homologous gene sequences of S. cerevisiae and Candida albicans (Nailis
et al., 2006). A phytase gene of P. kudriavzevii was identified by screening
for the conserved N and C- terminal motifs found in the histidine acid
phosphatases in all contigs of a recently published draft genome of P.
kudriavzevii (GeneBank # ALNQ00000000.1, Chan et al., 2012). This was
performed by reverse translation of the conserved protein domains by
using CLC Main Workbench 6. The identified sequence named as PHYPk
was found on contig 396 (GeneBank # ALNQ01000395). Primers specific
for PHYPk (fTGTCCCTTCCACTAGTTT- rAACTTACCGATAACCAGC), for ACT1
(f ACCATGTTCCCAGGTATTGC- rCACATTTGTTGGAAGGTGGA) and for
LSC2 (fAATGGTTTCTGGAGTTGCAGC- rGATGAAGTTGTTGCCTCTAAA)
were designed using CLC Main Workbench 6 (CLC Bio, Qiagen, Arhus,
Denmark) and their efficiency was evaluated using NCBI database. PCR
conditions for all primer setswere tuned using a gradient-PCR (SureCycler
8800, Agilent Technologies). The amplification efficiency (E) was estimated
by quantitative PCR (qPCR) (7500 Fast Real-time PCR System, Applied
Biosystems, CA, USA) using serial dilutions of pooled cDNA samples as
standards (Rasmussen, 2001).
ลำดับยีน homologous S. cerevisiae และ Candida albicans (Nailisและ al., 2006) ระบุยีนคุณสมบัติของ P. kudriavzevii โดยคัดกรองสำหรับการนำ N และเทอร์มินัล C ลงในกรด histidinephosphatases ใน contigs ทั้งหมดของจีโนมร่างประกาศล่าสุดของพีkudriavzevii (GeneBank # ALNQ00000000.1 จันทร์ร้อยเอ็ด al., 2012) นี้ดำเนินการ โดยแปลย้อนกลับโดเมนโดยนำโปรตีนใช้ CLC หลักบนเก้าอี้ทำงาน 6 ลำดับที่ระบุชื่อเป็น PHYPkพบบน contig 396 (GeneBank # ALNQ01000395) เฉพาะไพรเมอร์สำหรับ PHYPk (fTGTCCCTTCCACTAGTTT-rAACTTACCGATAACCAGC), ใน ACT1(f ACCATGTTCCCAGGTATTGC rCACATTTGTTGGAAGGTGGA) และLSC2 (fAATGGTTTCTGGAGTTGCAGC-rGATGAAGTTGTTGCCTCTAAA)ถูกออกแบบโดยใช้ CLC หลักปรับแต่ง 6 (CLC ชีวภาพ Qiagen รถไฟอาร์ ฮัสเดนมาร์ก) และมีประเมินประสิทธิภาพการใช้ฐานข้อมูล NCBI PCRเงื่อนไขสำหรับ setswere รองพื้นทั้งหมดปรับใช้การไล่ระดับสี-PCR (SureCycler8800, Agilent เทคโนโลยี) ประมาณการการขยายประสิทธิภาพ (E)โดย PCR เชิงปริมาณ (qPCR) (7500 เร็ว Real-time PCR ใช้ระบบBiosystems, CA, USA) ใช้อนุกรม dilutions cDNA รวมตัวอย่างเป็นมาตรฐาน (Rasmussen, 2001)
การแปล กรุณารอสักครู่..
โฮโมโลกัสยีน ลำดับของ S . cerevisiae Candida albicans ( nailis
et al . , 2006 ) เป็นเอนไซม์ไฟเตสยีนของหน้า kudriavzevii ถูกระบุโดยการคัดกรอง
เพื่ออนุรักษ์ และ ซี - เทอร์มินอล ลวดลายที่พบในโตรกสูงในกรด
ดิเพิ่งเผยแพร่ร่างจีโนมของ P .
kudriavzevii ( genebank # alnq00000000.1 ชาน et al . , 2012 ) นี้คือ
ขับร้องโดยแปลย้อนกลับของป่าสงวนโปรตีนโดเมนโดย
โดยใช้หลัก Workbench CLC 6 ระบุลำดับชื่อเป็น phypk
ถูกพบใน contig 396 ( genebank # alnq01000395 ) ไพรเมอร์ที่จำเพาะสำหรับ phypk
( ftgtcccttccactagttt - raacttaccgataaccagc ) , act1
( F accatgttcccaggtattgc - rcacatttgttggaaggtgga ) และ lsc2 ( faatggtttctggagttgcagc
-
rgatgaagttgttgcctctaaa )ได้รับการออกแบบโดยใช้หลัก Workbench CLC 6 ( CLC ชีวภาพเพิ่มอาร์ฮุส , เดนมาร์ก , ,
) และประสิทธิภาพของพวกเขาจะถูกประเมินโดยใช้ฐานข้อมูล ncbi . เงื่อนไขทั้งหมด setswere PCR
รองพื้นปรับใช้ไล่สี PCR ( surecycler
8800 Agilent , เทคโนโลยี ) โดยการเพิ่มประสิทธิภาพ ( E ) ประมาณ
ด้วยเทคนิคเชิงปริมาณ ( qpcr ) ( 7 , 500 ระบบ PCR อย่างรวดเร็วเวลาจริงใช้
Biosystems แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา ) โดยใช้วิธีการรวมแบบตัวอย่างยีนเป็น
มาตรฐาน ( ราสมุสเซ่น , 2001 )
การแปล กรุณารอสักครู่..