Electrophoresis studyPurity of the

Electrophoresis study

Purity of the two tyrosinase forms was determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE). Whereas no bands corresponding to a non-target protein were visible, both forms showed a single band at around 39 kDa (see Fig. 2A). The in-gel activity was measured following non reducing SDS–PAGE as the reduction is detrimental to the activity of the enzyme. In this non reduced form the enzyme displays a higher electrophoretic mobility, which is probably due to its more compact conformation. Under non-reducing conditions the intramolecular disulfide bridges are intact and can therefore stabilize the enzyme’s conformation (see Fig. 2B). Moreover, the IEF (both samples applied) resulted in two spots at a pI of 5.1 and 5.2, respectively (see Fig. 2C). This matches with the theoretically calculated pI of 5.25 (ProtParam, ExPASy.org) corresponding to the identified amino acid sequence jrPPO1(Asp101–Pro444) and pI of 5.35 for jrPPO1(Asp101–Arg445) (UniProt.: COLU17) as described below.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ศึกษาอิความบริสุทธิ์ของเนสมาสองรูปแบบถูกกำหนด โดยโซเดียม dodecyl ซัลเฟตตรวจสอบวิเคราะห์อิ (SDS – หน้า) ในขณะที่วงดนตรีไม่ตรงกับโปรตีนเป้าหมายไม่ถูกมองเห็นได้ ทั้งสองรูปแบบแสดงให้เห็นว่าวงดนตรีเดียวที่ kDa 39 รอบ (ดูรูป 2A) กิจกรรมในเจลถูกวัดดังต่อไปนี้ไม่ใช่ลด SDS – หน้าเป็นการลดอันตรายต่อกิจกรรมของเอนไซม์ ในแบบฟอร์มนี้ไม่ใช่ลด เอนไซม์แสดงการเคลื่อนไหว electrophoretic สูง ซึ่งอาจจะเป็น เพราะโครงสร้างที่กะทัดรัดขึ้น ภายใต้ไม่ลดเงื่อนไขซัลไฟด์ intramolecular สะพานมีสภาพสมบูรณ์ และสามารถรักษาเสถียรภาพโครงสร้างของเอนไซม์ดังนั้น (ดูรูป 2B) นอกจากนี้ IEF (ทั้งสองอย่างใช้) ส่งผลให้ในสองจุดที่ค่า pI ทั้ง 5.1 และ 5.2 ตามลำดับ (ดูรูปที่ 2C) นี้ตรงกับค่า pI ที่คำนวณได้ในทางทฤษฎีของ 5.25 (ProtParam, ExPASy.org) ที่สอดคล้องกับกรดอะมิโนที่ระบุลำดับ jrPPO1(Asp101–Pro444) และ pI ของ 5.35 สำหรับ jrPPO1(Asp101–Arg445) (UniProt.: COLU17) ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษา electrophoresis

ความบริสุทธิ์ของทั้งสองรูปแบบ tyrosinase ถูกกำหนดโดยโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ในขณะที่วงดนตรีที่ไม่สอดคล้องกับโปรตีนที่ไม่ใช่เป้าหมายได้เห็นรูปแบบทั้งแสดงให้เห็นเป็นวงเดียวที่ประมาณ 39 กิโลดาลตัน (ดูรูป. 2A) กิจกรรมในเจลวัดต่อไปนี้ไม่ใช่การลด SDS-PAGE เป็นลดลงเป็นอันตรายต่อการทำงานของเอนไซม์ ในรูปแบบที่ไม่ลดลงนี้เอนไซม์แสดงการเคลื่อนไหวของอิเลคที่สูงขึ้นซึ่งอาจเป็นเพราะโครงสร้างขนาดกะทัดรัดมากขึ้น ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช่การลดสะพานซัลไฟด์ intramolecular เป็นเหมือนเดิมและดังนั้นจึงสามารถรักษาเสถียรภาพของโครงสร้างของเอนไซม์ (ดูรูปที่. 2B) นอกจากนี้ IEF (ตัวอย่างทั้งนำไปใช้) ส่งผลให้ทั้งสองจุดที่ pI ของ 5.1 และ 5.2 ตามลำดับ (ดูรูป. 2C) นี้ตรงกับพี่คำนวณทางทฤษฎี 5.25 (ProtParam, ExPASy.org) ที่สอดคล้องกับที่ระบุกรดอะมิโนลำดับ jrPPO1 (Asp101-Pro444) และ pI ของ 5.35 สำหรับ jrPPO1 (Asp101-Arg445) (UniProt .: COLU17) ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีศึกษาความบริสุทธิ์ของทั้งสองรูปแบบ คือ ไทโรซิเนส โดยพิจารณาโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS polyacrylamide gel electrophoresis ( หน้า ) และวงดนตรีที่สอดคล้องกับเป้าหมายที่ไม่ใช่โปรตีน คือ สามารถมองเห็นได้ทั้งสองรูปแบบมีวงเดียวที่ประมาณ 39 กิโลดาลตัน ( ดูรูปที่ 2A ) ในกิจกรรมวัดต่อไปนี้ไม่เจลลด SDS –หน้าลดอันตรายต่อกิจกรรมของเอนไซม์ ในเรื่องนี้ลดลงจากเอนไซม์แสดงสูงกว่า ยูไนเต็ด ซึ่งอาจจะเนื่องจากมีขนาดกะทัดรัดมากขึ้นโครงสร้าง ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ลดสะพานได intramolecular ยังดีอยู่และดังนั้นจึงสามารถทำให้โครงสร้างของเอนไซม์ ( ดูรูปที่ 2B ) นอกจากนี้ บทสรุป ( ทั้งสองตัวอย่างประยุกต์ ) ส่งผลให้สองจุดที่ปี่ของ 5.1 และ 5.2 ตามลำดับ ( ดูรูปที่ 2 ) นี้ตรงกับที่คำนวณตามหลักทฤษฎี PI 5.25% ( protparam expasy , . org ) สอดคล้องกับการระบุลำดับกรดอะมิโน jrppo1 ( asp101 – pro444 ) และปี่ปีสำหรับ jrppo1 ( asp101 – arg445 ) ( uniprot : colu17 ) ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง