Determination of Glucocorticoid Out

Determination of Glucocorticoid Output
Adrenocortical activity was measured noninvasively through measurement of faecal glucocorticoid metabolites (fGCM). Owing to the long time lag between the circulation of native hormones and the eventual excretion of their metabolites (typically 20–48 h in mammals; see Schwarzenberger, Möstl, Palme, & Bamberg, 1996) and the fact that fGCM levels in a given sample typically represent an average of GC output over a period of hours, it is generally considered difficult at best to study the effects of acute stressors, such as the potential effect of the provisioning experiments, through analysis of fGCM (Anestis, 2010). However, the biology of fGCM excretion in capuchins and the experimental design used in the current study facilitates such analysis. First, peak or near-peak fGCM levels associated with a particular stressor are found in samples excreted 2–4 h after the event, and return to baseline levels within ca. 6–8 h (Wheeler, Tiddi, Kalbitzer, Visalberghi, & Heistermann, 2013); samples collected during the 3 h period that occurred 2–5 h following one or more provisioning experiments can thus be reliably associated with those events. Second, because the experimental design resulted in subjects receiving the same treatment (i.e. no provisioning, clumped food treatment or dispersed food treatment) multiple times per day and for several consecutive days, any time averaging of fGCM levels that may occur in a given sample should still reflect the same experimental condition. Based on these considerations, each sample was coded based on whether or not it was associated with a provisioning experiment (yes/no) in the temporal window 2–5 h prior to defecation. Furthermore, for those samples associated with a provisioning experiment, samples were coded as associated with either the clumped or dispersed condition.

Faecal samples were collected opportunistically from identified adult and juvenile individuals, with the time of defecation noted. Samples were collected in polypropylene tubes within 30 min of defecation and placed in an insulated icepack. Upon return to the field station (within 6 h of sample collection), samples were stored frozen at −15 °C for one to several days until the hormone metabolites were extracted from the wet faeces. Extraction procedures followed the ‘field extraction’ method described by Wheeler, Tiddi, et al. (2013). Briefly, 0.4–0.6 g of wet, homogenized faeces was extracted with 5 ml of 80% ethanol by vortexing for 5 min; in cases in which 0.3 g of faeces or less could be obtained, only 3 ml of ethanol was used to keep the ethanol to faeces ratio consistent (Palme, Touma, Arias, Dominchin, & Lepschy, 2013). After vortexing, samples were centrifuged at 2000 RPM for 10 min and 1 ml of the supernatant was removed and stored in a 2 ml polypropylene tube wrapped with laboratory film. Following the extraction, the faeces were dried completely and the dry weight determined. Extracts were stored in a refrigerator (for samples collected in 2010) or freezer (for samples collected in 2011) until transported to the laboratory for analysis (during the period of transport, samples were kept at ambient temperatures for 2–3 days, and were subsequently stored in a freezer until analysis). Samples were measured by enzyme immunoassay (see below) within 7–9 months of collection; fGCM concentrations in samples extracted and stored using this method have been shown to be stable for at least 12 months (Wheeler, Tiddi, et al., 2013).

We measured fGCM concentrations in the extracted samples on microtitre plates using a validated corticosterone enzyme immunoassay (Wheeler, Tiddi, et al., 2013) following methods described by Heistermann, Palme, and Ganswindt (2006). Detailed information on assays, including antibodies, standards and labels, and assay sensitivities, can be found in Heistermann et al. (2006). Intra-assay coefficients of variation (CVs) of high- and low-value quality controls were 6.3% and 7.9%, respectively. Corresponding interassay CVs were 10.6% and 11.7%, respectively. All samples from a given individual were measured on a maximum of two microtitre plates (one if fewer than 35 samples for that individual were measured) in order to minimize the contribution of interassay variation to the measured intraindividual variation in GC output. Hormone metabolite concentrations are expressed as ng/g dry faecal weight.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดผลลัพธ์ Glucocorticoidมีวัดกิจกรรม adrenocortical noninvasively ผ่านวัด faecal glucocorticoid metabolites (fGCM) เนื่องจากความล่าช้าเวลานานระหว่างการหมุนเวียนของฮอร์โมนพื้นเมืองและการขับถ่ายในของ metabolites ของพวกเขา (โดยทั่วไป 20-48 h ในการเลี้ยงลูกด้วยนม ดู Schwarzenberger, Möstl, Palme และบัมแบร์ ก 1996) และความจริงที่ว่า ระดับ fGCM ในตัวอย่างกำหนดโดยทั่วไปแทนค่าเฉลี่ยของ GC ออกช่วงชั่วโมง โดยทั่วไปถือว่ายากที่สุดเพื่อศึกษาผลของการลดเฉียบพลันเช่นผลการทดลองการเตรียมใช้งาน ผ่านการวิเคราะห์ของ fGCM (Anestis, 2010) อาจเกิดขึ้น อย่างไรก็ตาม ชีววิทยาของการขับถ่าย fGCM ใน capuchins และการออกแบบการทดลองที่ใช้ในการศึกษาปัจจุบันอำนวยความสะดวกอย่างเช่น FGCM แรก ช่วง หรือใกล้สูงสุดที่พบในระดับที่เกี่ยวข้องกับ stressor เฉพาะตัวอย่าง h 2 – 4 excreted หลังเหตุการณ์ และกลับไปยังระดับพื้นฐานภายใน ca 6-8 h (ล้อ Tiddi, Kalbitzer, Visalberghi, & Heistermann, 2013); ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมในช่วงเวลา 3 h ที่เกิด h 2 – 5 ต่อไปนี้อย่าง น้อยหนึ่งการเตรียมใช้งานทดลอง ได้เกี่ยวข้องกับเหตุการณ์เหล่านั้นจึงได้ สอง เนื่องจากการออกแบบการทดลองเป็นผลในเรื่องที่ได้รับการรักษาเหมือนกัน (เช่นไม่เตรียม อาหาร clumped รักษา หรือบำบัดอาหารกระจัดกระจาย) หลายครั้ง ต่อวัน และหลายวันติดต่อกัน มีเวลาหาค่าเฉลี่ยของระดับ fGCM ที่อาจเกิดขึ้นในตัวอย่างกำหนดยังคงสะท้อนเงื่อนไขทดลองเดียวกัน ขึ้นอยู่กับการพิจารณาเหล่านี้ แต่ละตัวอย่างมีรหัสอยู่บนหรือไม่ก็เกี่ยวข้องกับการทดลองที่เตรียมใช้งาน (ไม่ใช่) หน้าต่างขมับ 2 – 5 h ก่อน defecation นอกจากนี้ สำหรับตัวอย่างที่เกี่ยวข้องกับการทดลองที่เตรียมใช้งาน ตัวอย่างมีรหัสเกี่ยวข้องกับทั้ง clumped หรือกระจัดกระจายสภาพตัวอย่าง faecal ถูกเก็บรวบรวมจากระบุผู้ใหญ่ และเยาวชนบุคคล ด้วยเวลาของ defecation ไว้ opportunistically ตัวอย่างถูกรวบรวมไว้ในหลอด polypropylene ภายใน 30 นาทีของ defecation และวางในการ icepack ฉนวน เมื่อกลับไปยังสถานีฟิลด์ (ภายใน 6 h ของคอลเลกชันตัวอย่าง), ตัวอย่างถูกเก็บแช่แข็งที่ −15 ° C หนึ่งไปหลายวันจนกระทั่ง metabolites ฮอร์โมนที่สกัดจาก faeces เปียก ขั้นตอนการสกัดด้วยวิธี 'ฟิลด์สกัด' โดยล้อ Tiddi และ al. (2013) สั้น ๆ 0.4 – 0.6 g faeces เปียก homogenized เป็นกลุ่มถูกสกัด ด้วย 5 ml ของ 80% เอทานอล โดย vortexing สำหรับ 5 นาที ในกรณีที่สามารถดึง ของ faeces หรือน้อยกว่า 0.3 g เอทานอลเท่านั้น 3 ml ถูกใช้เพื่อให้เอทานอสอดคล้องอัตราส่วน faeces (Palme, Touma, Arias, Dominchin, & Lepschy, 2013) หลังจาก vortexing ตัวอย่างถูก centrifuged ที่ 2000 RPM สำหรับ 10 นาที แล้ว 1 ml ของ supernatant ถูกเอาออก และเก็บในหลอด polypropylene 2 ml ห่อฟิล์มห้องปฏิบัติ ต่อไปนี้สกัด faeces ได้แห้งอย่างสมบูรณ์ และกำหนดน้ำหนักแห้ง สารสกัดจากถูกเก็บไว้ในตู้เย็น (ตัวอย่างเก็บรวบรวมในปี 2553) หรือตู้แช่แข็ง (ตัวอย่างเก็บรวบรวมในปี 2554) จนถึงขนส่งไปห้องปฏิบัติการสำหรับการวิเคราะห์ (ในระหว่างระยะเวลาการขนส่ง ตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิแวดล้อม 2-3 วัน และถูกมาเก็บไว้ในตู้แช่จนวิเคราะห์) ตัวอย่างที่วัด โดยเอนไซม์ immunoassay (ดูด้านล่าง) ภายใน 7 – 9 เดือนของคอลเลกชัน ได้รับการแสดงความเข้มข้นของ fGCM ในตัวอย่างที่ถูกแยก และจัดเก็บโดยใช้วิธีการนี้จะมีเสถียรภาพอย่างน้อย 12 เดือน (ล้อ Tiddi และ al., 2013)เราวัดความเข้มข้น fGCM ในตัวอย่างแยกบนแผ่น microtitre โดยใช้การตรวจ corticosterone เอนไซม์ immunoassay (ล้อ Tiddi และ al., 2013) ตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Heistermann, Palme และ Ganswindt (2006) รายละเอียดเกี่ยวกับ assays แอนตี้ มาตรฐาน และป้ายชื่อ วิเคราะห์ รัฐ และสามารถพบใน Heistermann et al. (2006) อินทราวิเคราะห์สัมประสิทธิ์ความผันแปร (CVs) ควบคุมคุณภาพสูง และต่ำค่าถูก 7.9% และ 6.3% ตามลำดับ CVs interassay สอดคล้องได้ 10.6% และ 11.7% ตามลำดับ ตัวอย่างทั้งหมดจากแต่ละคนกำหนดขึ้นวัดบนสูงสุดของแผ่น microtitre สอง (หนึ่งถ้าน้อยกว่า 35 ตัวอย่างที่ถูกวัด) เพื่อลดสัดส่วนของรูปแบบ interassay การเปลี่ยนแปลง intraindividual วัดผลลัพธ์ GC ความเข้มข้นของ metabolite ฮอร์โมนจะแสดงเป็นน้ำหนัก faecal แห้ง ng/g

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกำหนด Glucocorticoid เอาท์พุท
กิจกรรม adrenocortical วัด noninvasively ผ่านการวัดสาร glucocorticoid อุจจาระ (fGCM) เนื่องจากความล่าช้าเวลานานระหว่างการไหลเวียนของฮอร์โมนพื้นเมืองและการขับถ่ายของสารในที่สุดของพวกเขา (โดยปกติ 20-48 ชั่วโมงในการเลี้ยงลูกด้วยนมดู Schwarzenberger, Möstl, ปาล์ม, และแบมเบิร์ก, 1996) และความจริงที่ว่าระดับ fGCM ในกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับ มักจะเป็นตัวแทนของค่าเฉลี่ยของการส่งออกในช่วง GC ชั่วโมงนั้นโดยทั่วไปถือว่าเป็นเรื่องยากที่ดีที่สุดในการศึกษาผลกระทบของความเครียดเฉียบพลันเช่นผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นจากการทดลองการตั้งสำรองฯ ที่ผ่านการวิเคราะห์ fGCM (Anestis 2010) อย่างไรก็ตามทางชีววิทยาของการขับถ่าย fGCM ใน Capuchins และการออกแบบการทดลองใช้ในการศึกษาในปัจจุบันอำนวยความสะดวกในการวิเคราะห์ดังกล่าว ครั้งแรกที่จุดสูงสุดหรือใกล้จุดสูงสุดระดับ fGCM ที่เกี่ยวข้องกับความเครียดโดยเฉพาะอย่างยิ่งที่พบในตัวอย่างขับออกมา 2-4 ชั่วโมงหลังจากเหตุการณ์และกลับสู่ระดับพื้นฐานภายในแคลิฟอร์เนีย 6-8 ชั่วโมง (ล้อ Tiddi, Kalbitzer, Visalberghi และ Heistermann, 2013); ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ในช่วงระยะเวลา 3 ชั่วโมงที่เกิดขึ้น 2-5 ชั่วโมงต่อไปนี้อย่างใดอย่างหนึ่งหรือมากกว่าการทดลองการตั้งสำรองฯ จึงสามารถเชื่อมโยงน่าเชื่อถือกับเหตุการณ์เหล่านั้น ประการที่สองเนื่องจากการออกแบบการทดลองผลในวิชาที่ได้รับการรักษาเดียวกัน (เช่นไม่มีการจัดเตรียมการรักษาอาหาร clumped หรือการรักษาอาหารแยกย้ายกันไป) หลายครั้งต่อวันและวันติดต่อกันหลาย ๆ ครั้งที่ค่าเฉลี่ยของระดับ fGCM ที่อาจเกิดขึ้นในกลุ่มตัวอย่างที่ได้รับควร ยังสะท้อนให้เห็นถึงสภาพการทดลองเดียวกัน ขึ้นอยู่กับการพิจารณาเหล่านี้แต่ละตัวอย่างเป็นรหัสขึ้นอยู่กับว่าหรือไม่ก็เป็นคนที่เกี่ยวข้องกับการทดสอบการตั้งสำรอง (Yes / No) ในหน้าต่างขมับ 2-5 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการถ่ายอุจจาระ นอกจากนี้สำหรับกลุ่มตัวอย่างผู้ที่เกี่ยวข้องกับการจัดเตรียมการทดลองตัวอย่างถูกเข้ารหัสเป็นที่เกี่ยวข้องกับทั้งสภาพ clumped หรือแยกย้ายกันไป. ตัวอย่างอุจจาระที่ถูกเก็บรวบรวมโอกาสจากผู้ใหญ่ระบุและบุคคลที่เด็กและเยาวชนด้วยเวลาถ่ายอุจจาระตั้งข้อสังเกต เก็บตัวอย่างในหลอดโพรพิลีนภายใน 30 นาทีของการถ่ายอุจจาระและวางไว้ในน้ำแข็งเทียมฉนวน เมื่อเขากลับไปยังสถานีสนาม (ภายใน 6 ชั่วโมงของการเก็บตัวอย่าง) ตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้แช่แข็งที่ -15 องศาเซลเซียสเป็นเวลาหนึ่งไปยังอีกหลายวันจนกว่าสารฮอร์โมนสกัดจากอุจจาระเปียก ขั้นตอนการสกัดตามวิธีการ 'สกัดฟิลด์ "อธิบายโดยล้อ Tiddi, et al (2013) สั้น ๆ 0.4-0.6 กรัมเปียกอุจจาระหดหายถูกสกัดด้วย 5 มิลลิลิตรของเอทานอล 80% โดย vortexing 5 นาที; ในกรณีที่ 0.3 กรัมของอุจจาระหรือน้อยกว่าอาจจะได้รับเพียง 3 มิลลิลิตรของเอทานอลถูกนำมาใช้เพื่อให้เอทานอลต่ออุจจาระที่สอดคล้องกัน (Palme, Touma, เรียส Dominchin และ Lepschy, 2013) หลังจาก vortexing ตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 2000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีและ 1 มิลลิลิตรของสารละลายจะถูกลบออกและเก็บไว้ในหลอดโพรพิลีน 2 มิลลิลิตรห่อด้วยฟิล์มในห้องปฏิบัติการ ต่อไปนี้การสกัดอุจจาระแห้งอย่างสมบูรณ์และน้ำหนักแห้งที่กำหนด สารสกัดถูกเก็บไว้ในตู้เย็น (สำหรับตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ในปี 2010) หรือช่องแช่แข็ง (สำหรับตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ในปี 2011) จนกระทั่งส่งไปยังห้องปฏิบัติการสำหรับการวิเคราะห์ (ในช่วงระยะเวลาของการขนส่งตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิโดยรอบ 2-3 วันและมี ต่อมาเก็บไว้ในช่องแช่แข็งจนการวิเคราะห์) ตัวอย่างถูกวัดโดย immunoassay เอนไซม์ (ดูด้านล่าง) ภายในเดือนที่ 7-9 ของการเก็บรวบรวม; ความเข้มข้น fGCM ในตัวอย่างสกัดและเก็บไว้ใช้วิธีนี้ได้รับการแสดงที่จะมีเสถียรภาพเป็นเวลาอย่างน้อย 12 เดือน (ล้อ Tiddi, et al., 2013). เราวัดความเข้มข้น fGCM ในตัวอย่างสกัดบนจาน microtitre ใช้ enzyme immunoassay ใช้ corticosterone การตรวจสอบ (ล้อ Tiddi, et al., 2013) วิธีการต่อไปอธิบายโดย Heistermann, ปาล์มและ Ganswindt (2006) ข้อมูลรายละเอียดเกี่ยวกับการตรวจรวมทั้งแอนติบอดีมาตรฐานและฉลากและความเปราะบางการทดสอบสามารถพบได้ใน Heistermann และคณะ (2006) ค่าสัมประสิทธิ์การทดสอบภายในของการเปลี่ยนแปลง (ประวัติ) ของสูงและต่ำมูลค่าการควบคุมคุณภาพเป็น 6.3% และ 7.9% ตามลำดับ สอดคล้องประวัติ interassay เป็น 10.6% และ 11.7% ตามลำดับ ตัวอย่างทั้งหมดจากบุคคลที่ได้รับถูกวัดสูงสุดของแผ่นเปลือกโลกสองแผ่น microtitre (หนึ่งถ้าน้อยกว่า 35 ตัวอย่างสำหรับบุคคลที่ได้รับการวัด) เพื่อลดการมีส่วนร่วมของการเปลี่ยนแปลง interassay การวัดการเปลี่ยนแปลงในการส่งออก intraindividual GC ความเข้มข้นของสาร metabolite ฮอร์โมนจะแสดงเป็น ng / กรัมน้ำหนักอุจจาระแห้ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณของกลูโคคอร์ติคอยด์ออก

กิจกรรมวัด noninvasively อะดรีโนคอร์ติคัล โดยการวัดในกลูโคคอร์ติคอยด์หลายชนิด ( fgcm ) เนื่องจากยาวเวลาล่าช้าระหว่างการไหลเวียนของฮอร์โมนพื้นเมืองและการขับถ่ายในที่สุดจากสารของพวกเขา ( โดยปกติ 20 – 48 ชั่วโมงในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ; ดูชวอร์เซิ่นเบอร์เกอร์ , M ö STL ปาล์ม&บัมแบร์ก , , ,1996 ) และที่ระดับ fgcm ในตัวอย่างมักจะเป็นตัวแทนของ GC ผลผลิตเฉลี่ยช่วงชั่วโมง มันเป็นโดยทั่วไปถือว่ายากที่สุด เพื่อศึกษาผลของความเครียดเฉียบพลัน เช่น ผลกระทบที่มีศักยภาพของระบบ โดยผ่านการวิเคราะห์ fgcm ( anestis , 2010 ) อย่างไรก็ตามชีววิทยาของ fgcm การขับถ่ายใน capuchins และทดลองใช้ในการศึกษาปัจจุบันในการวิเคราะห์ดังกล่าว ครั้งแรก , สูงสุดหรือใกล้จุดสูงสุด fgcm ระดับที่เกี่ยวข้องกับความเครียด โดยเฉพาะพบในตัวอย่างขับ 2 – 4 ชั่วโมงหลังจากเหตุการณ์ และกลับไปสู่พื้นฐานระดับภายในประมาณ 6 – 8 H ( Wheeler , tiddi kalbitzer visalberghi , , , heistermann & 2013 )การเก็บตัวอย่างในระหว่าง 3 ชั่วโมง ระยะเวลาที่เกิดขึ้น 2 – 5 ชั่วโมงต่อหนึ่งหรือมากกว่าจากการทดลองจึงสามารถเชื่อถือได้เกี่ยวข้องกับเหตุการณ์เหล่านั้น ประการที่สอง เพราะการออกแบบทดลอง ( วิชาที่ได้รับการรักษาเดียวกัน ( เช่น ไม่มีโอกาสรักษาอาหารที่มีอยู่หรือกระจายการรักษาอาหาร ) หลาย ๆครั้งต่อวัน ติดต่อกันมาหลายวันเวลาเฉลี่ยของ fgcm ระดับที่อาจเกิดขึ้นในตัวอย่างที่ให้มาก็ควรสะท้อนให้เห็นถึงเงื่อนไขการทดลองเดียวกัน ขึ้นอยู่กับการพิจารณาเหล่านี้ แต่ละตัวอย่างถูกตั้งตามหรือไม่ได้เกี่ยวข้องกับระบบทดสอบ ( ใช่ / ไม่ใช่ ) ในบริเวณหน้าต่าง 2 – 5 ชั่วโมงก่อนการถ่ายอุจจาระ นอกจากนี้ สำหรับผู้ที่เกี่ยวข้องกับระบบตัวอย่างทดลองตัวอย่างรหัสที่เกี่ยวข้องกับทั้งโอกาสหรือกระจายภาพ

ในตัวอย่างจากผู้ใหญ่และเยาวชน opportunistically ระบุบุคคล กับเวลาของการบันทึก โดยเก็บตัวอย่างในท่อโพลิโพรพิลีนภายใน 30 นาทีของการถ่ายอุจจาระและวางไว้ในฉนวนไอซ์แพ็ค . เมื่อกลับมาที่สถานีสนาม ( ภายใน 6 ชั่วโมงของการเก็บตัวอย่าง )ตัวอย่างที่ถูกแช่แข็งที่อุณหภูมิ 15 องศา C −หนึ่งไปหลายวันจนฮอร์โมนสารสกัดจากอุจจาระที่เปียกน้ำ ขั้นตอนการสกัดตาม ' ' ด้านการสกัดวิธีอธิบายโดยล้อ tiddi et al . ( 2013 ) สั้น , 0.4 และ 0.6 กรัมบดเปียก , อุจจาระถูกสกัดด้วยเอทานอล 80% 5 มิลลิลิตร โดย vortexing เป็นเวลา 5 นาที ในคดีที่ 03 กรัมของอุจจาระหรือน้อยกว่าจะได้รับเพียง 3 มล. ของแอลกอฮอล์ถูกใช้เพื่อเก็บอุจจาระสัดส่วนเอทานอลที่สอดคล้องกัน ( ปาล์ม โทมะ Arias dominchin & , , lepschy 2013 ) หลังจาก vortexing ตัวอย่าง ระดับที่ 2000 รอบต่อนาที 10 นาทีและ 1 มิลลิลิตร และน่าน ถูกถอดออกและเก็บไว้ในห่อด้วยฟิล์มพอลิโพรพิลีน 2 ml หลอดห้องปฏิบัติการ ต่อไปนี้การสกัด