2.6. Establishment of on -line HPLC

2.6. Establishment of on -line HPLC-FRSD system
The HPLC-FRSD system consisted of a Waters e2695 HPLC separation system, post-column reaction system, Waters 2998 photodiode array detector (PAD), and Waters 2489 UV/Visible detector. The Waters e2695 HPLC separation system consisted of a Waters quaternary pump system used as a mobile phase delivery device, a Waters column used to separate the compounds from samples, a Waters autosampler to inject samples into the system automatically, and a column oven to maintain the temperature of column. The Waters 2998 photodiode array detector (PAD) was used as the detector of chromatographic positive peaks of compounds. The post-column reaction system consisted of post-column reaction model (peek reaction coil) where the antioxidants reacted with the free radicals, temperature control model to control the temperature of peek reaction coil, reagent manager (pump) to serve as a free radical solution delivery device. The Waters 2489 UV/Visible detector was a detector for chromatographic negative peaks of free radicals. The HPLC system and post-column system mentioned above were all purchased from Waters Corporation (Milford, MA, USA). The whole system was supported by Waters Empower TM 2 Chromatography Data Software (Waters Corporation, Milford, MA, USA).

To test our on-line HPLC-FRSD system, the following experiments were carried out. (1) Detection wavelengths: The PAD detector was set at 283, 245, 330 and 290 nm, respectively, and a full scan from 200 to 800 nm simultaneously in HPLC system. Max absorption wavelengths of DPPH and ABTS radicals were detected using a spectrometer (Perkin-Elmer Corp., Norwalk, CT, USA); (2) a Waters X-Terra MS C18 guard column (3.9 mm × 20 mm, 5 μm) with and without SunFire-C18 analytical column (4.6 mm × 250 mm, 5 μm) (Milford, MA, USA) were compared; (3) the combinations of mobile phases were compared: [water/acetic acid (99.9:0.1, v/v) (A) and HPLC-grade methanol (B)] and [water/formic acid (99.9:0.1, v/v) (A) and HPLC-grade methanol (B)]; (4) the proportions of mobile phases containing 80/20, 60/40, 50/50, 37/63, 20/80 and 0/100 (0.1% acetic acid/methanol, v/v) were analyzed; (5) the concentrations of free radicals for post-column system: 0.05, 0.10 and 0.20 mM of DPPH radical solution were compared; ABTS radical solutions with an absorbance of 0.70 ± 0.02 AU and with an absorbance of 1.00 ± 0.02 AU at 400 nm using spectrometers were compared; (6) flow rates: 0.50, 0.85, 0.91, 1.00 mL min−1 for mobile phase in HPLC system and 0.10, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80 and 1.00 mL min−1 for the flow rates of radical solutions in post-column system were tested; (7) temperatures of the system: 25, 30 and 35 °C of on-line HPLC-FRSD system were used, respectively; (8) sample volumes: 5, 10, 15 and 25 μL of samples volumes were run, respectively.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6 การจัดบน - สายระบบ HPLC-FRSDระบบ HPLC FRSD ประกอบด้วยระบบแยกน้ำ e2695 HPLC คอลัมน์หลังปฏิกิริยาระบบ น้ำ 2998 photodiode เรย์จับ (แผ่น), และเครื่องตรวจจับ UV/มอง เห็นทะเล 2489 น้ำ e2695 HPLC แยกระบบประกอบด้วยระบบปั๊ม quaternary น้ำที่ใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่จัดส่งอุปกรณ์ คอลัมน์น้ำใช้เพื่อแยกสารประกอบจากตัวอย่าง autosampler น้ำฉีดตัวอย่างเข้าสู่ระบบโดยอัตโนมัติ และเตาคอลัมน์เพื่อรักษาอุณหภูมิของคอลัมน์ จับเรย์ photodiode 2998 น้ำ (แผ่น) ถูกใช้เป็นเครื่องตรวจจับของยอดบวก chromatographic สาร ระบบปฏิกิริยาหลังคอลัมน์ consisted ของรุ่นคอลัมน์หลังปฏิกิริยา (มองปฏิกิริยาม้วน) ซึ่งสารต้านอนุมูลอิสระในปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับอนุมูลอิสระ แบบจำลองการควบคุมอุณหภูมิเพื่อควบคุมอุณหภูมิของขดลวดปฏิกิริยามอง ผู้จัดการรีเอเจนต์ (ปั๊ม) เป็นอุปกรณ์ส่งโซลูชันอนุมูลอิสระ เครื่องตรวจจับ UV/มอง เห็นทะเล 2489 ถูกจับสำหรับยอดลบ chromatographic ของอนุมูลอิสระ ระบบ HPLC และคอลัมน์หลังระบบดังกล่าวข้างต้นทั้งหมดซื้อจาก บริษัทน้ำ (ลฟอร์ด MA สหรัฐอเมริกา) ทั้งระบบได้รับการสนับสนุน โดยน้ำอำนาจ TM 2 Chromatography ข้อมูลซอฟต์แวร์ (บริษัทน้ำ ลฟอร์ด MA สหรัฐอเมริกา)เพื่อทดสอบระบบของ HPLC FRSD ง่ายดาย ทดลองต่อไปนี้ถูกดำเนินการ (1) ตรวจสอบความยาวคลื่น: เครื่องตรวจจับแผ่นถูกกำหนดที่ 283, 245, 330 และ 290 nm ตาม ลำดับ และการสแกนแบบเต็มจาก 200 800 nm พร้อมใน HPLC ระบบ ความยาวคลื่นที่ดูดซึมสูงสุดของอนุมูล DPPH และรเรียนพบใช้สเปกโตรมิเตอร์ (เอลเมอเพอร์ Corp., Norwalk, CT สหรัฐอเมริกา); (2) น้ำ X Terra MS C18 รักษาคอลัมน์ (3.9 มม. × 20 มม. 5 μm) มี และไม่ มีคอลัมน์วิเคราะห์ SunFire C18 (4.6 มม. × 250 มม. 5 μm) (ลฟอร์ด MA, USA) ได้เปรียบเทียบ (3) มีการเปรียบเทียบชุดของระยะเคลื่อน: [กรดน้ำ/อะซิติก (99.9:0.1, v/v) (A) และ HPLC เกรดเมทานอล (B)] และ [กรด formic/น้ำ (99.9:0.1, v/v) (A) และ HPLC เกรดเมทานอล (B)]; (4)สัดส่วนของเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 80/20, 60/40 แบบ 37/63, 20/80 และ 0/100 (0.1% กรดอะซิติก/เมทานอล v/v) ได้วิเคราะห์ (5)ความเข้มข้นของอนุมูลอิสระในระบบหลังคอลัมน์: 0.05, 0.10 และ 0.20 มม.รุนแรงของ DPPH ได้เปรียบเทียบ รเรียนรุนแรงแก้ปัญหา ด้วยการ absorbance 0.70 ± 0.02 AU การ absorbance 1.00 ± 0.02 และ AU ที่ 400 nm ใช้ตรวจได้เปรียบเทียบ (6) ขั้นตอนพิเศษ: 0.50, 0.85, 0.91, min−1 1.00 mL สำหรับเฟสเคลื่อนที่ในระบบ HPLC และ 0.10, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80 และ 1.00 mL min−1 สำหรับขั้นตอนการทดสอบราคาของโซลูชั่นที่รุนแรงในคอลัมน์หลังระบบ (7) อุณหภูมิของระบบ: 25, 30 และ 35 ° C ระบบ HPLC FRSD ง่ายดายใช้ ตามลำดับ (8) ไดรฟ์ข้อมูลตัวอย่าง: μL 5, 10, 15 และ 25 ของปริมาณตัวอย่างทำงาน ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ในสถานประกอบการของระบบ hplc-frsd บรรทัด
ระบบ hplc-frsd ประกอบด้วยน้ำ e2695 โดยแยกระบบปฏิกิริยาคอลัมน์โพสต์ , น้ำ 2998 โฟโตไดโอดเรย์ตรวจจับ ( แผ่น ) และน้ำ 2489 UV / มองเห็นเครื่องตรวจจับ น้ำ e2695 โดยแยกระบบประกอบด้วย ระบบปั๊มน้ำซึ่งใช้เป็นอุปกรณ์ส่งเฟสเคลื่อนที่คอลัมน์น้ำใช้แยกสารจากตัวอย่าง , autosampler น้ำฉีดตัวอย่างเข้าไปในระบบโดยอัตโนมัติ และคอลัมน์เตาอบเพื่อรักษาอุณหภูมิของคอลัมน์ น้ำ 2998 โฟโตไดโอดเรย์ตรวจจับ ( Pad ) ที่ถูกใช้เป็นเครื่องตรวจจับของโครมบวกยอดของสารประกอบเสาคอลัมน์ปฏิกิริยาประกอบด้วยโพสต์คอลัมน์ปฏิกิริยาแบบ ( ขดปฏิกิริยาแอบมอง ) ที่สารทำปฏิกิริยากับอนุมูลอิสระ ควบคุมอุณหภูมิแบบควบคุมอุณหภูมิของขดลวดปฏิกิริยาแอบดูผู้จัดการสารเคมี ( ปั๊ม ) เพื่อใช้เป็นอนุมูลอิสระโซลูชั่นการจัดส่งอุปกรณ์น้ำ 2489 UV / มองเห็นเครื่องตรวจจับเครื่องตรวจจับและลบสำหรับยอดของอนุมูลอิสระ พบระบบและโพสต์คอลัมน์ระบบข้างต้นทั้งหมดซื้อจากน้ำ Corporation ( Milford , MA , USA ) ระบบทั้งหมดได้รับการสนับสนุนโดยน้ำช่วยให้ซอฟต์แวร์ TM 2 แยกข้อมูล ( น้ำ บริษัท มิลฟอร์ด , MA , USA ) .

เพื่อทดสอบระบบ hplc-frsd ของเราออนไลน์การทดลองพบว่า ( 1 ) สามารถตรวจจับ : แผ่นตรวจจับไว้ที่ 283 , 245 , 330 และ 290 nm ตามลำดับ และสแกนเต็มรูปแบบจาก 200 ถึง 800 nm พร้อมกันในระบบ 2 . แม็กซ์ดูดกลืนความยาวคลื่น dpph Abbr อนุมูลอิสระและถูกตรวจพบใช้ Spectrometer ( เพอร์กินเอลเมอร์ คอร์ป , Norwalk , CT , สหรัฐอเมริกา ) ; ( 2 ) น้ำ x-terra MS c18 ยามคอลัมน์ ( 3.9 มม. × 20 มม.5 μ M ) ที่มีและไม่มี sunfire-c18 วิเคราะห์คอลัมน์ ( 4.6 มิลลิเมตร× 250 มม. , 5 μ M ) ( Milford , MA , USA ) เปรียบเทียบ ( 3 ) ชุดค่าผสมของเฟสเคลื่อนที่เปรียบเทียบ : [ น้ำ / กรดน้ำส้ม ( 99.9:0.1 , v / v ) ( A ) และ ( B ) ส่วนเกรด HPLC ] และ [ น้ำกรด ( 99.9:0.1 , v / v ) และเมทานอลเกรด HPLC ( B ) ] ; ( 4 ) สัดส่วนของเฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วย 80 / 20 , 60 / 40 , 50 / 50 , 37 / 6320 / 80 และ 0 / 100 ( 0.1 % เมทานอลกรดอะซิติก / v / v ) มาวิเคราะห์ และ ( 5 ) ความเข้มข้นของอนุมูล อิสระในระบบคอลัมน์โพสต์ : 0.05 , 0.10 และ 0.20 มิลลิเมตรของวิธีที่รุนแรง dpph เปรียบเทียบ ; Abbr หัวรุนแรงโซลูชั่นที่มีค่าเท่ากับ 0.70 ± 0.02 AU และที่มีค่า± 0.02 1.00 AU ที่ 400 nm ใช้าเปรียบเทียบ ; ( 6 ) อัตราการไหล : 0.50 , 1.00 , 0.91 , 1 .00 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 สำหรับเฟสเคลื่อนที่ในระบบ HPLC และ 0.10 0.20 , 0.40 , 0.60 , 0.80 และ 1.00 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 สำหรับอัตราการไหลของระบบราก โซลูชั่นในคอลัมน์โพสต์ทดสอบ ; ( 7 ) อุณหภูมิของระบบ : 25 , 30 และ 35 องศา C ระบบ hplc-frsd ออนไลน์ใช้ ตามลำดับ ( 8 ) ปริมาณตัวอย่าง : 5 , 10 , 15 และ 25 μ l ตัวอย่างปริมาณกำลังวิ่งตาม