Chronic Rhinosinusitis With Nasal P

Chronic Rhinosinusitis With Nasal Polyps: A Proteomic Analysis
David C. Upton, MD; Nathan V. Welham, PhD; John S. Kuo, MD, PhD; Jeffery W. Walker, PhDf ;ThomasR.Pasic,MD

Objectives: Chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP) is a severe subtype of chronic rhinosinusitis that can affect patients despite medical and surgical interventions. The purpose of this study was to utilize the techniques of proteomics to investigate differences in protein abundance within the sinonasal mucosa of patients with CRSwNP compared to healthy controls. Methods: In a case-control study at a tertiary-care academic medical center, sinonasal mucosa was harvested from 3 patients with CRSwNP and 3 control patients undergoing transsphenoidal excision of pituitary tumors. Two-dimensional gel electrophoresis was used to identify proteins with elevated or reduced abundance in CRSwNP patients compared to controls. The proteins showing the greatest abundance difference were characterized by mass spectrometry. Results: More than 300 differentially abundant proteins (p < 0.05) were identified. Many of these protein species were involved in the host inflammatory response. Proteins up-regulated in CRSwNP patients included eosinophil lysophospholipase by a ratio (R) of 18.13, RHO-GDP dissociation inhibitor 2 (R = 2.80), and apolipoprotein A-1 (R = 1.73). Down-regulated proteins in CRSwNP patients included catalase (R = -5.87), annexin Al (R = -6.27), and keratin II-8 (R =-6.73) . A detailed analysis of additional protein species is outlined. Conclusions: The proteomic approach allows detection of significant differences in protein abundance in CRSwNP and provides unique insight into the pathophysiology of this common disease. Key Words: annexin A1 , apolipoprotein A-1 , chronic rhinosinusitis, eosinophil, nasal polyp, polyposis pathophysiology, proteomics.

INTRODUCTION
Chronic rhinosinusitis (CRS) is a common chronic illness in the United States that affects 14% to16% of the urban population.' Although significant multidisciplinary research has been devoted to studying the disease, the pathophysiology of CRSis not yet fully understood. It is thought to have anumber of contributing causes, including infection, inflammation, anatomic abnormalities, and genetic susceptibility. Along the spectrum of this disease, chronic rhinosinusitis with nasal polyps (CRSwNP) is a severe subtype, characterized by persistent eo- sinophilic inflammation, edematous mucosa withpolyps, and thickened sinonasal secretions, that pos-es a therapeutic challenge to clinicians despite medi-cal and surgical interventions .2 Previous complementary DNA microarray and immunohistochemical studies on the pathophysiology of the disease have suggested that CRS may represent a dysregulation of normal mucosal immune mechanisms that act to protect or repair the sino- nasal epithelium.-^-4 More recently, proteomics has been used to study CRS, primarily because it allows the simultaneous system-wide characterization of all proteins present in a given biological condition at a given time. The techniques used in proteomic research consist of 1) separating protein molecules via gel electrophoresis or liquid capillary chroma-tography, 2) subjecting the separated proteins to mass spectrometry (MS) to generate characteris- tic mass spectra, and 3) comparing the mass spec- tra against established databases to identify the pro- teins of interest. These techniques have been usedto identify qualitative and quantitative differences in ject s and patients with CRS.^ The majority of previ- ously identified proteins are involved in innate and From the Department of Surgery, Division of Otolaryngology (Upton, Welham, Pasic), and the Department of Neurological Surgery (Kuo), University of Wisconsin Hospital and Clinics, Madison, Wisconsin, and the Department of Physiology, University of Arizona, Tucson, Arizona (Walker). Supported by grant funding from the American Academy of Otolaryngic Allergy (ROAD scholarship) and the University of Wisconsin Department of Surgery, Division of Otolaryngology. †Deceased. Presented at the meeting of the American Academy of Otolaryngic Allergy, San Diego, California, October 2-4,2009, and the meeting of the Wisconsin Society of Otolaryngology, Madison, Wisconsin, October 24-25,2009 .Correspondence: Thomas R. Pasic, MD, Dept of Surgery, Division of Otolaryngology, University of Wisconsin Hospital and Clinics, 600 Highland Ave, Madison, WI 53792.
acquired immunity and mucosal defense. To date proteomic investigation of the sinonasal mucosa of patients with CRSwNP has been promising.^ techniques have the potential to identify unique proteins expressed in the mucosa of patients with CRSwNP, which in turn may improve understanding of the pathophysiology of the disease and uncover new targets for therapeutic intervention. purpose of this study was to investigate differences in protein abundance within the sinonasal mucosa patients with CRSwNP compared to healthy subjects by use of a proteomic approach the absence of active sinonasal inflammation con- firmed on preoperative magnetic resonance imaging and nasal endoscopy before tissue sampling. Fxclu- sion criteria included active tobacco use, inability to give informed consent, pregnancy or lactation, autoimmune disease affecting the nose and sinuses (eg, Wegener's granulomatosis), and sinonasal neoplasms.
MATERIALS AND METHODS
Patient Selection. This study was approved by the Institutional Review Board at the University of Wisconsin Hospitals and Clinics (Madison, Wiscon-sin), and all subjects gave signed informed consent. A case-control study was performed to determinedifferences in protein abundance in patients with CRSwNP compared to normal subjects. The patient swere recruited from the senior author's (T.R.P.) prac-tice. A total of 6 individuals (3 patients, 3 controls) participated in the study. The diagnosis of CRSwNPwas based on a set of clinical criteria previously de-fined by the American Academy of Otolaryngolo-gy-Head and Neck Surgery Chronic RhinosinusitisTask Force and was confirmed on nasal endoscopy.^ All patients underwent a preoperative coronal com- puted tomographic scan of the sinuses in bone win- dow settings to further assess the extent of sinona-sal disease (Fig 1). Before endoscopie sinus surgery, the patients with CRSwNP received 1 week of oralprednisone and oral antibiotics. Individuals selected to act as controls in this study were recruited from patients who were undergoing resection of pituitary gery for clinical symptoms of rhinosinusitis and had
Sample Collection.Tissue samples of the mucosal lining of the paranasal sinuses were collected under endoscopie guidance, rinsed of overlying debris in 0.9% sodium chloride solution, and then snap-fro- zen in liquid nitrogen. The tissue samples were kept at -80°C until analysis. All tissue specimens were taken from either the ethmoid or sphenoid sinuses; tissue from olfactory-bearing regions of the nasal cavity was not harvested. All tissue was sent fresh for microbiological analysis, bacterial and fungal culture, and histologie examination.
Two-Dimensional Gel Electwphoresis. The sam- ples were homogenized with glass dounces in 1 mL each of osmotic lysis buffer containing nucle- ase, phosphatase inhibitors, and a protease inhibitor. Next, 500 |iL sodium dodecyl sulfate (SDS) boiling buffer without ß-mercaptoethanol was added, and the samples were heated in a boiling water bath for 5 minutes. Total protein quantization was performed by the bicinchoninic acid assay (Pierce, Rockford, Illinois). The samples were then diluted to 6.0 mg/ mL in equal parts SDS boiling buffer and urea sam- ple buffer before loading. Two-dimensional electro- phoresis was performed according to the carrier am- pholine method by Kendrick Labs, Inc (Madison), as follows. Isoelectric focusing was carried out in a glass tube of inner diameter 3.0 mm with 2.0% pH 3.5 to 10 ampholines (Amersham Biosciences, Pis- cataway. New Jersey) for 20 kilovolt hours. One mi- crogram of an isoelectric focusing internal standard.
tropomyosin, was added to the sample. After equili-bration for 10 minutes in "buffer 0" (10% glycer- ol, 50 mmol/L dithiothreitol, 2.3% SDS, and 0.0625 mol/L Tris, pH 6.8), the tube gel was sealed to the top of a stacking gel that overlaid a 10% acrylamide slab gel (1.0 mm thick). SDS slab gel electro pho-resis w

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Rhinosinusitis เรื้อรัง มี Polyps โพรงจมูก: วิเคราะห์แบบ Proteomic
Upton C. ดาวิด MD นาธาน V. Welham ดร. จอห์น S. Kuo, MD ปริญญาเอก เจฟตะวันตกวอล์คเกอร์ PhDfThomasR.Pasic,MD

วัตถุประสงค์: rhinosinusitis เรื้อรัง มี polyps โพรงจมูก (CRSwNP) เป็นชนิดย่อย rhinosinusitis เรื้อรังที่อาจมีผลต่อผู้ป่วยแม้ มีการแทรกแซงทางการแพทย์ และศัลยกรรมที่รุนแรง วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้ได้ใช้เทคนิคของโปรตีโอมิกส์เพื่อตรวจสอบความแตกต่างในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนภายใน mucosa sinonasal ของผู้ป่วยที่ มี CRSwNP ที่เปรียบเทียบการควบคุมสุขภาพ วิธีการ: ในการศึกษาการควบคุมกรณีที่ดูแลตติยวิชาการศูนย์การแพทย์ sinonasal mucosa ถูกเก็บเกี่ยวจาก CRSwNP 3 ผู้ป่วยและผู้ป่วยควบคุม 3 ระหว่าง transsphenoidal ตอนการผ่าตัดของเนื้องอกใต้สมอง Electrophoresis เจสองถูกใช้เพื่อระบุโปรตีน ด้วยการยกระดับ หรือลดลงมากในผู้ป่วย CRSwNP เปรียบเทียบกับตัวควบคุม โปรตีนที่แสดงความแตกต่างมากมายสุดถูกลักษณะ โดยรเมท ผลลัพธ์: โปรตีน differentially มากมายมากกว่า 300 (p < 0.05) ได้ระบุ หลายพันธุ์โปรตีนเกี่ยวข้องในการตอบสนองการอักเสบโฮสต์ โปรตีนที่กำหนดขึ้นในผู้ป่วย CRSwNP รวมอีโอซิโน lysophospholipase โดยอัตราส่วน (R) ของผล 18.13 ครอ GDP dissociation 2 (R = 2.80), และ apolipoprotein A-1 (R = 1.73) ควบคุมลงโปรตีนในผู้ป่วย CRSwNP รวม catalase (R =-5.87), อัล annexin (R =-6.27), และ keratin II-8 (R =-6.73) วิเคราะห์รายละเอียดของชนิดโปรตีนเพิ่มเติมมีรายละเอียด บทสรุป: วิธี proteomic ช่วยให้ตรวจพบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนใน CRSwNP และมีความเข้าใจถึง pathophysiology ของโรคนี้ทั่วไปเฉพาะ คำสำคัญ: annexin A1, apolipoprotein A-1 เรื้อรัง rhinosinusitis อีโอซิโน โปลิโพรงจมูก polyposis pathophysiology โปรตีโอมิกส์

แนะนำ
rhinosinusitis เรื้อรัง (CRS) เป็นโรคทั่วไปในสหรัฐอเมริกาที่มีผลต่อ 14 to16% ของประชากรเมือง.' แม้ว่าจะมีการทุ่มเทวิจัย multidisciplinary ที่สำคัญในการศึกษาโรค pathophysiology ของ CRSis ยังไม่ได้อย่างเข้าใจ คิดว่า จะมี anumber ของสนับสนุนสาเหตุ ติดเชื้อ อักเสบ ความผิดปกติที่ anatomic และอ่อนแอทางพันธุกรรม ตามสเปกตรัมของโรคนี้ rhinosinusitis เรื้อรัง มี polyps โพรงจมูก (CRSwNP) เป็นชนิดย่อยรุนแรง โดยอีโอ sinophilic แบบอักเสบ edematous mucosa withpolyps และ thickened sinonasal หลั่ง ว่า pos-es clinicians แม้มีเมดิ-cal และ 2 การรักษาผ่าตัดก่อนหน้านี้เสริม DNA microarray และ immunohistochemical ท้าทายบำบัดศึกษาเกี่ยวกับ pathophysiology ของโรคได้แนะนำว่า CRS อาจแสดง dysregulation ปกติ mucosal ภูมิคุ้มกันกลไกที่ดำเนินการเพื่อป้องกัน หรือซ่อมแซม epithelium sino-นาสิก . -
-มีการใช้ 4 เพิ่มเติมล่าสุด โปรตีโอมิกส์เพื่อศึกษา CRS หลัก เพราะจะช่วยให้คุณสมบัติทั้งระบบพร้อมกันของโปรตีนทั้งหมดอยู่ในสภาพชีวภาพกำหนดในเวลาที่กำหนด เทคนิคที่ใช้ในการวิจัย proteomic ประกอบด้วย 1) แยกโมเลกุลโปรตีน electrophoresis เจลหรือของเหลวเส้นเลือดฝอยความ-tography 2 การแล้วก็กดชัตเตอร์การแยกโปรตีนจะโตรเมทรี (MS) เพื่อสร้างแรมสเป็คตราโดยรวม characteris รับผลิตกระป๋อง และ 3) เปรียบเทียบสเปคโดยรวมตรากับสร้างฐานข้อมูลเพื่อระบุ teins โปรน่าสนใจ เทคนิคเหล่านี้ได้รับ usedto ระบุความแตกต่างเชิงคุณภาพ และเชิงปริมาณใน ject s และผู้ป่วยกับ CRS.
Previ-ously ระบุโปรตีนส่วนใหญ่เกี่ยวข้อง ในข้อสอบ และ จากแผนกศัลยกรรม แผนกโสตศอ นาสิกวิทยา (Upton, Welham, Pasic), และแผนกของระบบประสาทผ่าตัด (Kuo), โรงพยาบาลมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน และคลินิก เมดิสัน วิสคอนซิน และภาควิชาสรีรวิทยา มหาวิทยาลัย แอริโซนา ทูซอน รัฐแอริโซนา (วอล์คเกอร์) ได้รับการสนับสนุน โดยเงินช่วยเหลือเงินทุนจากสถาบันอเมริกันแพ้ Otolaryngic (ถนนทุน) และวิชาผ่าตัด แผนกโสตศอนาสิกวิทยามหาวิทยาลัยวิสคอนซิน †Deceased นำเสนอในการประชุมเดือนตุลาคมสถาบัน Otolaryngic แพ้ ซานดิเอโก แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา 2-4,2009 และการประชุมวิสคอนซินสมาคมโสตศอนาสิกวิทยา เมดิสัน วิสคอนซิน 24-25 ตุลาคม2009ติดต่อ: Thomas R. Pasic, MD แผนกศัลยกรรม แผนกโสตศอนาสิกวิทยา โรงพยาบาลมหาวิทยาลัยวิสคอนซิน และ คลินิก 600 ไฮแลนด์ Ave เมดิสัน WI 53792.
ซื้อภูมิคุ้มกันและป้องกัน mucosal การสืบสวน proteomic วัน sinonasal mucosa ของผู้ป่วย CRSwNP ได้รับสัญญา
เทคนิคอาจระบุเฉพาะโปรตีนแสดง mucosa ของผู้ป่วยที่มี CRSwNP ซึ่งจะได้อาจปรับปรุงความเข้าใจของ pathophysiology ของโรค และค้นพบเป้าหมายใหม่สำหรับรักษาโรคแทรกแซง วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้การ ตรวจสอบความแตกต่างในความอุดมสมบูรณ์ของโปรตีนในผู้ป่วย mucosa sinonasal กับ CRSwNP เปรียบเทียบกับเรื่องสุขภาพ โดยใช้การ proteomic วิธีการของ sinonasal งานอักเสบคอน - ยืนยันภาพสั่นพ้องแม่เหล็ก preoperative และส่องกล้องโพรงจมูกก่อนสุ่มตัวอย่างเนื้อเยื่อได้ Fxclu-sion เกณฑ์รวมที่ใช้งานยาสูบ ไม่ให้แจ้งความยินยอม ตั้งครรภ์ หรือด้านการให้นม โรคที่ผิดปกติมีผลต่อจมูก และไซนัสมีลักษณะ (เช่น granulomatosis ของ Wegener), และ sinonasal neoplasms
วัสดุและวิธีการ
เลือกผู้ป่วย การศึกษานี้ได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการตรวจสอบสถาบันที่มหาวิทยาลัยวิสคอนซินโรงพยาบาลและคลินิก (เมดิสัน Wiscon บาป), และเรื่องทั้งหมดให้แจ้งความยินยอมเซ็น การควบคุมกรณีศึกษาที่ดำเนินการเพื่อ determinedifferences ระนาวโปรตีนในผู้ป่วยที่ มี CRSwNP ที่เปรียบเทียบกับหัวข้อปกติ Swere ผู้ป่วยพิจารณาจากอาวุโสของผู้เขียน (T.R.P.) prac tice จำนวน 6 คน (ผู้ป่วย 3 ควบคุม 3) เข้าร่วมในการศึกษา การวินิจฉัยของ CRSwNPwas ตามชุดเงื่อนไขที่ทางคลินิกปรับ de-อเมริกันออสการ์ของ Otolaryngolo gy-หัวและคอผ่าตัดเรื้อรัง RhinosinusitisTask แรง และได้รับการยืนยันในโพรงจมูกส่องกล้องก่อนหน้านี้
สแกน tomographic coronal preoperative com puted ในการตั้งค่าดาวชนะกระดูกเพื่อประเมินขอบเขตของโรคแซล sinona (ฟิก 1) เพิ่มเติม ของแต่ละผู้ป่วยทั้งหมด ผู้ป่วยที่ มี CRSwNP ได้รับสัปดาห์ที่ 1 ของยาปฏิชีวนะ oralprednisone และช่องปากก่อนการผ่าตัดไซนัส endoscopie บุคคลที่เลือกเพื่อทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมในการศึกษานี้ได้พิจารณาจากผู้ป่วยที่ถูกผ่าตัด resection gery ค้นสำหรับอาการทางคลินิกของ rhinosinusitis และมี
เก็บตัวอย่างตัวอย่างเนื้อเยื่อของเยื่อบุ mucosal ของ paranasal ถูกเก็บรวบรวมภายใต้คำแนะนำ endoscopie, rinsed ของเศษเหล่านั้นในโซลูชันโซเดียมคลอไรด์ 0.9% แล้วสแนปหวีเซนในไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างเนื้อเยื่อถูกเก็บไว้ที่-80 ° C จนถึงการวิเคราะห์ ไว้เป็นตัวอย่างเนื้อเยื่อทั้งหมดที่ได้มาจากการเอทมอยด์ หรือ sphenoid ไซนัสมีลักษณะ เนื้อเยื่อจากแคว้นโพรงจมูก โพรงเรืองสมานไม่เก็บเกี่ยวผลผลิต เนื้อเยื่อทั้งหมดถูกส่งสดสำหรับวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยา วัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรีย และเชื้อรา และตรวจสอบ histologie
สองเจ Electwphoresis สาม-ples ถูก homogenized เป็นกลุ่มกับ dounces แก้วใน 1 mL แต่ละบัฟเฟอร์ lysis การออสโมติกประกอบด้วย nucle ase, inhibitors ฟอสฟาเตส และผลรติเอส ถัดไป 500 |iL โซเดียม dodecyl ซัลเฟตบัฟเฟอร์เดือด (SDS) โดยไม่ต้องเข้ามา mercaptoethanol บาท และตัวอย่างถูกความร้อนในน้ำน้ำเดือด 5 นาที Quantization โปรตีนรวมที่ดำเนินการ โดยการ bicinchoninic กรดทดสอบ (เพียร์ซ ร็อคฟอร์ด อิลลินอยส์) ตัวอย่างแล้วผสมกับ 6.0 mg/mL ใน SDS ส่วนเท่ากันต้มบัฟเฟอร์และบัฟเฟอร์ของแซมเปิ้ลยูเรียก่อนการโหลด Electro phoresis สองที่ดำเนินการตามวิธี pholine น.ผู้ขนส่ง โดยเคนดริก Labs, Inc (เมดิสัน), เป็นดังนี้ Isoelectric เน้นทำออกมาในหลอดแก้วเส้นผ่านศูนย์กลางภายใน 3.0 มม. มี ampholines ค่า pH 3.5-10 2.0% (เวลาออก Amersham, Pis-cataway เสื้อใหม่) kilovolt 20 ชั่วโมง หนึ่ง mi - crogram เป็นมาตรฐานภายใน isoelectric มุ่งพัฒนา
tropomyosin ถูกเพิ่มเข้าไปตัวอย่าง หลังจาก equili-bration ใน 10 นาที "บัฟเฟอร์ 0" (10% glycer-ol, 50 mmol/L dithiothreitol, 2.3% SDS และโมล 0.0625 L ตรี pH 6.8), หลอดเจถูกปิดผนึกไปยังด้านบนของเจซ้อนที่ overlaid เจพื้นอะคริลาไมด์ 10% (1.0 mm หนา) SDS พื้นเจ electro resis โพธิ์ขาว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เรื้อรัง rhinosinusitis พร้อมด้วยจมูก proteomic สัตว์น้ำทับถมกันการวิเคราะห์ที่
ดาวิด C upton MD Nathan V welham ปริญญาเอก John s .ยังมีปัญหาแวดล้อมอื่นๆ. W . md ปริญญาเอก Walker phdf thomasr . pasic วัตถุประสงค์ MD

เรื้อรัง rhinosinusitis สัตว์น้ำทับถมกันพร้อมด้วยจมูก( crswnp )คือ subtype รุนแรงของ rhinosinusitis เรื้อรังที่สามารถส่งผลต่อผู้ป่วยแม้การแทรกแซงทางด้านการแพทย์และการผ่าตัด.วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เป็นการใช้เทคนิคของ proteomics เพื่อตรวจสอบความแตกต่างในความหลากหลายโปรตีน ภายใน mucosa sinonasal ของผู้ป่วยที่มี crswnp เมื่อเทียบกับการควบคุมการมี สุขภาพ ดี วิธีใดวิธีหนึ่งในการศึกษากรณีการควบคุมที่ศูนย์กลางทางการแพทย์การศึกษา - การเอาใจใส่mucosa sinonasal เก็บเกี่ยวจาก 3 ผู้ป่วยที่มี crswnp และ 3 ผู้ป่วยการควบคุมกำลังตัด transsphenoidal ของเนื้องอก(เยื่อ)ที่ขับเสมหะ electrophoresis เจลสอง - สามมิติได้ใช้เพื่อระบุโปรตีนพร้อมด้วยความหลากหลายแบบยกระดับหรือลดลงในผู้ป่วย crswnp เมื่อเทียบกับการควบคุม โปรตีนที่แสดงความแตกต่างความหลากหลายมากที่สุดที่มีลักษณะโดย spectrometry จำนวนมาก ผลการค้นหามากกว่า 300 โปรตีนมากมายชนชั้นล่าง( P < 0.05 )ได้รับการระบุว่า จำนวนมากของสายพันธุ์โปรตีนเหล่านี้มีส่วนเกี่ยวข้องในการตอบสนองอาการอักเสบที่โฮสต์ ผู้ป่วยโปรตีนสูง - การควบคุมใน crswnp รวมถึง lysophospholipase eosinophil โดยมีอัตราส่วนที่( R )ของ 18.13 Rho Fair - จีดีพีไม่ลงเนื้อเห็นด้วยยาป้องกัน 2 ( r = 2.80 )และ apolipoprotein 1 ( r = 1.73 )โปรตีนลง - การควบคุมในผู้ป่วย crswnp รวมถึง catalase ( r = -5.87 ) annexin Al ( r = -6.27 )และ Keratin II 8 ( r = -6.73 ) การวิเคราะห์อย่างละเอียดของสายพันธุ์โปรตีนเพิ่มเติมมีสรุปไว้ดังนี้: บทสรุปวิธีการ proteomic ที่ช่วยให้การตรวจจับความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในความอุดมสมบูรณ์โปรตีนใน crswnp และจัดให้บริการความรู้ความเข้าใจที่โดดเด่นใน pathophysiology ของโรคที่พบเห็นได้ทั่วไปนี้. คำหลักannexin ที่ 1 , apolipoprotein ที่ 1 ,เรื้อรัง rhinosinusitis , eosinophil ,จมูก polyp , polyposis pathophysiology , proteomics .

แนะนำ
เรื้อรัง rhinosinusitis ( CRS )ซึ่งเป็นโรคเรื้อรังที่พบบ่อยในประเทศสหรัฐอเมริกาที่มีผลต่อ 14% เป็น 16% ของประชากรในเมือง"แม้ว่าจะมีบุคลากรจากหลายสาขาการวิจัยได้ทุ่มเทเพื่อการศึกษาโรค,pathophysiology ของ crsis ยังไม่เข้าใจอย่างเต็ม เป็นความคิดในการมี anumber ของทำให้มีผลรวมถึงการติดเชื้ออักเสบพันธุกรรมเกี่ยวกับกาย วิภา คและความไวทางพันธุกรรม ตามแนวสเปกตรัมของโรคนี้ rhinosinusitis เรื้อรังด้วยสัตว์น้ำทับถมกันออกทางจมูก( crswnp )คือ subtype อย่างรุนแรงที่อักเสบ EO - sinophilic แบบต่อเนื่อง withpolyps mucosa edematousและหนาขึ้น sinonasal secretions ,ที่ POS - Es ให้การบำบัดโรคความท้าทายในการทำงานเกี่ยวกับแม้ว่า medi - CAL และการผ่าตัดการแทรกแซง 2 ก่อนหน้าของสมนาคุณดีเอ็นเอ microarray immunohistochemical และการศึกษาที่ pathophysiology ของโรคมีคำแนะนำที่ใช้สำหรับระบบสำรองที่อาจเป็น dysregulation ของปกติ mucosal ภูมิคุ้มกัน ของร่างกายกลไกที่ทำเพื่อปกป้องหรือซ่อมแซมที่จีนจมูก epithelium . -
4 เมื่อไม่นานมานี้ proteomics ได้ถูกนำมาใช้เพื่อการศึกษาระบบสำรองเป็นหลักเพราะจะช่วยให้คุณลักษณ์พร้อมกันทั้งระบบของโปรตีนทั้งหมดที่อยู่ใน สภาพ ทางชีววิทยาให้ในเวลาที่กำหนดให้ เทคนิคที่ใช้ในการวิจัย proteomic ประกอบด้วย 1 )การแยกโมเลกุลของโปรตีนจากเนื้อสัตว์ซึ่งมีรูเล็กผสมน้ำยาทำความสะอาดหรือผ่าน electrophoresis CHROMA คือเจล - tography2 )ความเสียใจที่แยกจากกันเป็นโปรตีน spectrometry (มิลลิวินาที)เพื่อสร้าง characteris - TIC มวลชน Spectra ,และ 3 )การเปรียบเทียบข้อมูลจำเพาะที่มวลชน - TRA กับจัดตั้งฐานข้อมูลเพื่อระบุ Pro - teins ของดอกเบี้ย. เทคนิคเหล่านี้ได้รับการ usedto ระบุความแตกต่างในเชิงปริมาณและในผู้ป่วยและ S ject พร้อมด้วยระบบสำรอง.
โดยส่วนใหญ่แล้วของโปรตีน previ - ously ระบุว่ามีส่วนเกี่ยวข้องกับในโดยสันดานและจากกรมที่ทำการผ่าตัดของ otolaryngology ( upton welham pasic )และกรมทางประสาทศัลยศาสตร์(ยัง)โรงพยาบาลและคลินิกและ University of Wisconsin Madison , Wisconsin และกรมสรีรศาสตร์ University of Arizona Tucson , Arizona ( Walker )การสนับสนุนโดยการสนับสนุนทางการเงินให้จาก American Academy of otolaryngic โรคภูมิแพ้ (ทุนการศึกษาถนน)และ University of Wisconsin กรมการผ่าตัดของ otolaryngology † ผู้เสียชีวิต. นำเสนอในที่ประชุมของ American Academy of otolaryngic โรคภูมิแพ้ San Diego , California วันที่ 2-4 ตุลาคม , 2009 และการประชุมของวิสคอนซินสังคมของ otolaryngology Madison , Wisconsin วันที่ 24-25 ตุลาคม2009 ..การติดต่อสื่อสารทางโทมัส. R . pasic MD แผนกของการผ่าตัดของโรงพยาบาลและคลินิก otolaryngology และ University of Wisconsin Madison Ave 600 เขตพื้นที่ Highland ป้องกันได้รับการป้องกันและ mucosal 53792 .
ไวน์. วันที่การสอบสวนของ mucosa proteomic sinonasal ของผู้ป่วยที่มี crswnp ได้รับการยืนยันว่า.
เทคนิคมี ศักยภาพ ที่จะระบุโปรตีนที่โดดเด่นใน mucosa ของผู้ป่วยที่มี crswnp ซึ่งในทางกลับกันอาจจะเพิ่มความเข้าใจของ pathophysiology ของโรคและเข้าใจเป้าหมายใหม่สำหรับการดำเนินการเพื่อการบำบัดโรควัตถุประสงค์ของการศึกษานี้ได้ในการสืบสวนสอบสวนความแตกต่างในโปรตีนจำนวนมากอยู่ ภายใน sinonasal mucosa crswnp เมื่อเทียบกับผู้ป่วยที่มีการถ่าย ภาพ มี สุขภาพ ดีโดยการใช้ของที่ proteomic แนวทางที่ไม่มีการใช้งานอยู่ sinonasal อักเสบ Con - เก็บเข้าสต็อกบน preoperative เป็นการตรวจการถ่าย ภาพ และการส่องกล้องก่อนออกทางจมูกเนื้อเยื่อตัวอย่าง fxclu - เกณฑ์ซียงรวมถึงการใช้ยาใช้งานอยู่การไม่สามารถที่จะช่วยให้การตั้ง ครรภ์ ได้รับความยินยอมจากแจ้งหรือโรคข้ออักเสบลูปัสทั้งนี้การให้นมการส่งผลกระทบต่อจมูกและด้วนน้ำนม(เช่น granulomatosis ของ wegener )และ neoplasms sinonasal .
วัสดุวิธีการและทางเลือก
ผู้ป่วย. การศึกษานี้ได้รับอนุมัติโดยสถาบันตรวจสอบบอร์ดที่มหาวิทยาลัยวิสคอนซินและคลินิกและโรงพยาบาล( Madison wiscon - บาป)และทุกเรื่องทำให้ได้รับความยินยอมจากทราบลงนามกรณีศึกษา - การควบคุมที่ได้ดำเนินการเพื่อ determinedifferences ในจำนวนมากโปรตีนในผู้ป่วยที่มี crswnp เมื่อเทียบกับในเรื่องปกติ swere ผู้ป่วยที่คัดเลือกจากอาวุโสผู้เขียน( T . R . P .) prac - tice ยอดรวมของ 6 ผู้ใช้บริการแบบเฉพาะราย( 3 ผู้ป่วย 3 การควบคุม)เข้าร่วมในการศึกษาที่การวินิจฉัยของ crswnpwas ตามที่ตั้งค่าเกณฑ์ของทางการแพทย์ก่อนหน้านี้ de - ระวางโทษปรับโดย American Academy of otolaryngolo - กายอานา - หัวและคอเรื้อรังการผ่าตัด rhinosinusitistask มีผลใช้บังคับแล้วเป็นการยืนยันบนจมูกการส่องกล้อง.
ทั้งหมดได้รับผู้ป่วยที่ preoperative coronal COM - puted tomographic สแกนของด้วนน้ำนมในกระดูก, Win - Dow Jones - การตั้งค่าเพื่อประเมินได้เท่า sinona - SAL โรค(รูปที่ 1 )ก่อนการผ่าตัดช่องในกะโหลกศีรษะ endoscopie ผู้ป่วยที่ได้รับพร้อมด้วย crswnp 1 สัปดาห์ของยาปฏิชีวนะ oralprednisone และช่องปาก ผู้ใช้บริการแบบเฉพาะรายที่เลือกไปยังทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมในการศึกษานี้ได้คัดเลือกจากผู้ป่วยที่ได้รับการปรับปรุงใหม่ของการตัดส่วนหนึ่งส่วนใดของร่างกายออก gery (เยื่อ)ที่ขับเสมหะสำหรับอาการทางคลินิกของ rhinosinusitis และมีคอลเลคชั่น
ตัวอย่างตัวอย่างเนื้อเยื่อของเยื่อบุ mucosal ของด้วนน้ำนม paranasal ที่ได้จากการเก็บข้อมูล ภายใต้ คำแนะนำของ endoscopie ล้างทำความสะอาดคราบซึนามิน้ำทะเลในโซลูชันโซเดียมคลอไรด์ 0.9% และจากนั้นกด - มา - เซนในไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างเนื้อเยื่อที่มีการดูแลรักษาที่ -80 ° C จนกว่าการวิเคราะห์ ตัวอย่างเนื้อเยื่อทั้งหมดเป็นไปได้ทั้ง ethmoid หรือรูปลิ่มด้วนน้ำนมเนื้อเยื่อจากเขตพื้นที่เกี่ยวกับนาสิก - แบริ่งของช่องจมูกไม่ได้เก็บเกี่ยว เนื้อเยื่อทั้งหมดถูกส่งไปสดใหม่สำหรับการวิเคราะห์ทดสอบด้านจุลชีววิทยาทางวัฒนธรรมเกิดจากเชื้อแบคทีเรียและเชื้อราและการตรวจสอบ histologie เจล electwphoresis
two-dimensional . สาม - ples สดพร่องมันเนยเป็นคนที่พร้อมด้วยกระจก dounces ใน 1 มล.แต่ละครั้งของบัฟเฟอร์ lysis เน็ทนำมาประกอบด้วย nucle - ASE phosphatase ผลลัพธ์โรคหลอดเลือดสมองแตกและยาป้องกัน protease ที่ ถัดไป500 จุนสี dodecyl โซเดียม IL | NAME (เซิร์ฟเวอร์ SDS )บัฟเฟอร์สำหรับการต้มโดยไม่ต้องß - mercaptoethanol ได้ถูกเพิ่มลงตัวอย่างและเป็นสระน้ำอุ่นในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 5 นาที quantization โปรตีนรวมได้ดำเนินการโดย bicinchoninic กรดสอบ(แทง Rockford Illinois ) ตัวอย่างที่มีการเจือจาง 6.0 มล./มก.ในส่วนเท่ากับสามยูเรียและปุ๋ยชนิด Buffer เดือดเซิร์ฟเวอร์ SDS - PLE บัฟเฟอร์ก่อนทำการโหลดแล้วสอง - สามมิติไฟฟ้า - phoresis ได้ดำเนินการตามวิธีการของผู้ให้บริการช่วงเช้า - pholine โดย kendrick ห้องปฏิบัติการ( Madison )เป็นดังนี้: isoelectric โฟกัสถูกนำตัวไปยังออกไปในท่อดูดฝุ่นทำจากกระจกด้านในของเส้นผ่านศูนย์กลาง 3.0 มม.พร้อมด้วย 2.0% pH 3.5 - 10 ampholines ( amersham ชีวศาสตร์ Manneken Pis - cataway New Jersey )สำหรับ 20 ชั่วโมง kilovolt . อยู่ห่างออกไปในระยะทางหนึ่ง - crogram ของ isoelectric ที่เน้นมาตรฐาน ภายใน
tropomyosinถูกเพิ่มในตัวอย่างนี้ หลังจาก equili - bration สำหรับ 10 นาทีใน"บัฟเฟอร์ 0 "( 10% glycer - OL , 50 มิลลิโมล/ L dithiothreitol , 2.3% เซิร์ฟเวอร์ SDS ,และ 0.0625 Website : www . mol / L บริษัททริสเรทติ้งจำกัด, pH 6.8 ),ท่อดูดฝุ่นเจลเป็นปิดผนึกไปที่ด้านบนของที่บีบอัดเจลที่หุ้มอะคริลาไมด์ 10% แผ่นเจล( 1.0 มม.หนา) เซิร์ฟเวอร์ SDS จากแม่เหล็กไฟฟ้าเจลโพธิ์ชะพลู - resis W