2.5. 1,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)

2.5. 1,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
bromide (MTT) cell viability assay
Differentiated PC12 and IMR32 cells seeded in 24-well plates
(5  104 cell/well) were incubated with culture medium containing
CAE (0, 25, 50 or 100 mg/mL) for 24 or 48 h and then the
cells were incubated with 1,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyltetrazolium bromide (MTT) (0.5 mg/mL) at 37 C in the
dark for 2 h. The optical density (OD) of each well was determined
by the microplate reader (F3; Molecular Devices, Sunnyvale, CA,
USA) at a wavelength of 570 nm after dissolving with dimethyl
sulphoxide.
2.6. 5,5ʹ-dithiobis-2-nitrobenzoic acid (DTNB), 2,7-
dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) fluorescent assay
DCFH-DA was used as a ROS probe to monitor the intracellular
accumulation of ROS. To measure ROS production, differentiated
PC12 cells seeded in 12-well plates (1  105 cell/well) were treated
with aggregated Ab1e40 and CAE (0, 25, 50 or 100 mg/mL) for 6 and
24 h. After treatment, the cells were collected, washed twice with
phosphate buffered saline (PBS), and stained with DCFH-DA for
30 min, then the cells were washed and analyzed by flow
cytometry (FACSCanto II; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. 1,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumวิเคราะห์ชีวิตเซลล์โบรไมด์ (MTT)สังเกต PC12 และ IMR32 เซลล์ seeded ในดี 24 แผ่น(5 ดี 104 เซลล์) ได้ incubated กับวัฒนธรรมสื่อที่ประกอบด้วยCAE (0, 25, 50 หรือ 100 mg/mL) ใน 24 หรือ 48 h แล้วเซลล์มี incubated กับ 1,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ (MTT) (0.5 mg/mL) ที่ 37 C ในตัวสีเข้มสำหรับ 2 h กำหนดความหนาแน่นออปติคอล (OD) ของแต่ละบ่อโดยผู้อ่าน microplate (F3 อุปกรณ์โมเลกุล Sunnyvale, CAสหรัฐอเมริกา) ที่ความยาวคลื่นของ 570 nm หลังยุบกับ dimethylsulphoxide2.6. (DTNB), กรด 5ʹ-dithiobis-2-nitrobenzoic 5, 2,7-วิเคราะห์ฟลูออเรส diacetate (DCFH-ดา) dichlorofluorescinDCFH ดาถูกใช้เป็นโพรบ ROS ที่ตรวจใน intracellularสะสมของ ROS วัด ROS ผลิต แตกต่างกันเซลล์ PC12 seeded ในดี 12 แผ่น (1 105 เซลล์/ดี) ได้รับการรักษามีรวม Ab1e40 และ CAE (0, 25, 50 หรือ 100 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) สำหรับ 6 และ24 ชม หลังการรักษา เซลล์ถูกเก็บรวบรวม ล้างสองครั้งด้วยฟอสเฟต buffered น้ำเกลือ (PBS), และสีกับดา DCFH สำหรับ30 นาที เซลล์ถูกล้าง แล้ววิเคราะห์ตามขั้นตอนเซลล์ (FACSCanto II BD เวลาออก แฟรงคลินทะเลสาบ NJ สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 1,3- (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5-diphenyltetrazolium
โบรไมด์ (MTT)
มีชีวิตเซลล์ทดสอบที่แตกต่างPC12 และ IMR32 เซลล์เมล็ดในแผ่น 24 หลุม
(5? 104 เซลล์ / ดี) ถูกบ่มด้วย อาหารเลี้ยงเชื้อที่มี
CAE (0, 25, 50 หรือ 100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) สำหรับ 24 หรือ 48
ชั่วโมงจากนั้นเซลล์ถูกบ่มกับ1,3- (4,5-dimethylthiazol-2-YL) -2,5-
โบรไมด์ diphenyltetrazolium (MTT) (0.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ที่ 37
องศาเซลเซียสในที่มืดเป็นเวลา2 ชั่วโมง ความหนาแน่นของแสง (OD)
ของดีแต่ละคนถูกกำหนดโดยผู้อ่านmicroplate (F3; อุปกรณ์โมเลกุลซันนีเวล, CA,
USA) ที่ความยาวคลื่น 570 นาโนเมตรของหลังจากที่ละลายกับ dimethyl
sulphoxide.
2.6 5,5'-dithiobis-2-nitrobenzoic กรด (DTNB) 2,7-
dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) ทดสอบเรืองแสง
DCFH-DA ใช้เป็นหัววัด ROS
ในการตรวจสอบภายในเซลล์เกิดการสะสมของอนุมูลอิสระ การวัดการผลิต ROS,
แตกต่างเซลล์PC12 เมล็ดในจานเดียว 12 (1? 105 เซลล์ / ดี)
ได้รับการรักษาด้วยการรวมAb1e40 และ CAE (0, 25, 50 หรือ 100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) สำหรับ 6 และ
24 ชั่วโมง หลังจากการรักษาเซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมล้างครั้งที่สองที่มีฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอส) และย้อมด้วยสี DCFH-DA สำหรับ 30 นาทีจากนั้นเซลล์ถูกล้างและวิเคราะห์โดยการไหลของภูมิคุ้มกัน(FACSCanto ครั้งที่สอง; BD ชีววิทยาศาสตร์แฟรงคลินเลคส์, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา).

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 1 , 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2,5-diphenyltetrazolium

) โบรไมด์ ( MTT ) เซลล์และเซลล์ต่างๆ ของ pc12 imr32 เมล็ดใน 24 ดีจาน
( 5  104 เซลล์ / ดี ) ถูกบ่มกับวัฒนธรรมอาหารที่ประกอบด้วย
CAE ( 0 , 25 , 50 และ 100 mg / ml ) 24 หรือ 48 ชั่วโมงแล้ว
เซลล์ที่ถูกบ่มด้วย 1 , 3 - ( 4,5-dimethylthiazol-2-yl ) - 2 , 5 -
diphenyltetrazolium โบรไมด์ ( MTT ) ( 05 mg / ml ) ที่ 37 องศาเซลเซียส ใน 
มืดเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ความหนาแน่นของแสง ( OD ) ของแต่ละคนก็ถูกกำหนดโดยพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
อ่าน ( F3 ; โมเลกุลอุปกรณ์ , Sunnyvale , CA ,
USA ) ที่ความยาวคลื่น 570 nm หลังจากละลายกับ Dimethyl sulphoxide
.
2.6 5 , 5 ʹ - dithiobis-2-nitrobenzoic acid ( dtnb ) 2,7 -
dichlorofluorescin ได ซิเตท ( dcfh-da )
( เรืองแสงdcfh-da ถูกใช้เป็น probe เพื่อตรวจสอบผลตอบแทนสะสมภายในเซลล์
ของรอส การวัดผลตอบแทนจากการผลิต ,
pc12 เซลล์เมล็ดในดีแผ่น ( 1  105 เซลล์ / ดี ) ได้รับการรักษาด้วย ab1e40
รวมและ CAE ( 0 , 25 , 50 และ 100 mg / ml ) 6
24 ชั่วโมง หลังจากการรักษา เซลล์ก็เก็บล้างด้วยน้ำเกลือ ( 2
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีบีเอส ) และย้อมด้วย dcfh-da สำหรับ
30 นาทีแล้วเซลล์ก็ล้างและวิเคราะห์การไหล (
( facscanto 2 BD BIOSCIENCES Franklin Lakes , NJ , USA )