In cases where the polymeric base matrix does not have the properties to function as an active substance, the polymeric base matrix (or
matrices where a ของผสม of polymers are used) may be derivatized to function as an active substance in the procedures of activation or derivatization. Thus,
materials ซึ่งประกอบรวมด้วย hydroxyl, amino, amide, carboxyl or thiol groups may be
activated or derivatized using various activating chemicals, e.g. chemicals such as cyanogen bromide, divinyl sulfone, epichlorohydrin, bisepoxyranes,
dibromopropanol, glutaric dialdehyde, carbodiimides, anhydrides, hydrazines,
periodates, benzoquinones, triazines, tosylates, tresylates, and diazonium ions. Examples of methods for chemical derivatization and specific ลิแกนด์s useful in certain รูปลักษณะ are described in WO 98/08603.
[0039] The ลิแกนด์ concentration can impact the adsorption strength in
certain รูปลักษณะ. For example, in an รูปลักษณะ, the adsorbent carries
ลิแกนด์s for adsorption of the desired protein in a concentration of at least 20 nM, such as at least 30 mM or at least 40 mM, preferably at least 50 mM and most preferably at least 60 mM.
[0040] A subset of adsorbents may be characterized in terms of their binding capacity to bovine serum albumin (BSA). This subset of adsorbents are typically those ซึ่งประกอบรวมด้วย a ลิแกนด์ selected from the group consisting of i) ลิแกนด์s
ซึ่งประกอบรวมด้วย aromatic or heteroaromatic groups (radicals) of the following types as functional groups: benzoic acids such as 2-aminobenzoic acids, 3-aminobenzoic
acids, 4-aminobenzoic acids, 2-mercaptobenzoic acids, 4-amino-2-chlorobenzoic acid, 2-amino-5-chlorobenzoic acid, 2-amino-4-chlorobenzoic acid, 4-aminosalicylic acids, 5-aminosalicylic acids, 3,4-diaminobenzoic acids, 3,5-diaminobenzoic acid, 5-
aminoisophthalic acid, 4-aminophthalic acid; cinnamic acids such as hydroxy-
cinnamic acids; nicotinic acids such as 2-mercaptonicotinic acids; naphthoic acids such as 2-hydroxy-1-naphthoic acid; quinolines such as 2-mercaptoquinoline;
tetrazolacetic acids such as 5-mercapto-l-tetrazolacetic acid; thiadiazols such as 2-
mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazol; benzimidazols such as 2-amino-benzimidazol, 2-mercaptobenzimidazol, and 2-mercapto-5-nitrobenzimidazol; benzothiazols such as 2-aminobenzothiazol, 2-amino-6-nitrobenzothiazol, 2-mercaptobenzothiazol and 2-mercapto-6-ethoxybenzothiazol; benzoxazols such as 2-mercaptobenzoxazol;
thiophenols such as thiophenol and 2- aminothiophenol; 2-(4-aminophenylthio)acetic acid; aromatic or heteroaromatic sulfonic acids and phosphonic acids, such as 1-
amino-2-naphthol-4-sulfonic acid and phenols such as 2-amino-4-nitro-phenol.
[0041] Examples are provided to illustrate some รูปลักษณะ of the
nutritional composition of the การเปิดเผยนี้ but should not be interpreted as any limitation thereon. Other รูปลักษณะ within the scope of the ข้อถือสิทธิ herein will be apparent to one skilled in the art from the consideration of the specification or practice of the nutritional composition or methods disclosed herein. It is
intended that the specification, together with the example, be considered to be
13
exemplary only, with the scope and spirit of the disclosure being indicated by the ข้อถือสิทธิ which follow the example.
EXAMPLE
Production of แลคโตเปอร์ออกซิเดส and แลคโตเฟอร์ริน
[0042] แลคโตเปอร์ออกซิเดส and แลคโตเฟอร์ริน were separated from bovine whey
using an EBA method. FastLine® SP อะกาโรส coated tungsten-carbide adsorbent was used, with a settled bed height of 40 cm, and a total volume of 3140 mL. Whey was loaded on the column with a flow rate of about 240 L/hr. The flow rate during rinse and elution was about 148-158 L/hr. แลคโตเปอร์ออกซิเดส was eluted with 250 mM NaC1, and แลคโตเฟอร์ริน was eluted with 0.8 M NaCl. Recirculation of the eluent reduced the total volume of eluent from .55 L to 39 L used without losing the total amount of แลคโตเฟอร์ริน recovered from the whey.
[0043] แลคโตเฟอร์ริน and แลคโตเปอร์ออกซิเดส concentration ere determined by
reverse-phase high-pressure liquid โครมาโทกราฟี (HPLC) on a polystyrene-
divinyl benzene column. Purified แลคโตเฟอร์ริน was obtained from Upfront
โครมาโทกราฟี A/S and used as a standard. Bovine แลคโตเปอร์ออกซิเดส standard was obtained from Worthington Biochemical Corp. Sample were received in aqueous solutions, spiked with แลคโตเฟอร์ริน and แลคโตเปอร์ออกซิเดส standard solutions to prepare a two-point standard addition curve, filtered and collected in silanized vials for
injection into the HPLC system. The proteins were eluted with acetonitrile using a 20-90% linear gradient and detected at 214 nm.
[0044] The total recovery of แลคโตเฟอร์ริน was 63%. Overall, the NaC1 process yields about 40 g of แลคโตเฟอร์ริน per 1000L, while the NaOH process yields 27 g of แลคโตเฟอร์ริน per 1000 L.
14
ข้อถือสิทธิ
What is ข้อถือสิทธิed is:
1. A process for isolating แลคโตเฟอร์ริน from a milk source, ซึ่งประกอบรวมด้วย:
establishing an expended bed adsorption column ซึ่งประกอบรวมด้วย a particulate matrix,
applying a milk source to the matrix, and
eluting the แลคโตเฟอร์ริน from the matrix with an elution buffer ซึ่งประกอบรวมด้วย about 0.3 to about 2.0 M sodium chloride.
2. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ elution of แลคโตเฟอร์ริน is performed at a temperature of about 30 to about 50 °C.
3. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, further ซึ่งประกอบรวมด้วย recirculating the elution buffer at least once.
4. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ the elution is performed in a fluidized mode.
5. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 4, โดยที่ the elution is performed at a flow rate of
about 100 to about 200 L/hr.
6. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 4, โดยที่ the matrix has an expansion ratio of at least
1 during the elution.
7. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ the elution is performed in an expanded
mode.
8. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, further ซึ่งประกอบรวมด้วย adding ซิเตรตs to the milk source.
9. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 9, โดยที่ the ซิเตรต is in a concentration ranging from
about 0.01% to about 2.0% w/v of the milk source.
10. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, further ซึ่งประกอบรวมด้วย adding an iron salt to the milk source.
11. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, further ซึ่งประกอบรวมด้วย eluting แลคโตเปอร์ออกซิเดส with an elution buffer ซึ่งประกอบรวมด้วย about 0.2 to about 0.3 M solution of sodium chloride prior to eluting the แลคโตเฟอร์ริน.
12. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ the matrix ประกอบรวมด้วย cross-linked อะกาโรส and tungsten carbide.
13. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ the matrix has a density of about 2.5 to about 3.5 mg/mL.
14. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ the milk source is a bovine milk source.
15
15. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 14, โดยที่ the milk source is whole milk, skim milk, reduced fat milk, whey, casein, or a combination thereof.
16. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 15, โดยที่ the milk source is bovine whey.
17. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, further ซึ่งประกอบรวมด้วย subjecting the milk source to an
ultrafiltration procedure prior to applying to the เอ็กซแปนเดดเบด column.
18. The กระบวนการ ของข้อถือสิทธิ 1, โดยที่ the milk source is ultrafiltered bovine whey.
16
ABSTRACT OF THE DISCLOSURE
The การเปิดเผยนี้ relates to improved การดูดซับแบบ เอ็กซแปนเดดเบด
processes for isolating proteins from milk sources. In particular รูปลักษณะ, the การเปิดเผยนี้ provides a process for isolating a milk protein, such as
แลคโตเฟอร์ริน, from a milk source ซึ่งประกอบรวมด้วย establishing an การดูดซับแบบ เอ็กซแปนเดดเบด column ซึ่งประกอบรวมด้วย a particulate matrix, applying a milk source to the matrix, and eluting the แลคโตเฟอร์ริน from the matrix with an elution buffer ซึ่งประกอบรวมด้วย about 0.3 to about 2.0 M sodium chloride.
ในกรณีที่เมทริกซ์ฐานพอลิเมอไม่ได้มีคุณสมบัติในการทำงานเป็นสารที่ใช้งาน, เมทริกซ์ฐานพอลิเมอ
(หรือการฝึกอบรมที่ของผสมของโพลิเมอร์จะใช้) อาจจะ derivatized ทำงานเป็นสารที่ใช้งานอยู่ในขั้นตอนการเปิดใช้งานหรือ อนุพันธ์ ดังนั้นวัสดุซึ่งประกอบรวมด้วยไฮดรอก, อะมิโนเอไมด์ carboxyl หรือกลุ่ม thiol อาจจะเปิดใช้งานหรือderivatized ใช้สารเคมีการเปิดใช้งานต่างๆเช่นสารเคมีเช่นโบรไมด์ไซยาโนเจน, sulfone divinyl, epichlorohydrin, bisepoxyranes, dibromopropanol, glutaric dialdehyde, carbodiimides, anhydrides, ไฮดราซีน, periodates, benzoquinones, triazines, tosylates, tresylates และไดอะโซเนียมไอออน ตัวอย่างของวิธีการทางเคมีอนุพันธ์และเฉพาะเจาะจงลิแกนด์มีประโยชน์ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ใน WO 98/08603. [0039] ที่ลิแกนด์เข้มข้นสามารถดูดซับแรงกระแทกในรูปลักษณะบางอย่าง ยกตัวอย่างเช่นในรูปลักษณะเป็นตัวดูดซับดำเนินลิแกนด์สำหรับการดูดซับของโปรตีนที่ต้องการในความเข้มข้นของอย่างน้อย 20 นาโนเมตรเช่นอย่างน้อย 30 มิลลิหรืออย่างน้อย 40 มิลลิโดยเฉพาะอย่างยิ่งอย่างน้อย 50 มิลลิและส่วนใหญ่โดยเฉพาะอย่างยิ่ง อย่างน้อย 60 มิลลิ. [0040] เป็นส่วนหนึ่งของตัวดูดซับอาจจะโดดเด่นในแง่ของกำลังการผลิตที่มีผลผูกพันของพวกเขาเพื่ออัลบูมิซีรั่มวัว (BSA) ส่วนหนึ่งของตัวดูดซับนี้มักจะมีผู้ซึ่งประกอบรวมด้วยลิแกนด์ที่เลือกจากกลุ่มประกอบด้วย i) ลิแกนด์ s ซึ่งประกอบรวมด้วยกลุ่มอะโรเมติกหรือเฮ (อนุมูล) ประเภทต่อไปนี้เป็นกลุ่มทำงาน: กรดเบนโซอิกเช่น กรด 2 aminobenzoic 3 aminobenzoic กรดกรด 4 aminobenzoic กรด 2 mercaptobenzoic กรด 4 อะมิโน-2-chlorobenzoic กรด 2 อะมิโน 5 chlorobenzoic กรด 2 อะมิโน-4-chlorobenzoic 4 aminosalicylic กรดกรด 5 aminosalicylic กรด 3,4-diaminobenzoic กรด 3,5-diaminobenzoic, 5 กรด aminoisophthalic กรด 4 aminophthalic; กรดซินนามิกเช่น hydroxy- กรดซินนามิก; กรด nicotinic เช่นกรด 2 mercaptonicotinic; naphthoic กรดเช่นกรดไฮดรอกซี 2-1-naphthoic; quinolines เช่น 2 mercaptoquinoline; กรด tetrazolacetic เช่นกรด 5 Mercapto-l-tetrazolacetic; thiadiazols เช่น 2- Mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazol; benzimidazols เช่น 2 อะมิโน benzimidazol 2 mercaptobenzimidazol และ 2 Mercapto-5-nitrobenzimidazol; benzothiazols เช่น 2 aminobenzothiazol 2 อะมิโน-6-nitrobenzothiazol 2 mercaptobenzothiazol และ 2 Mercapto-6-ethoxybenzothiazol; benzoxazols เช่น 2 mercaptobenzoxazol; thiophenols เช่น thiophenol และ 2- aminothiophenol; 2- (4 aminophenylthio) กรดอะซิติก; กรดซัลโฟหอมหรือเฮและกรด phosphonic เช่น 1- กรดอะมิโน-2-naphthol-4-sulfonic และฟีนอลเช่นอะมิโน 2-4-ไนโตรฟีนอล. [0041] ตัวอย่างมีไว้เพื่อแสดงให้เห็นถึงบางรูปลักษณะขององค์ประกอบทางโภชนาการของการเปิดเผยนี้ แต่ไม่ควรจะตีความว่าเป็นข้อ จำกัด ดังกล่าวใด ๆ รูปลักษณะอื่น ๆ ภายในขอบเขตของข้อถือสิทธิในที่นี้จะเห็นได้ชัดอย่างใดอย่างหนึ่งที่มีฝีมือในงานศิลปะจากการพิจารณาของสเปคหรือการปฏิบัติขององค์ประกอบทางโภชนาการหรือวิธีการเปิดเผยในที่นี้ มันเป็นเรื่องที่ตั้งใจว่าสเปคร่วมกับตัวอย่างได้รับการพิจารณาให้เป็น13 เป็นแบบอย่างเท่านั้นที่มีขอบเขตและจิตวิญญาณของการเปิดเผยข้อมูลที่มีการระบุโดยข้อถือสิทธิซึ่งเป็นไปตามตัวอย่าง. ตัวอย่างการผลิตแลคโตเปอร์ออกซิเดสและแลคโตเฟอร์ริน[0042] แลคโตเปอร์ออกซิเดสและแลคโตเฟอร์รินถูกแยกออกจากเวย์วัวโดยใช้วิธีการEBA FastLine® SP อะกาโรสดูดซับทังสเตนคาร์ไบด์เคลือบถูกนำมาใช้ที่มีความสูงเตียงตัดสิน 40 เซนติเมตรและปริมาณรวมของ 3,140 มิลลิลิตร เวย์ถูกโหลดในคอลัมน์ที่มีอัตราการไหลประมาณ 240 ลิตร / ชั่วโมง อัตราการไหลในระหว่างการล้างและชะประมาณ 148-158 ลิตร / ชม แลคโตเปอร์ออกซิเดสที่ถูกชะ 250 มิลลิ NaC1 และแลคโตเฟอร์รินถูกชะด้วย 0.8 M NaCl การหมุนเวียนของตัวชะลดปริมาณรวมของตัวชะจาก 0.55 L 39 L ใช้โดยไม่สูญเสียจำนวนเงินทั้งหมดของแลคโตเฟอร์รินฟื้นจากเวย์. [0043] แลคโตเฟอร์รินและแลคโตเปอร์ออกซิเด สความเข้มข้น ere กำหนดโดยย้อนกลับเฟสของเหลวแรงดันสูงโครมาโทกราฟี(HPLC) ใน polystyrene- คอลัมน์เบนซิน divinyl บริสุทธิ์แลคโตเฟอร์รินที่ได้รับจากตะลุยโครมาโทกราฟี A / S และใช้เป็นมาตรฐาน โคแลคโตเปอร์ออกซิเดสมาตรฐานที่ได้รับจากทางชีวเคมีตัวอย่างวอร์ชิงตันคอร์ปได้รับในการแก้ปัญหาน้ำถูกแทงด้วยแลคโตเฟอร์รินและแลคโตเปอร์ออกซิเดสโซลูชั่นมาตรฐานเพื่อเตรียมความพร้อมสองจุดนอกจากนี้มาตรฐาน โค้งกรองและรวบรวมไว้ในขวด silanized สำหรับการฉีดเข้าไปในระบบHPLC โปรตีนที่ถูกชะที่มี acetonitrile ใช้ลาดเชิงเส้น 20-90% และมีการตรวจพบที่ 214 นาโนเมตร. [0044] การฟื้นตัวรวมของแลคโตเฟอร์รินเป็น 63% โดยรวม, กระบวนการ NaC1 อัตราผลตอบแทนประมาณ 40 กรัมของแลคโตเฟอร์รินต่อ 1000L ขณะที่กระบวนการ NaOH ผลตอบแทนถัวเฉลี่ย 27 กรัมของแลคโตเฟอร์รินต่อ 1000 ลิตร14 ข้อถือสิทธิอะไรคือสิ่งที่ข้อถือสิทธิเอ็ดมี: 1 กระบวนการสำหรับการแยกแลคโตเฟอร์รินจากแหล่งนมซึ่งประกอบรวมด้วย: การสร้างการดูดซับเตียงใช้จ่ายคอลัมน์ซึ่งประกอบรวมด้วยเมทริกซ์อนุภาคใช้แหล่งที่มาของนมเมทริกซ์และเคลือบแลคโตเฟอร์รินจากเมทริกซ์ที่มีบัฟเฟอร์ชะซึ่งประกอบรวมด้วยประมาณ 0.3 ประมาณ 2.0 M โซเดียมคลอไรด์. 2 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ elution ของแลคโตเฟอร์รินจะดำเนินการที่อุณหภูมิประมาณ 30 ถึง 50 องศาเซลเซียส. 3 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 1 ต่อไปซึ่งประกอบรวมด้วยหมุนเวียนบัฟเฟอร์ชะอย่างน้อยหนึ่งครั้ง. 4 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ชะจะดำเนินการในโหมด fluidized. 5 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 4 โดยที่ชะจะดำเนินการที่อัตราการไหลประมาณ100 ไปประมาณ 200 ลิตร / ชม. 6 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 4 โดยที่เมทริกซ์มีอัตราส่วนการขยายตัวของอย่างน้อย1 ในช่วงชะได้. 7 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่ชะจะดำเนินการในการขยายโหมด. 8 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 1 ต่อไปซึ่งประกอบรวมด้วยการเพิ่มซิเตรตที่จะแหล่งที่มาของนม. 9 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 9 โดยที่ซิเตรตอยู่ในความเข้มข้นตั้งแต่ประมาณ0.01% มาอยู่ที่ประมาณ 2.0% w / v แหล่งที่มาของนม. 10 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 1 ต่อไปซึ่งประกอบรวมด้วยการเพิ่มเกลือเหล็กไปยังแหล่งนม. 11 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 1 ต่อไปซึ่งประกอบรวมด้วย eluting แลคโตเปอร์ออกซิเดสด้วยซึ่งบัฟเฟอร์ชะประกอบรวมด้วยประมาณ 0.2 ถึงประมาณ 0.3 M แก้ปัญหาของโซเดียมคลอไรด์ก่อนที่จะเคลือบแลคโตเฟอร์ริน12 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่เมทริกซ์ประกอบรวมด้วย cross-linked อะกาโรสและทังสเตนคาร์ไบ. 13 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่เมทริกซ์มีความหนาแน่นประมาณ 2.5 ถึง 3.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร. 14 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่แหล่งที่มาของนมเป็นแหล่งวัวนม. 15 15 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 14 โดยที่แหล่งที่มาของนมเป็นนมสด, นมพร่องมันเนยนมลดไขมัน, เวย์, เคซีนหรือการรวมกันดังกล่าวได้. 16 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 15 โดยที่แหล่งที่มาของนมเป็นนมโค. 17 กระบวนการของข้อถือสิทธิ 1 ต่อไปซึ่งประกอบรวมด้วยหนอนบ่อนไส้แหล่งที่มาของนมที่ขั้นตอนการกรองก่อนที่จะใช้กับเอ็กซแปนเดดเบดคอลัมน์. 18 กระบวนการของข้อถือสิทธิที่ 1 โดยที่แหล่งที่มาของนม ultrafiltered เวย์วัว. 16 บทคัดย่อของการเปิดเผยข้อมูลการเปิดเผยนี้เกี่ยวข้องกับการปรับปรุงการดูดซับแบบเอ็กซแปนเดดเบดกระบวนการในการแยกโปรตีนจากแหล่งนม ในรูปโดยเฉพาะอย่างยิ่งลักษณะของการเปิดเผยนี้มีกระบวนการในการแยกโปรตีนนมเช่นแลคโตเฟอร์รินจากแหล่งที่มาของนมซึ่งประกอบรวมด้วยการสร้างการดูดซับแบบเอ็กซแปนเดดเบดคอลัมน์ซึ่งประกอบรวมด้วยเมทริกซ์อนุภาคใช้แหล่งที่มาของนมเมทริกซ์และเคลือบแลคโตเฟอร์รินจากเมทริกซ์ที่มีบัฟเฟอร์ชะซึ่งประกอบรวมด้วยประมาณ 0.3 ประมาณ 2.0 M โซเดียมคลอไรด์
การแปล กรุณารอสักครู่..
