ที่ r 120 นาทีสำหรับ 12 h สุดท้าย การดึงข้อมูลที่กรอง ด้วยกระดาษกรอง Whatman No.1 และเฟสตัวทำละลายถูกเอาออก โดยใช้โรตารี่ evaporator สูญญากาศที่อุณหภูมิ 60 ° C [31] อาบน้ำ

2.9.2 น้ำท่วมรัฐวิธีหมัก
ในวิธีการนี้ 1 000 mL ของยีสต์และมอลต์สกัดซุปเตรียมไว้ที่ 100 มลคำเป็น 500 mL Erlenmeyer หนาว sterilized และระบายความร้อนด้วย ที่อุณหภูมิห้อง ซุปถูก inoculated กับ 2 mL ระงับการแยก และเก็บไว้ใน d 14 ในเชคเกอร์โรตารี่ที่ 200 r/min แล้ว ซุปวัฒนธรรมถูกเก็บเกี่ยว โดย centrifugation ที่ r 4 000/min ใน 15 นาที Supernatant ถูกรวบรวม และเพิ่มวอลุ่มเท่าของเอทิล acetate (1:1 v/v) แล้วเขย่าโยคะสำหรับ 1 h และทำซ้ำสองครั้ง แยกจากระยะอควี โดยใช้กรวยแยกเฟสตัวทำละลาย และการโรตารี่ดูด evaporator ที่อุณหภูมิ 60 องศาเซลเซียสที่ 100 r/min อาบน้ำเอาตัวทำละลาย และการรับน้ำมันดิบแยก [32]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.9 . การผลิตสารสกัดที่แยกได้แสดง

กิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียที่อาจเกิดขึ้นจากการคัดกรองเบื้องต้นภายใต้สถานะของแข็งและวิธีหมักสภาพจมอยู่ใต้น้ำเพื่อผลิตสารสกัด

: .
วิธีการหมักของแข็งในวิธีนี้ของพื้นผิว 100 กรัม ( ข้าว ) ถ่ายใน 500 ml ขวดกรวยและ 100 มล. น้ำกลั่นเติมและต้มจนข้าวเป็นธัญพืชลดลง สารละลายเกลือแร่ เช่น k2hpo4 ( 2.00 กรัม / ลิตร ) , เกลือ ( 1.00 กรัม / ลิตร ) , mgso4.7h2o ( 0.10 กรัม / ลิตร ) และผลิต ( 0.05 กรัม / ลิตร ) ถูกเพิ่มสำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพและสังเคราะห์ที่ 121 ° C เป็นเวลา 15 นาทีมันได้รับอนุญาตให้เย็นและใส่ 2 ml ของการระงับวัฒนธรรมจาก 7 D เก่าด้วยกันวัฒนธรรมเติบโตบนอาหารวุ้น , แป้ง หลังจากที่ได้รับ flasks อุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 2 สัปดาห์ ทั้งหมดเมล็ดข้าวหมักถูกพื้นดินกับครกและสาก และได้รับอนุญาตให้แห้งเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ต่อมา100 มิลลิลิตรของเอทิลอะซีเตทและ 100 มิลลิลิตร เติมสารสกัดเมทานอลและวางไว้บนเครื่องเขย่าที่ 120 R / นาทีเป็นเวลา 12 ชั่วโมง ในที่สุด สารสกัดถูกกรองด้วยกระดาษกรอง และ whatman 1 เฟสตัวทำละลายจะถูกลบออกโดยใช้เครื่องระเหยแบบสุญญากาศตั้งน้ำร้อนอุณหภูมิ 60 องศา C
[ 31 ]
2.9.2 .
วิธีการหมักรัฐมิดในวิธีนี้1   000 มิลลิลิตร สารสกัดจากยีสต์และน้ำซุปที่เตรียมไว้ในข้าวมอลต์ที่ 100 มล. ก็จ่ายไป 500 มล. เออร์เลนเมเยอร์ขวดฆ่าเชื้อและทำให้เย็น ที่ใส่น้ำอุณหภูมิห้อง 2 มล ระงับเชื้อ และเก็บไว้สำหรับ 14 D ในเครื่องปั่นหมุนที่ 200 R / นาที แล้ววัฒนธรรมซุปเก็บเกี่ยวโดยการเหวี่ยงแยกที่ 4 000 R / นาทีเป็นเวลา 15 นาทีการรวบรวมและเพิ่มสูงเท่ากับปริมาณเอทิลอะซิเตท ( 1 : 1 v / v ) แล้วเขย่าแรงๆ เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และซ้ำ 2 ครั้ง เฟสตัวทำละลายแยกจากเฟสน้ำโดยใช้กรวยแยก และต้องระเหยแบบสุญญากาศที่อุณหภูมิ 60 องศา C น้ำอาบที่ 100 R / มินเอาตัวทำละลายและได้รับสารสกัด [ 32 ]