2. Material and methods2.1. Experim

2. Material and methods
2.1. Experimental design
Soils were collected in October 2013 from three different sites attheUSDA-ARSBeltsvilleAgriculturalResearchCenter,Beltsville, MD, USA. Two soils were from cultivated fields, Farming Systems Project (FSP) and South Farm (SF) following maize rotation, while thethird(Vancy)wasfromanuncultivatedsiteundergrass.TheFSP soilisclassified(SoilSurveyStaff,2010)asMattapexsiltloam(fine silty, mixed, active, mesic Aquic Hapludults; Order Ultisol), while the South Farm and Vancy soils are classified as Codorus-Hatboro loam and Codorus-Hatboro sandy loam, respectively (fine-loamy, mixed, active, mesic Fluvaquentic Dystrudepts; Order Inceptisol). Physical and chemical characteristics are reported in Table 1. All soils were sieved (5mm) and root matter was chopped into small pieces and combined with the sieved soil. The soils were stored at 4◦C until use. The experimental design consisted of a complete randomized greenhousetrialwith3soilsand6replicates.Theentireexperiment was run twice in succession under identical growing conditions. Five maize (roundup ready DKC 61–72) seeds were sown in black plastic pots (21cm×17cm diameter) filled with the previously describedsoils.Aftergerminationeachpotwasthinnedto3seeds. Thesoilswerefertilizedwithnitrogen(50mg/kg)usingammonium nitrate in 2 split doses 2 weeks after germination. Supplemental artificiallightingwasusedona14hlight/10hdarkcycleandplants were grown at a temperature of 25◦C±2◦C. Pots were watered to field capacity of the soils. Plants were harvested 48 days after germination. Rhizosphere soilwasshakenofftherootswhichwerethenwashed.Rhizosphere soilandrootsfromeachreplicatepotweresplitinto2samples.One set of roots and soil was stored at 4◦C for root staining and spore extractionwhiletheothersetwasstoredat−20◦Cforlipidanalysis.
2.2. Microscopic determination of AMF root colonization and spore density
About 1.5–2.0g (fresh weight) fine roots were used for staining and assessment of AMF colonization. Roots were stained with trypanblue(0.5gtrypanblueinamixtureof876mllacticacidsolution (Sigma–Aldrich, Milwaukee, WI, USA), 64ml glycerol, and 60ml H2O) after clearing the roots in 10% KOH (Phillips and Hayman, 1970). Stained roots were observed for vesicles, arbuscules, and hyphaeunderacompoundmicroscope(NikonEclipseE600,Nikon, Japan) at 20× magnification and assessed for total AMF root colonization using the grid line-intersect method (Giovannetti and Mosse, 1980). AMF spores were extracted from 20g (fresh weight) soil by the sieving and decanting method (Gerdemann and Nicholson, 1963), withsubsequentsucrosegradientcentrifugation(IansonandAllen, 1986). Healthy spores were counted in gridded petri dishes from an aliquot of spore suspension under a stereo zoom microscope
(Olympus SZX12, Center Valley, PA, USA) and were expressed as number/g dry soil.
2.3. Fatty acid analysis
Solvents were HPLC or GC grade. Water was deionized to 16–18M. All other reagents were reagent grade. PLFA were analyzed as previously described (Buyer and Sasser, 2012) with a few modifications for roots and NLFA. Root samples were ground with liquidnitrogenbeforelyophilizationand25–30mgdryweightwas used for analysis. Lipids were extracted and the lipids fractionated by solid-phase extraction. For NLFA, an additional internal standard, 19:0 trinonadecanoin glyceride (catalog # T-165, NuChek Prep, Elysian, MN, USA), was added to the extractant. The chloroform fraction from the solid-phase extraction was used for NLFA analysis while the 5:5:1 chloroform:methanol:water fraction was used for PLFA analysis. NLFA and PLFA were converted to fatty acid methyl esters by transesterification and analyzed by gas chromatography. ELFAwereanalyzedbydirecttransesterificationofsoilindilute alkaline methanol as previously described (Buyer et al., 2002) withthefollowingmodifications.19:0phosphatidylcholine(Avanti PolarLipids,Alabaster,AL)wasaddedasaninternalstandardwith the KOH–methanol reagent, and the fatty acid methyl esters were dissolved in 0.5ml of hexane for analysis by GC. Gas chromatography was performed as previously described (BuyerandSasser,2012)onanAgilent6890GC(AgilentTechnologies,Wilmington,DE,USA)andFAMEprofileswereidentifiedusing theMIDIPLFAD1calibrationmixandpeaknamingtable(MIDI,Inc., DE, USA). Random samples were also analyzed by GC–MS (Clarus 500,Perkin-Elmer,Waltham,MA,USA)inordertoconfirmthefatty acid identifications.
2.4. Statistical analysis
Statistical analysis was carried out in SAS version 9.2 (Cary, NC, USA). Residuals of biomarker concentrations and spore densities were normally distributed, indicating that parametric tests were appropriate. ANOVA of biomarker concentrations and spore densitieswerecarriedoutusingagenerallinearmodel,whilepercent colonization was analyzed using a generalized linear model employingalink-logitfunction(Stroup,2014).Pearsoncorrelation coefficients were calculated in SAS.
3. Results
Microscopic observation of spores (Schenck and Perez, 1990) indicated that the predominant species in Vancy soil was Rhizophagusirregularis(formerlyGlomusintraradices),whileFSPandSouth FarmsoilsweredominatedbyGigasporamargarita,Gigasporagigantea, and Glomus etunicatum (data not shown). While results were generally very similar for the two experiments,inafewcasestherewerestatisticallysignificantdifferences, so all results are presented separately for each experiment. In the rhizosphere(Table2),sporecountswerehighestinSouthFarmand FSP soils and lowest in Vancy soil. Similar results were obtained for the NLFA and ELFA biomarkers, while the PLFA biomarker was

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การทดลองออกแบบดินเนื้อปูนถูกเก็บรวบรวมในเดือน 2013 ตุลาคมจากสามไซต์อื่น attheUSDA-ARSBeltsvilleAgriculturalResearchCenter, Beltsville, MD สหรัฐอเมริกา สองดินเนื้อปูนได้จากปลูก fields เกษตรระบบโครงการ (FSP) และใต้ฟาร์ม (SF) ต่อข้าวโพดหมุน ในขณะที่ wasfromanuncultivatedsiteundergrass thethird (Vancy) TheFSP soilisclassified (SoilSurveyStaff, 2010) asMattapexsiltloam (fine ปนทรายแป้ง ผสม ใช้งาน mesic Aquic Hapludults สั่ง Ultisol), ในขณะที่ดินเนื้อปูนใต้ฟาร์มและ Vancy classified เป็น loam Codorus Hatboro และ Codorus-Hatboro ทราย loam ตามลำดับ (fine loamy ผสม งาน mesic Fluvaquentic Dystrudepts สั่ง Inceptisol) ลักษณะทางกายภาพ และทางเคมีมีรายงานในตารางที่ 1 ดินเนื้อปูนทั้งหมดถูก sieved (5mm) และเรื่องรากสับเป็นชิ้นเล็ก ๆ และผสมกับดิน sieved ดินเนื้อปูนถูกเก็บไว้ที่ 4◦C จนใช้ การออกแบบการทดลองประกอบด้วยการ greenhousetrialwith3soilsand6replicates randomized สมบูรณ์ Theentireexperiment ถูกใช้สองสภาวะเติบโตเหมือนกัน ข้าวโพดที่ห้า (พร้อม roundup DKC 61-72) เมล็ดถูกหว่านในกระถางพลาสติกดำ (21 ซม. × 17 ซม.เส้นผ่านศูนย์กลาง) filled กับ describedsoils ก่อนหน้านี้ Aftergerminationeachpotwasthinnedto3seeds Thesoilswerefertilizedwithnitrogen (50mg/kg) ไนเตรต usingammonium ในปริมาณแบ่ง 2 2 สัปดาห์หลังจากการงอก Artificiallightingwasusedona14hlight 10hdarkcycleandplants เพิ่มเติมได้เติบโตที่อุณหภูมิ 25◦C±2◦C หม้อมีผู้ field จุของดินเนื้อปูน พืชเก็บเกี่ยว 48 วันที่หลังจากการงอกได้ ไรโซสเฟียร์ soilwasshakenofftherootswhichwerethenwashed ไรโซสเฟียร์ soilandrootsfromeachreplicatepotweresplitinto2samples ชุดหนึ่งของรากและดินถูกเก็บไว้ที่ 4◦C สำหรับ extractionwhiletheothersetwasstoredat−20◦Cforlipidanalysis ย้อมสีและสปอร์ราก2.2 กำหนดกล้องจุลทรรศน์ AMF รากสนามและสปอร์ความหนาแน่นประมาณ 1.5 – 2.0 g (น้ำหนักสด) fine รากใช้สำหรับย้อมสีและการประเมินผลของ AMF อาณานิคม รากมีสีกับ trypanblue (0.5gtrypanblueinamixtureof876mllacticacidsolution (ซิก-Aldrich มิลวอกี WI สหรัฐอเมริกา), กลีเซอรมล 64 และ 60ml H2O) หลังจากการล้างรากใน 10% เกาะ (ไขควงและเฮย์แมน 1970) สังเกตที่ 20 × magnification สำหรับอสุจิ arbuscules และ hyphaeunderacompoundmicroscope (NikonEclipseE600, Nikon ญี่ปุ่น) และประเมินรวม AMF รากรากทิ้งคราบสนามโดยใช้ตารางบรรทัดอินวิธี (Giovannetti และ Mosse, 1980) AMF เพาะเฟิร์นถูกสกัดจากดิน 20 กรัม (น้ำหนักสด) โดย sieving และ decanting วิธี (Gerdemann และ Nicholson, 1963), withsubsequentsucrosegradientcentrifugation (IansonandAllen, 1986) เพาะเฟิร์นสุขภาพนับได้ในจาน petri gridded จากส่วนลงตัวที่การระงับสปอร์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์สเตอริโอซูม(SZX12 โอลิมปัส วัลเลย์ศูนย์ PA สหรัฐอเมริกา) และได้แสดงเป็นดินแห้ง จำนวน/g2.3 การวิเคราะห์กรดไขมันเกรด HPLC หรือ GC หรือสารทำละลายได้ น้ำถูก deionized 16-18 เมตร รีเอเจนต์เกรด reagents อื่น ๆ ได้ PLFA ได้วิเคราะห์อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ผู้ซื้อและ Sasser, 2012) มี modifications กี่รากและ NLFA ตัวอย่างรากล่างกับ liquidnitrogenbeforelyophilizationand25 – 30mgdryweightwas ใช้สำหรับการวิเคราะห์ได้ มีขยายโครงการ และโครงการที่แบ่ง โดยการแยกเฟสของแข็ง สำหรับ NLFA มาตรฐานภายในเพิ่มเติม glyceride trinonadecanoin 19:0 (แค็ตตาล็อก# T-165, NuChek เตรียม ค้า MN สหรัฐอเมริกา), ถูกเพิ่มเข้าไป extractant ใช้สำหรับวิเคราะห์ NLFA ขณะ 5 เศษคลอโรฟอร์มจากแยกเฟสของแข็ง: เศษส่วน 5:1 คลอโรฟอร์ม: เมทานอล: น้ำใช้สำหรับการวิเคราะห์ของ PLFA NLFA และ PLFA ถูกแปลงเป็นไขมันกรด methyl esters โดย transesterification และวิเคราะห์ โดย chromatography ก๊าซ ELFAwereanalyzedbydirecttransesterificationofsoilindilute อัลคาไลน์เมทานอล (ผู้ซื้อและ al., 2002) ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็นรีเอเจนต์ wasaddedasaninternalstandardwith เกาะ – เม withthefollowingmodifications.19:0phosphatidylcholine (PolarLipids เรียนโรส อะลาบาสเทอร์ AL) และ esters methyl กรดไขมันถูกละลายใน 0.5ml ของเฮกเซนสำหรับวิเคราะห์ ด้วย GC Chromatography ก๊าซทำเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (BuyerandSasser, 2012) onanAgilent6890GC (AgilentTechnologies วิลมิ DE สหรัฐอเมริกา) andFAMEprofileswereidentifiedusing theMIDIPLFAD1calibrationmixandpeaknamingtable (MIDI, Inc., DE สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างที่สุ่มได้ยังวิเคราะห์ ด้วย GC – MS (Clarus 500 เพอร์เอลเมอ Waltham, MA, USA) inordertoconfirmthefatty identifications กรด2.4. สถิติวิเคราะห์วิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินใน SAS เวอร์ชัน 9.2 (แครีแกรนต์ NC, USA) ค่าคงเหลือของไบโอมาร์คเกอร์ความเข้มข้นและความหนาแน่นของสปอร์ได้ปกติกระจาย ระบุว่า ทดสอบพาราเมตริกเหมาะสม การวิเคราะห์ความแปรปรวนของความเข้มข้นของไบโอมาร์คเกอร์ และสปอร์ densitieswerecarriedoutusingagenerallinearmodel, whilepercent สนามถูกวิเคราะห์โดยใช้ employingalink-logitfunction(Stroup,2014) แบบจำลองเชิงเส้นเมจแบบทั่วไป Pearsoncorrelation coefficients ถูกคำนวณใน SAS3. ผลลัพธ์การสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์ของเพาะเฟิร์น (Schenck และเปเรซ 1990) ระบุว่า สปีชีส์กันในดิน Vancy คือ Rhizophagusirregularis (formerlyGlomusintraradices), whileFSPandSouth FarmsoilsweredominatedbyGigasporamargarita, Gigasporagigantea และ Glomus etunicatum (ข้อมูลไม่แสดง) ในขณะที่ผลลัพธ์โดยทั่วไปคล้ายกันมากสำหรับการทดลอง inafewcasestherewerestatisticallysignificantdifferences ผลลัพธ์ทั้งหมดเพื่อให้มีแสดงแยกต่างหากสำหรับแต่ละการทดลอง ในไรโซสเฟียร์ (Table2), ดินเนื้อปูน FSP sporecountswerehighestinSouthFarmand และต่ำสุดใน Vancy ดิน ผลคล้ายได้รับสำหรับ biomarkers NLFA และ ELFA ในขณะไบโอมาร์คเกอร์ PLFA

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 การออกแบบการทดลองดินที่ถูกเก็บรวบรวมในเดือนตุลาคม 2013 จากสามเว็บไซต์ที่แตกต่างกัน attheUSDA-ARSBeltsvilleAgriculturalResearchCenter, Beltsville, MD, USA
สองดินมาจาก elds สายการปลูกฝังงานเกษตรกรรมโครงการระบบ (FSP) และฟาร์มใต้ (เอสเอฟ) ต่อไปนี้การหมุนข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ในขณะที่ thethird (Vancy) wasfromanuncultivatedsiteundergrass.TheFSP soilisclassi เอ็ดสาย (SoilSurveyStaff 2010) asMattapexsiltloam (FI ปนทรายแป้งเนบราสก้าผสม, ปราดเปรียว, Mesic Aquic Hapludults; สั่งซื้อ Ultisol) ในขณะที่ฟาร์มภาคใต้และดิน Vancy จัดประเภทเป็นดินร่วนปน Codorus-Hatboro และ Codorus-Hatboro ดินร่วนปนทรายตามลำดับ (FI NE-ดินร่วนผสม, ปราดเปรียว, Mesic Fluvaquentic Dystrudepts; Inceptisol สั่งซื้อ) ลักษณะทางกายภาพและทางเคมีที่มีการรายงานในตารางที่ 1 ดินทั้งหมดถูกร่อน (5mm) และเรื่องรากถูกสับเป็นชิ้นเล็ก ๆ และรวมกับดินร่อน ดินที่ถูกเก็บไว้ที่4◦Cจนถึงการใช้งาน การออกแบบการทดลองประกอบด้วย greenhousetrialwith3soilsand6replicates.Theentireexperiment แบบสุ่มสมบูรณ์ดำเนินการอย่างต่อเนื่องเป็นครั้งที่สองภายใต้สภาพการเจริญเติบโตเหมือนกัน ห้าข้าวโพด (บทสรุปพร้อม DKC 61-72) เมล็ดถูกหว่านในกระถางพลาสติกสีดำ (21cm 17cm เส้นผ่าศูนย์กลาง×) สาย lled กับก่อนหน้านี้ describedsoils.Aftergerminationeachpotwasthinnedto3seeds Thesoilswerefertilizedwithnitrogen (50mg / kg) ไนเตรต usingammonium ในปริมาณ 2 แยก 2 สัปดาห์หลังจากงอก เสริม Arti สาย ciallightingwasusedona14hlight / 10hdarkcycleandplants ปลูกที่อุณหภูมิ25◦C±2◦C หม้อถูกรดน้ำเพื่อ fi ELD ความจุของดิน พืชเก็บเกี่ยว 48 วันหลังจากงอก บริเวณราก soilwasshakenofftherootswhichwerethenwashed.Rhizosphere soilandrootsfromeachreplicatepotweresplitinto2samples.One ชุดของรากและดินถูกเก็บไว้ที่4◦Cสำหรับการย้อมสีของรากและสปอร์ extractionwhiletheothersetwasstoredat-20◦Cforlipidanalysis.
2.2 ความมุ่งมั่นของการล่าอาณานิคมกล้องจุลทรรศน์ราก AMF
และความหนาแน่นของสปอร์เกี่ยวกับ1.5-2.0g (น้ำหนักสด) สายตะวันออกเฉียงเหนือรากถูกนำมาใช้สำหรับการย้อมสีและการประเมินผลของการล่าอาณานิคมสารเลว รากถูกย้อมด้วยสี trypanblue (0.5gtrypanblueinamixtureof876mllacticacidsolution (Sigma-Aldrich, Milwaukee, WI, USA), กลีเซอรอล 64ml และ 60ml H2O) หลังจากการล้างรากใน 10% KOH (ฟิลลิปและเฮย์แมน, 1970) รากสีถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับถุง, arbuscules และ hyphaeunderacompoundmicroscope (NikonEclipseE600 Nikon, ญี่ปุ่น) ที่ 20 ×ไอออนบวกสาย Magni และการประเมินสำหรับการล่าอาณานิคมราก AMF รวมโดยใช้วิธีการตัดสายตาราง (Giovannetti และมอสส์, 1980) สปอร์ AMF ถูกสกัดจาก 20 กรัม (น้ำหนักสด) ดินโดย sieving และวิธี decanting (Gerdemann และนิโคลสัน, 1963) withsubsequentsucrosegradientcentrifugation (IansonandAllen, 1986) สปอร์ที่มีสุขภาพดีถูกนับรวมอยู่ในอาหารเลี้ยงเชื้อจาก gridded aliquot ของสปอร์แขวนลอยภายใต้กล้องจุลทรรศน์ซูมสเตอริโอ
(โอลิมปั SZX12 ศูนย์วัลเลย์, PA, สหรัฐอเมริกา) และได้รับการแสดงเป็นจำนวน / g ดินแห้ง.
2.3 กรดไขมันวิเคราะห์ตัวทำละลายเป็น HPLC หรือเกรด GC
น้ำ deionized เพื่อ 16-18M ?. ทั้งหมดน้ำยาอื่น ๆ เกรดเอเจนต์ PLFA วิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ผู้ซื้อและผู้ Sasser 2012) กับไพเพอร์ Modi ไฟน้อยสำหรับรากและ NLFA ตัวอย่างรากมาบดกับ liquidnitrogenbeforelyophilizationand25-30mgdryweightwas ใช้ในการวิเคราะห์ ไขมันถูกสกัดและไขมัน fractionated โดยการสกัดของแข็งเฟส สำหรับ NLFA, มาตรฐานภายในเพิ่มเติม 19: 0 trinonadecanoin กลีเซอร์ไรด์ (แคตตาล็อก # T-165, NuChek เตรียมเซี่ยน, MN, USA) ถูกบันทึกอยู่ในสารสกัด ส่วนคลอโรฟอร์มจากการสกัดของแข็งเฟสถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ NLFA ขณะที่ 5: 5: 1 คลอโรฟอร์ม: เมทานอล: ส่วนน้ำที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ PLFA NLFA และ PLFA ถูกแปลงให้เอสเทอกรดไขมันโอเมธิลโดยสาย transesteri ไอออนบวกและวิเคราะห์โดยแก๊ส chromatography ELFAwereanalyzedbydirecttransesteri ไฟเมทานอลอัลคาไลน์ cationofsoilindilute ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ผู้ซื้อ et al, 2002). withthefollowingmodi สาย cations.19: 0phosphatidylcholine (Avanti PolarLipids, เศวตศิลา, AL) wasaddedasaninternalstandardwith สาร KOH-เมทานอลและกรดไขมันเมทิลเอสเตอร์ที่ถูกกลืนหายไปใน 0.5ml ของเฮกเซนสำหรับการวิเคราะห์โดย GC แก๊ส chromatography ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ theMIDIPLFAD1calibrationmixandpeaknamingtable (MIDI, Inc., DE, สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างที่สุ่มยังวิเคราะห์ GC-MS (Clarus 500, เพอร์กินเอลเมอวอลแทม, MA, USA) inordertocon สาย rmthefatty กรดไพเพอร์สายระบุ.
2.4 การวิเคราะห์ทางสถิติการวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการในรุ่น 9.2 เอสเอ (แครี, NC, USA)
เหลือความเข้มข้นและความหนาแน่น biomarker สปอร์มีการกระจายตามปกติการทดสอบแสดงให้เห็นว่ามีความเหมาะสมพารา วิเคราะห์ความแปรปรวนของความเข้มข้นและ biomarker densitieswerecarriedoutusingagenerallinearmodel สปอร์ล่าอาณานิคม whilepercent ได้รับการวิเคราะห์โดยใช้แบบจำลองเชิงเส้นทั่วไป employingalink-logitfunction (Stroup 2014) .Pearsoncorrelation COEF cients ไฟจะถูกคำนวณใน SAS.
3 ผลการสังเกตกล้องจุลทรรศน์ของสปอร์ (รงค์และเปเรซ, 1990) ชี้ให้เห็นว่าสายพันธุ์ที่โดดเด่นในดิน Vancy เป็น Rhizophagusirregularis (formerlyGlomusintraradices) whileFSPandSouth FarmsoilsweredominatedbyGigasporamargarita, Gigasporagigantea และ Glomus etunicatum (ไม่ได้แสดงข้อมูล)
ในขณะที่ผลการวิจัยโดยทั่วไปคล้ายกันมากสำหรับทั้งสองการทดลอง cantdifferences สาย inafewcasestherewerestatisticallysigni ดังนั้นผลลัพธ์ทั้งหมดจะถูกนำเสนอแยกต่างหากสำหรับแต่ละการทดลอง ในบริเวณราก (Table2) ดิน sporecountswerehighestinSouthFarmand FSP และต่ำสุดในดิน Vancy ผลที่คล้ายกันที่ได้รับสำหรับ NLFA และ biomarkers ELFA ขณะที่ biomarker PLFA เป็น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ดินออกแบบ
ทดลองเก็บในเดือนตุลาคม 2556 จากสามเว็บไซต์ที่แตกต่างกัน attheusda arsbeltsvilleagriculturalresearchcenter Beltsville , MD , สหรัฐอเมริกา จากสองดินปลูกจึง elds การเกษตรโครงการระบบ ( FSP ) และฟาร์มใต้ ( SF ) ต่อไปนี้ ข้าวโพด หมุน ในขณะที่ 3 ( vancy ) wasfromanuncultivatedsiteundergrass.thefsp จึงเอ็ด ( soilsurveystaff soilisclassi ,asmattapexsiltloam ( 2010 ) จึงไม่ปนทรายแป้งผสม , ปราดเปรียว , เมสิก aquic hapludults ; สั่งซื้ออุลติซอล ) ในขณะที่ฟาร์ม ใต้ ดิน vancy เป็น classi จึงเอ็ดเป็นดินร่วน hatboro codorus codorus ร่วนปนทรายและ hatboro ตามลำดับ ( จึงไม่ควรผสม , ปราดเปรียว , เมสิก fluvaquentic dystrudepts ; สั่งซื้ออินเซบติซอล ) ลักษณะทางกายภาพและทางเคมีจะมีการรายงานในตารางที่ 1ปริมาณขนาด ( มม. ) และ เรื่องรากก็สับเป็นชิ้นเล็ก ๆและรวมกับขนาดของดิน ดินที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 ◦ C จนใช้ การออกแบบการทดลองประกอบด้วย 1 greenhousetrialwith3soilsand6replicates สมบูรณ์ theentireexperiment ใช้สองครั้งในการทดแทนภายใต้เงื่อนไขการเติบโตเหมือนกันห้า ( Roundup ข้าวโพดพร้อม dkc 61 - 72 ) เมล็ดหว่านในกระถางพลาสติกสีดำ ( ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 21 ซม. × 17cm ) จึงฆ่ากับก่อนหน้านี้ describedsoils.aftergerminationeachpotwasthinnedto3seeds . thesoilswerefertilizedwithnitrogen ( 50 กิโลกรัม ) usingammonium 2 แยกปริมาณไนเตรทใน 2 สัปดาห์หลังจากการงอกจึงจำเป็นต้องเสริม ciallightingwasusedona14hlight / 10hdarkcycleandplants ปลูกที่อุณหภูมิ 25 C ±◦ 2 ◦ C หม้อถูกรดน้ำเพื่อถ่ายทอดความจุ ELD ของดิน พืชที่ถูกเก็บเกี่ยว 48 วัน หลังงอก รากราก soilwasshakenofftherootswhichwerethenwashed . soilandrootsfromeachreplicatepotweresplitinto2samples .หนึ่งชุดของรากและดินที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส◦รากติดสปอร์ extractionwhiletheothersetwasstoredat − 20 ◦ cforlipidanalysis .
2.2 . ด้วยการหารากและการ AMF
ความหนาแน่นสปอร์ประมาณ 1.5 – 2.0g น้ำหนักสดรากจึงไม่นำมาย้อมสี และประเมินว่าการการเป็นอาณานิคม รากถูกย้อมด้วยสีไตรแพนบลู ( 05gtrypanblueinamixtureof876mllacticacidsolution ( Sigma ) Aldrich Milwaukee , WI , USA ) , 64ml กลีเซอรอล และ 60 ml H2O ) หลังจากล้างรากใน 10% ( ฟิลิปส์ และ เกาะ Hayman , 1970 ) เปื้อนเป็นสังเกตสำหรับรากเล็ก arbuscules , และ hyphaeunderacompoundmicroscope ( nikoneclipsee600 , Nikon ,ญี่ปุ่น ) ที่ 20 ×แมคนิจึงไอออนบวกและประเมินการใช้ตารางรวมรากไรเส้นตัดกัน ( ซึ่งมีน้อยอย่างให้เลือกกินแบบ และมอสส์ , 1980 ) สารเลวสปอร์ถูกสกัดจาก 20 กรัม ( น้ำหนักสด ) ดินโดย sieving และริน ( และวิธีการ gerdemann นิโคลสัน , 1963 ) , withsubsequentsucrosegradientcentrifugation ( iansonandallen , 1986 )สปอร์สุขภาพมีจาน Petri gridded นับจากการเทศนาของช่วงล่างสปอร์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์สเตอริโอซูม
( Olympus szx12 , กลางหุบเขา , PA , USA ) และถูกแสดงเป็นหมายเลข / กรัม ดินแห้ง
2.3 การวิเคราะห์กรดไขมันเป็นตัวทำละลาย
HPLC เกรด GC . มีน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสาน 16 – 18 m  . สารเคมีอื่น ๆทั้งหมดเป็นเกรด 3 . plfa วิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( ผู้ซื้อและ Sasser ,2555 ) มีไม่กี่ชนิด สำหรับรากและ Modi จึง nlfa . ตัวอย่างรากบดกับ liquidnitrogenbeforelyophilizationand25 – 30mgdryweightwas ใช้สำหรับการวิเคราะห์ ไขมันสกัด และไขมัน โดยการสกัดลำดับส่วน . สำหรับ nlfa , มาตรฐานภายในเพิ่มเติม 19:0 trinonadecanoin กลีเซอไรด์ ( แคตตาล็อก# t-165 nuchek , เตรียมลิเซียน , MN , USA ) , เพิ่มเพื่อสกัด .คลอโรฟอร์มเศษส่วนจากส่วนสกัดที่ใช้ในการวิเคราะห์ nlfa ในขณะที่ 5:5:1 คลอโรฟอร์ม : เมทานอล : น้ำส่วนวิเคราะห์ plfa . และ nlfa plfa ซึ่งเป็นกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ โดย transesteri จึงไอออนบวกและวิเคราะห์โดยวิธีแก๊สโครมาโตกราฟี elfawereanalyzedbydirecttransesteri จึง cationofsoilindilute ด่างเมทานอลตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( ผู้ซื้อ et al . ,2002 ) จึงทำให้ withthefollowingmodi . 19:0phosphatidylcholine ( ลุกขึ้น polarlipids เศวตศิลา , Al ) wasaddedasaninternalstandardwith เกาะ–เมทานอลรีเอเจนต์และกรดไขมันเมทิลเอสเทอร์ที่ละลายในเฮกเซน 0.5ml ของการวิเคราะห์ด้วยเครื่อง GC . แก๊สโครมาโตกราฟีได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( buyerandsasser , 2012 ) onanagilent6890gc ( agilenttechnologies Wilmington , DE , ,สหรัฐอเมริกา ) andfamepro จึง leswereidenti จึง edusing themidiplfad1calibrationmixandpeaknamingtable ( MIDI , Inc . , USA ) ตัวอย่างสุ่มยังวิเคราะห์โดย GC และ MS ( clarus 500 , เพอร์กินเอลเมอร์ Waltham , MA , USA ) inordertocon จึง identi กรดจึงทำให้ rmthefatty .
2.4 . สถิติวิเคราะห์
สถิติวิเคราะห์ข้อมูล SAS รุ่น 9.2 ( แครี่ , NC , USA )ความคลาดเคลื่อนของปริมาณไบโอมาร์คเกอร์สปอร์ความหนาแน่นและมีการกระจายตามปกติ ระบุว่า การทดสอบพาราเมตริก เหมาะสมแล้ว การวิเคราะห์ความแปรปรวนของปริมาณไบโอมาร์คเกอร์ และ densitieswerecarriedoutusingagenerallinearmodel สปอร์ , การล่าอาณานิคม whilepercent ถูกวิเคราะห์โดยใช้ตัวแบบเชิง employingalink logitfunction ( สตรูป 2014 ) ในระดับ coef จึง cients คำนวณ
ใน SAS3 . ผลการสังเกต
กล้องจุลทรรศน์สปอร์ ( Schenck และ เปเรซ , 1990 ) พบว่า สายพันธุ์เด่นใน vancy ดิน rhizophagusirregularis ( formerlyglomusintraradices ) whilefspandsouth farmsoilsweredominatedbygigasporamargarita gigasporagigantea และ Glomus etunicatum , ( ข้อมูลไม่แสดง ) ในขณะที่ผลลัพธ์โดยทั่วไปคล้ายกันมากใน 2 การทดลองinafewcasestherewerestatisticallysigni จึง cantdifferences ดังนั้นผลทั้งหมดจะแสดงแยกต่างหากสำหรับแต่ละการทดลอง ในราก ( table2 ) sporecountswerehighestinsouthfarmand FSP ดินและถูกที่สุดใน vancy ดิน ผลที่คล้ายกันได้รับสำหรับ nlfa elfa และใหม่ในขณะที่ถูก
plfa ไบโอมาร์คเกอร์