Production of Taq DNA polymerase In

Production of Taq DNA polymerase In our laboratory the encoding DNA of Taq polymerase enzyme was cloned and placed in the pET15b expression vector to obtain large amounts of Taq DNA polymerase 171 Production of Taq DNA polymerase in Escherichia coli BL21(DE3) cells was induced by incubation with isopropyl OPTG). SDS-PAGE analysis of cell extract showed a prominent polypeptide band of the expected molecular mass[Figure 1, lane 2l and the recombinant Tau DNA. polymerase was purified according to Desi Method[Figure 1, lane 30. The activity of the obtained enzyme was measured by comparing the intensities of the produced DNA bands in PCR reactions. Results well showed an obtained active and stable enzyme which could be used in our laboratory for PCR reactions. Finally, produced recombinant enzyme was added t home-made master mix for the next step.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การผลิตพอลิเมอเรส Taq DNA ในห้องปฏิบัติการพอลิเมอเรสเอนไซม์การเข้ารหัสของดีเอ็นเอของ Taq โคลน และวางลงในเวกเตอร์นิพจน์ pET15b รับจำนวนมากของ Taq DNA พอลิเมอเรส 171 ผลิตของ Taq DNA พอลิเมอเรสใน Escherichia coli BL21(DE3) เซลล์ถูกเหนี่ยวนำ โดยบ่มด้วย isopropyl OPTG) SDS-หน้าวิเคราะห์สารสกัดจากเซลล์พบวงดนตรี polypeptide ที่โดดเด่นของมวลโมเลกุลคาด [รูปที่ 1 เลน 2 ลิตร และการ recombinant DNA เต่า. พอลิเมอเรสบริสุทธิ์ตามวิธี Desi [รูปที่ 1 เลน 30 กิจกรรมของเอนไซม์ได้รับโดยวัดจากการเปรียบเทียบความเข้มของแถบดีเอ็นเอผลิตในปฏิกิริยา PCR ผลลัพธ์ที่ดีแสดงให้เห็นว่าได้รับใช้งานอยู่ และมีเสถียรภาพเอนไซม์ซึ่งสามารถนำมาใช้ในห้องปฏิบัติการของเราสำหรับปฏิกิริยา PCR ในที่สุด เอนไซม์ผลิต recombinant ถูก t ทำหลักผสมสำหรับขั้นตอนถัดไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การผลิตของ Taq DNA Polymerase ในห้องปฏิบัติการของดีเอ็นเอการเข้ารหัสของเอนไซม์โพลิเมอร์ Taq เป็นโคลนและวางไว้ในการแสดงออกเวกเตอร์ pET15b ที่จะได้รับจำนวนมากของ Taq DNA Polymerase 171 ผลิต Taq DNA Polymerase ใน Escherichia coli BL21 (DE3) เซลล์ถูกชักนำโดยการบ่ม กับไอโซโพรพิ OPTG) การวิเคราะห์ระบบ SDS-PAGE ของสารสกัดจากเซลล์พบว่ามีวงดนตรีเพปไทด์ที่โดดเด่นของโมเลกุลมวลคาดว่า [รูปที่ 1 2L เลนและ DNA recombinant เอกภาพ โพลิเมอร์บริสุทธิ์ตามวิธี Desi [รูปที่ 1 เลน 30. กิจกรรมของเอนไซม์ที่ได้รับที่ได้รับการวัดโดยการเปรียบเทียบความเข้มของวงดนตรีที่ผลิตดีเอ็นเอในปฏิกิริยา PCR ผลการค้นหาที่ดีแสดงให้เห็นว่าการทำงานของเอนไซม์ที่ใช้งานและมีเสถียรภาพได้ซึ่งสามารถนำมาใช้ในห้องปฏิบัติการของเราสำหรับปฏิกิริยา PCR สุดท้ายที่ผลิตเอนไซม์ recombinant ถูกเพิ่ม T ทำที่บ้านผสมหลักสำหรับขั้นตอนต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผลิตดีเอ็นเอพอลิเมอเรสได้ดีในห้องปฏิบัติการของเราการเข้ารหัสของดีเอ็นเอโดยเอนไซม์ได้ดีสามารถอยู่ใน pet15b นิพจน์เวกเตอร์ที่จะได้รับจำนวนมากของแท็ก DNA polymerase 171 การผลิตแทค DNA polymerase ใน Escherichia coli BL21 ( DE3 ) เซลล์ถูกชักจูงโดยการบ่มด้วยไอโซโพรพิล optg ) การวิเคราะห์เอนไซม์ของเซลล์ สารสกัด พบวงดนตรี polypeptide ที่โดดเด่นของคาด [ มวลโมเลกุลรูป 1 เลน และ DNA recombinant 2L ครับ . โดยบริสุทธิ์ตามวิธีการออกแบบ [ รูปที่ 1 ซอย 30 กิจกรรมของเอนไซม์ที่ได้ถูกวัดโดยการเปรียบเทียบความเข้มของผลิตแถบดีเอ็นเอในปฏิกิริยา PCR ผลลัพธ์ดีมีงานที่มั่นคงและได้รับเอนไซม์ที่สามารถใช้ในห้องปฏิบัติการของเราสำหรับปฏิกิริยา PCR ในที่สุด , ผลิตรีคอมบิแนนท์เอนไซม์เพิ่ม T ที่บ้านอาจารย์ผสมในขั้นตอนต่อไป