2.3. Molecular identification by DN

2.3. Molecular identification by DNA amplification and gene
sequencing
All isolates were cultured on nutrient agar, and genomic
DNA was obtained using the protocol described by Van
Soolingen et al. [44]. Strains belonging to the Bacillus brevis
group and Bacillus aneurinolyticus group were identified by
16S rRNA gene amplification by using specific detection
primers and PCR. The sequences of forward detection
primers BREV174F and ANEU506F were 50-AGACCGGGA
TAACATAGGGAAACTTAT-30 and 50-GAACCGCCGGGATGACC
TCCCGGTC-30 , respectively, and the sequence of reverse
primer 1377R was 50-GGCATGCTGATCCGCGATTACTAGC-30
[45]. PCR was performed in reaction mixtures containing
50 to 100 ng of genomic DNA, 2 U of Taq polymerase
(Invitrogen), 0.2 mM of dNTP mix (GE Healthcare), and 0.4
mM each primer (forward and reverse) in a final volume of
50 mL. Amplification program consisted of an initial denaturation
step at 94 C for 30 seconds, followed by 25 cycles
of 94 C/1 minute, 58 C/1.5 minutes, and 72 C/1.5 minutes,
with final extension of 72 C/5 minutes, in an Eppendorf
thermal cycler (Eppendorf).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 บัตรประจำตัวโมเลกุลโดยดีเอ็นเอและยีน
ลำดับ
ทุกสายพันธุ์มาเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อและจีโนม
ดีเอ็นเอที่ได้รับโดยใช้โปรโตคอลที่อธิบายไว้โดยรถตู้
Soolingen และคณะ [44] สายพันธุ์ที่อยู่ในประเภท Brevis Bacillus
กลุ่มและกลุ่ม aneurinolyticus Bacillus ถูกระบุ
16S ​​rRNA ขยายยีนโดยใช้การตรวจสอบเฉพาะ
ไพรและ PCR ลำดับของการตรวจสอบไปข้างหน้า
ไพร BREV174F และ ANEU506F เป็น 50 AGACCGGGA
TAACATAGGGAAACTTAT-30 และ 50-GAACCGCCGGGATGACC
TCCCGGTC-30 ตามลำดับและลำดับของการกลับ
ไพร 1377R เป็น 50 GGCATGCTGATCCGCGATTACTAGC-30
[45] PCR ได้รับการดำเนินการในการผสมที่มีปฏิกิริยา
50-100 ng ของดีเอ็นเอ 2 U ของโพลิเมอร์ Taq
(Invitrogen) 0.2 มิลลิผสม dNTP (GE Healthcare) และ 0.4
มิลลิแต่ละไพร (ไปข้างหน้าและย้อนกลับ) ในปริมาณสุดท้ายของ
50 มิลลิลิตร โปรแกรมการขยายประกอบด้วย denaturation เริ่มต้น
ขั้นตอนที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาทีตามด้วย 25 รอบ
จาก 94? C / 1 นาที 58? C / 1.5 นาทีและ 72 องศาเซลเซียส / 1.5 นาที
ที่มีนามสกุลสุดท้ายของ 72 องศาเซลเซียส / 5 นาทีใน Eppendorf
Cycler ความร้อน (Eppendorf)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 โมเลกุลดีเอ็นเอและยีน ( กำหนดโดยลำดับ

ทุกไอโซเลทบนอาหารวุ้นสารอาหารและจีโนม
ดีเอ็นเอได้รับการใช้ขั้นตอนที่อธิบายไว้โดยรถตู้
soolingen et al . [ 44 ] เป็นของสายพันธุ์บาซิลลัสเบรวิส
กลุ่มและในกลุ่ม aneurinolyticus ระบุ
เบส 16S rRNA ยีนโดยใช้ไพรเมอร์แบบตรวจจับ
ที่เฉพาะเจาะจงและ PCRลำดับของการตรวจหาดีเอ็นเอและส่งต่อ
brev174f aneu506f เป็น 50-agaccggga taacatagggaaacttat-30 50-gaaccgccgggatgacc

และ tcccggtc-30 ตามลำดับ และลำดับย้อนกลับ
รองพื้น 1377r คือ 50-ggcatgctgatccgcgattactagc-30
[ 45 ] ในปฏิกิริยา PCR ได้ของผสมที่มี
50 ถึง 100 ng ของ genomic DNA polymerase ของแทค 2 U
( Invitrogen ) 0.2 มม. dntp ผสม ( GE Healthcare ) และ 04
อืมแต่ละ primer ( ไปข้างหน้าและย้อนกลับ ) ในเล่มสุดท้ายของ
โปรแกรมขยายขนาด 50 มล. ประกอบด้วยขั้นตอนเริ่มต้นที่ 94 (
 เป็นเวลา 30 วินาที ตามด้วย 25 รอบ
94  C / 1 นาที , 58  C / 1.5 นาที 72  c /
1.5 นาที และสุดท้ายของ 72  C / 5 นาที ในเพนดอร์ฟ
ความร้อนรอบ ( เพนดอร์ฟ )