Rhizobial Spot-Inoculation of PeaFi

Rhizobial Spot-Inoculation of Pea
Figure 4 highlights the important steps in the protocol for successful spot-inoculation.

1| As 1| above.

2| Plant seeds in 7.5 cm pots filled with sterile vermiculite and let grow for 3 days (Figure 4A).

NOTE: Growing seeds in vermiculite is crucial to obtain plants with straight roots for easy transfer to pouches. It is important to allow the pea seedlings to develop for 3 days as the length of the radicle is optimal at this time.

3| Three days later, prepare to transfer one seedling per germination pouch (cyg™ seed germination pouch, Mega International, St-Paul, MN). Make a hole with a clean razor blade in the top centre of the pouch filter paper, so that the root enters the pouch but the cotyledons do not fall through the hole.

4| Wet the pouch with sterile low-nitrogen nutrient solution [as in [44]] until the entire surface of the filter paper has absorbed liquid (~ 7 mL).

NOTE: Micro-nutrients such as boron are required for nodules to develop [46]. It is essential to supply these nutrients instead of water alone as the seedling will not have access to them in a soil-free environment.

5| Remove gently the seedlings from the pots, and the seed-coat from the seedling, and place the primary root through the hole previously made (Figure 4B). The root must be in contact with the moist filter paper of the growth pouch.

6| Tape the top of the pouch closed, leaving a hole for the shoot to emerge (Figure 4B). Taping the pouch helps to maintain a moist inner environment preventing the roots from drying out. It also prevents vermiculite from entering the pouch (see below).

7| Cut a piece of the growth pouch 2.5 cm from its bottom with a pair of scissors (Figure 4B). The filter paper within the pouch will thus be in contact with the moist vermiculite (see below); this will ensure a constant supply of water to the developing roots while at the same time prevent any water-logging. The sides of the pouch can be trimmed for a better fitting when the pouches are inserted into the pots.

8| Place the growth pouches with the seedlings in 15 cm diameter pots (Figure 4C) and fill those with sterile vermiculite to cover completely the pouches (Figure 4D).

NOTE: Covering the pouch with vermiculite prevents light from reaching the roots; this is important as exposure to light inhibits pea nodulation [47].

9| Moisten the vermiculite with water and place the pots in trays in a controlled growth-room. Water the plants by adding water to the tray. The vermiculite maintains a humid environment for the pouch and filter paper.

10| Two days before inoculation, grow a rhizobial culture as above.

NOTE: Do not water the plants during this time to reduce the amount of residual water in the pouch. If the pouches are too wet, the inoculum drop will not remain on the root. It is of prime importance to time the earlier watering so that at this stage the pouches are only damp.

11| After 5 days of growth in the pouches, lateral roots will be of an optimal length for spot-inoculation (Figure 4E). Remove the pouches from the pots and find under the dissecting microscope the zone that is the most susceptible to infection, i.e., the region where roots hairs are starting to emerge from the root. This location is usually 0.5-1 cm away from the root tip.

NOTE: Condensation on the inside of the plastic pouch can impede the viewing of roots. Gently lift the top layer of the pouch from the bottom and use a sterile filter paper to remove the water droplets.

12| Mark the zone of the most susceptibility on the outside of the pouch with a water-proof marker (Figure 4E). Do not damage the root when applying the marker; if needed, hold the top surface of the pouch away from the root and apply the mark to the desired location.

13| Lift the top plastic sheet at the bottom end of the pouch and apply with a micro-pipette onto the root a 0.5 μL drop of rhizobial suspension adjusted to the viable cell density of 6.4 × 104 CFUs/mL.

NOTE: Do not place the top of the pouch back onto the root right away; let the drop sink in the root and paper before closing the pouch.

14| Return the pouches to the pots and cover with vermiculite (Figure 4F). Water the plants when needed; a good indication to do so is given when the colour of the pouch changes as it starts to dry. Harvest at the desired time (Figure 4G).

15| In our experiments carried out under the described conditions, we observed nodulation events, such as divisions of pericycle cells, as early as 24 hours after spot-inoculation; pink nodules are seen at 10 DAI.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กักบริเวณจุด rhizobial ของถั่วรูปที่ 4 เน้นขั้นตอนสำคัญในโพรโทคอลสำหรับจุดกักบริเวณที่ประสบความสำเร็จ1| เป็น 1| ข้างต้น2| เมล็ดพืชในหม้อ 7.5 ซม.ด้วยเวอร์มิคูไลท์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อ และปล่อยให้เติบโต 3 วัน (รูปที่ 4A)หมายเหตุ: เมล็ดในเวอร์มิคูไลท์เติบโตเป็นสิ่งสำคัญรับพืชที่ มีรากตรงสำหรับ easy transfer เพื่อกระเป๋า มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้ต้นกล้าถั่วการพัฒนา 3 วันเป็นความยาวของ radicle เหมาะสมที่สุดในเวลานี้3| สามวันต่อมา เตรียมการโอนย้ายต้นกล้าหนึ่งต่อการงอกกระเป๋า (cyg™เมล็ดการงอกกระเป๋า Mega นานา เซนต์พอล MN) ทำหลุม ด้วยใบมีดโกนสะอาดในศูนย์กลางด้านบนของกระดาษกรองถุง เพื่อให้รากเข้าสู่ถุง แต่ cotyledons ไม่ตกอยู่รู4| กระเป๋ากับหมันไนโตรเจนต่ำสารละลาย [ใน [44]] จนทั่วพื้นผิวของกระดาษกรองเปียกมีการดูดซึมของเหลว (~ 7 mL)หมายเหตุ: เป็นสารอาหารขนาดเล็กเช่นโบรอนสำหรับก้อนพัฒนา [46] มันเป็นสิ่งสำคัญในการจัดหาสารอาหารเหล่านี้แทนที่น้ำที่เป็นต้นกล้าจะสามารถเข้าถึงพวกเขาในสภาพแวดล้อมที่ปราศจากดิน5| เอาต้นกล้าเบา ๆ จากหม้อ และเคลือบเมล็ดจากต้นกล้า และวางรากหลักผ่านรูที่ทำไว้ก่อนหน้า (รูปที่ 4B) รากต้องติดต่อกับกระดาษกรองชื้นของถุงเจริญเติบโต6| เทปด้านบนของถุงปิด ออกจากหลุมสำหรับยิงจะโผล่ออกมา (รูปที่ 4B) เทปถุงช่วยรักษาความชุ่มชื้นภายในสภาพแวดล้อมที่ป้องกันไม่ให้รากแห้ง นอกจากนี้มันยังป้องกันเวอร์มิคูไลท์เข้ากระเป๋า (ดูด้านล่าง)7| ตัดชิ้นส่วนของถุงเติบโต 2.5 ซม.จากด้านล่างของกับคู่ของกรรไกร (รูปที่ 4B) กระดาษกรองภายในถุงดังนั้นจะติดต่อกับเวอร์มิคูไลท์ชื้น (ดูด้านล่าง); นี้จะช่วยให้อุปทานคงที่ของน้ำเพื่อการพัฒนารากในขณะที่การป้องกันน้ำเข้าสู่ระบบ ด้านข้างของถุงสามารถถูก trimmed สำหรับดีที่เหมาะสมเมื่อกระเป๋าถูกแทรกลงในหม้อ8| วางถุงเติบโตกับต้นกล้าในกระถางเส้นผ่าศูนย์กลาง 15 ซม. (รูปที่ 4C) และกรอกที่ปลอดเชื้อเวอร์มิคูไลท์จะครอบคลุมทั้งหมดกระเป๋า (รูป 4D)หมายเหตุ: ครอบคลุมกระเป๋ากับเวอร์มิคูไลท์ทำให้แสงเข้าถึงราก นี้เป็นสิ่งสำคัญแสงยับยั้งถั่ว nodulation [47]9| เวอร์มิคูไลท์ ด้วยน้ำหล่อเลี้ยง และวางหม้อในถาดในห้องที่ควบคุมการเจริญเติบโต รดน้ำต้นไม้ โดยเพิ่มน้ำลงในถาด เวอร์มิคูไลท์การรักษาสภาพแวดล้อมที่ชื้นถุงและกระดาษกรอง10| สองวันก่อนดัน เติบโตวัฒนธรรม rhizobial ดังกล่าวข้างต้นหมายเหตุ: ไม่รดน้ำต้นไม้ในช่วงเวลานี้เพื่อลดปริมาณของน้ำที่เหลือในถุง ถ้ากระเป๋าที่เปียก หล่น inoculum จะยังคงอยู่บนราก มันมีความสำคัญสำคัญเพื่อเวลาก่อนหน้านี้รดน้ำดังนั้นในขั้นตอนนี้ กระเป๋าจะชื้นเท่านั้น11| หลังจาก 5 วันของการเติบโตใส่กระเป๋า รากด้านข้างจะมีความยาวเหมาะสมที่สุดสำหรับจุดดัน (รูป 4E) เอาถุงออกจากหม้อ และค้นหาภายใต้กล้องจุลทรรศน์ dissecting โซนที่เป็นสุดต่อการติดเชื้อ เช่น ภูมิภาคที่ขนรากจะเริ่มออกจากราก ตำแหน่งนี้มักจะเป็น 0.5-1 เซนติเมตรห่างจากปลายรากหมายเหตุ: หยดน้ำเกาะด้านในของถุงพลาสติกสามารถเป็นอุปสรรคต่อการดูของราก ค่อย ๆ ยกชั้นบนของถุงจากด้านล่าง และใช้กระดาษกรองปลอดเชื้อเพื่อเอาหยดน้ำ12| ทำเครื่องหมายในโซนของความอ่อนแอที่สุดด้านนอกของถุง มีเครื่องหมายน้ำหลักฐาน (รูป 4E) ไม่ทำลายรากเมื่อใช้เครื่องหมาย ถ้าจำเป็น เก็บพื้นผิวด้านบนของถุงจากราก และใช้หมายไปยังตำแหน่งที่ต้องการ13| ยกพลาสติกแผ่นด้านบนที่ปลายด้านล่างของถุง และใช้กับ micro-ปิเปตลงรากลดลง 0.5 μL rhizobial ระงับปรับความหนาแน่นของเซลล์ทำงานได้ของ 6.4 × 104 CFUs/mLหมายเหตุ: ไม่ได้ทำด้านบนของกระเป๋ากลับไปยังรากทันที ปล่อยให้หล่นจมลงในกระดาษและรากก่อนที่จะปิดถุง14| กลับมาถุงให้หม้อ และครอบคลุมกับเวอร์มิคูไลท์ (ชั้น 4 รูป) รดน้ำต้นไม้เมื่อจำเป็น ตัวบ่งชี้ที่ดีทำจะได้รับเมื่อการเปลี่ยนแปลงสีของถุงมันเริ่มแห้ง เก็บเกี่ยวในเวลาที่ต้องการ (รูป 4G)15| ในการทดลองของเราดำเนินการภายใต้เงื่อนไขกำหนดไว้ เราสังเกตเหตุการณ์ nodulation เช่นส่วนของ pericycle เซลล์ ก่อนที่เป็น 24 ชั่วโมงหลังจากกักบริเวณจุด จะเห็นก้อนสีชมพูที่ 10 DAI

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไรโซเบียม Spot-การฉีดวัคซีนถั่ว
รูปที่ 4 ไฮไลท์ขั้นตอนที่สำคัญในโปรโตคอลสำหรับการประสบความสำเร็จในจุดฉีดวัคซีน. 1 | ในฐานะที่เป็น 1 | ดังกล่าวข้างต้น. 2 | เมล็ดพืชในกระถาง 7.5 ซม. เต็มไปด้วยดินผ่านการฆ่าเชื้อและปล่อยให้เจริญเติบโตได้เป็นเวลา 3 วัน (รูป 4A). หมายเหตุ: เมล็ดเจริญเติบโตในดินเป็นสิ่งสำคัญที่จะได้รับพืชที่มีรากตรงสำหรับการถ่ายโอนง่ายต่อถุง มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะช่วยให้ต้นกล้ากฟภ. ในการพัฒนาเป็นเวลา 3 วันในขณะที่ความยาวของ radicle เป็นที่ดีที่สุดในเวลานี้. 3 | สามวันต่อมาเตรียมความพร้อมในการถ่ายโอนหนึ่งต้นกล้างอกต่อถุง (CYG เมล็ด™กระเป๋างอกเมกะสากลเซนต์ปอล, MN) ทำให้หลุมด้วยใบมีดโกนที่สะอาดในใจกลางด้านบนของกระดาษกรองกระเป๋าเพื่อให้รากเข้ากระเป๋า แต่ใบเลี้ยงไม่ตกผ่านรู. 4 | เปียกกระเป๋ากับสารละลายธาตุอาหารต่ำไนโตรเจนหมัน [เหมือนใน 44 []] ของเหลวจนพื้นผิวทั้งหมดของกระดาษกรองมีการดูดซึม (~ 7 มล.) หมายเหตุ: Micro-สารอาหารเช่นโบรอนที่จำเป็นสำหรับก้อนในการพัฒนา [46 ] มันเป็นสิ่งสำคัญในการจัดหาสารอาหารเหล่านี้แทนน้ำอยู่คนเดียวเป็นต้นกล้าจะไม่ได้มีการเข้าถึงพวกเขาในสภาพแวดล้อมดินฟรี. 5 | นำต้นกล้าเบา ๆ จากหม้อเมล็ดเสื้อจากต้นกล้าและวางรากหลักผ่านรูที่ทำก่อนหน้านี้ (รูปที่ 4B) รากจะต้องอยู่ในการติดต่อกับกระดาษกรองชื้นของกระเป๋าเจริญเติบโต. 6 | เทปด้านบนของกระเป๋าปิดออกจากหลุมสำหรับการถ่ายทำจะโผล่ออกมา (รูปที่ 4B) Taping กระเป๋าช่วยในการรักษาสภาพแวดล้อมภายในชื้นป้องกันรากแห้ง นอกจากนี้ยังช่วยป้องกันไม่ให้ดินจากการเข้ากระเป๋า (ดูด้านล่าง). 7 | ตัดชิ้นส่วนของการเจริญเติบโตกระเป๋า 2.5 ซม. จากด้านล่างด้วยกรรไกร (รูปที่ 4B) กระดาษกรองภายในกระเป๋าจึงจะอยู่ในการติดต่อกับดินชื้น (ดูด้านล่าง); นี้จะให้แน่ใจว่าอุปทานคงที่ของน้ำเพื่อการพัฒนารากในขณะที่ในเวลาเดียวกันป้องกันไม่ให้น้ำเข้าสู่ระบบ ด้านข้างของกระเป๋าสามารถตัดแต่งสำหรับกระชับดีขึ้นเมื่อถุงจะแทรกเข้าไปในหม้อ. 8 | วางกระเป๋าเจริญเติบโตที่มีต้นกล้าในกระถาง 15 ซมเส้นผ่าศูนย์กลาง (รูป 4C) และกรอกข้อมูลที่มี vermiculite ผ่านการฆ่าเชื้อเพื่อให้ครอบคลุมสมบูรณ์ถุง (รูป 4D). หมายเหตุ: ครอบคลุมกระเป๋ากับ vermiculite ป้องกันไม่ให้แสงจากการเข้าถึงราก; นี้เป็นสิ่งสำคัญที่สัมผัสกับแสงยับยั้งการเกิดปมกฟภ. [47]. 9 | เช็ด vermiculite ด้วยน้ำและวางกระถางในถาดในการเจริญเติบโตในห้องควบคุม รดน้ำต้นไม้โดยการเพิ่มน้ำในถาด vermiculite รักษาสภาพแวดล้อมที่ชื้นสำหรับกระเป๋าและกระดาษกรอง. 10 | สองวันก่อนการฉีดวัคซีนเติบโตวัฒนธรรมไรโซเบียมดังกล่าว. หมายเหตุ: อย่ารดน้ำต้นไม้ในช่วงเวลานี้ในการลดปริมาณน้ำที่เหลือในกระเป๋า ถ้ากระเป๋าเปียกเกินไปลดลงเชื้อจะไม่คงอยู่บนราก มันมีความสำคัญเฉพาะกับเวลารดน้ำก่อนหน้านี้เพื่อที่ว่าในขั้นตอนนี้กระเป๋าที่มีน้ำหมาด ๆ เท่านั้น. 11 | หลังวันที่ 5 ของการเติบโตในกระเป๋าที่รากด้านข้างจะมีความยาวที่เหมาะสมสำหรับจุดฉีดวัคซีน (รูป 4E) นำถุงจากหม้อและพบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ที่เขตพื้นที่ที่เป็นส่วนใหญ่อ่อนแอต่อการติดเชื้อเช่นพื้นที่ที่รากขนจะเริ่มโผล่ออกมาจากราก สถานที่แห่งนี้มักจะ 0.5-1 ซม. ห่างจากปลายราก. หมายเหตุ: การควบแน่นบนด้านในของถุงพลาสติกที่สามารถเป็นอุปสรรคต่อการรับชมของราก ค่อยๆยกชั้นบนสุดของกระเป๋าจากด้านล่างและใช้กระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อที่จะเอาหยดน้ำ. 12 | ทำเครื่องหมายโซนของความอ่อนแอมากที่สุดที่ด้านนอกของกระเป๋ามีเครื่องหมายน้ำหลักฐาน (รูป 4E) อย่าสร้างความเสียหายรากเมื่อใช้เครื่องหมาย; ถ้าจำเป็นให้จับพื้นผิวด้านบนของกระเป๋าออกไปจากรากและใช้เครื่องหมายยังตำแหน่งที่ต้องการ. 13 | ยกแผ่นพลาสติกด้านบนที่ปลายด้านล่างของกระเป๋าและนำไปใช้กับไมโครปิเปตบนรากลดลง 0.5 ไมโครลิตรของการระงับไรโซเบียมปรับความหนาแน่นของเซลล์ทำงานได้ 6.4 × 104 CFUs / มล. หมายเหตุ: อย่าวางด้านบน ของกระเป๋ากลับไปยังรากได้ทันที; ให้ลดลงในอ่างรากและกระดาษก่อนที่จะปิดกระเป๋า. 14 | กลับกระเป๋าเพื่อหม้อและครอบคลุมกับ vermiculite (รูป 4F) รดน้ำต้นไม้เมื่อมีความจำเป็น; ตัวบ่งชี้ที่ดีที่จะทำเช่นนั้นจะได้รับเมื่อสีของการเปลี่ยนแปลงกระเป๋าในขณะที่มันเริ่มที่จะแห้ง . การเก็บเกี่ยวในช่วงเวลาที่ต้องการ (รูป 4G) 15 | ในการทดลองของเราดำเนินการภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายที่เราสังเกตเห็นเหตุการณ์ที่เกิดปมเช่นหน่วยงานของเซลล์ pericycle เป็นช่วงต้น 24 ชั่วโมงหลังจากการฉีดวัคซีนจุด; ก้อนสีชมพูจะเห็นที่ 10 DAI

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การฉีดวัคซีนจุดสูงของกฟภ.รูปที่ 4 สรุปขั้นตอนที่สำคัญในการรับการฉีดวัคซีนจุดที่ประสบความสำเร็จ1 | 1 | ข้างต้น2 | เมล็ดพืชใน 7.5 ซม. หม้อที่เต็มไปด้วย vermiculite เป็นหมัน และให้ปลูก 3 วัน ( รูปที่ 4 )หมายเหตุ : การปลูกเมล็ดในเวอร์มิคูไลท์เป็นสิ่งสำคัญที่จะได้พืชที่มีรากตรงง่ายต่อการถ่ายโอนไปยัง Pouches มันเป็นสิ่งสำคัญเพื่อให้ถั่ว ต้นกล้าพัฒนา 3 วันตามความยาวของรากจะเหมาะสมที่สุดในเวลานี้3 | 3 วันต่อมา เตรียมการงอกของต้นกล้าต่อถุง ( cyg ™เมล็ดถุงใหญ่ระหว่างประเทศ , St Paul , MN ) ให้หลุมด้วยมีดโกนทำความสะอาดใบมีดในศูนย์ที่ด้านบนของถุงกรองกระดาษ เพื่อให้รากเข้ากระเป๋า แต่การแสดงออกไม่ตกผ่านหลุม4 | เปียกถุงปลอดเชื้อที่มีสารละลายธาตุอาหารไนโตรเจนใน [ [ 44 ] ] จนพื้นผิวทั้งหมดของตัวกรองกระดาษจะดูดซึมของเหลว ( ~ 7 ml )หมายเหตุ : สารอาหารขนาดเล็ก เช่น โบรอน เป็นแบบพัฒนา [ 46 ] มันเป็นสิ่งจำเป็นในการจัดหาสารอาหารเหล่านี้แทนน้ำคนเดียวที่กล้าจะไม่สามารถเข้าถึงพวกเขาในดินฟรีสิ่งแวดล้อม5 | ลบเบาๆ ต้นกล้าจากหม้อ และเยื่อหุ้มเมล็ดจากเมล็ดและรากหลักผ่านหลุมที่ผ่านมาตัวเลข ( 4B ) รากจะต้องติดต่อกับชุ่มชื้น กรองกระดาษของถุงโตเทปด้านบนของกระเป๋า 6 | ปิด ทำให้มีช่องให้ยิงออกมา ( รูปที่ 4B ) ติดกระเป๋า ช่วยรักษาสภาพแวดล้อมชุ่มชื้นภายในป้องกันรากแห้งไป มันยังป้องกัน vermiculite เข้ากระเป๋า ( ดูด้านล่าง )7 | ตัดชิ้นส่วนของการเจริญเติบโต ถุง 2.5 ซม. จากล่างของมันด้วยกรรไกร ( รูป 4b ) เครื่องกรองกระดาษภายในกระเป๋าจึงจะอยู่ในการติดต่อกับ vermiculite ชุ่มชื้น ( ดูด้านล่าง ) ; นี้จะให้แน่ใจว่าอุปทานคงที่ของน้ำเพื่อการพัฒนารากในขณะที่ในเวลาเดียวกันป้องกันน้ำเข้าสู่ระบบ ด้านข้างของกระเป๋าสามารถตัดแต่งให้กระชับขึ้นเมื่อกระเป๋าใส่ในหม้อ8 | สถานที่การเจริญเติบโตกระเป๋ากับต้นกล้าในกระถางขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 15 ซม. ( รูปที่ 4C ) และกรอกด้วย vermiculite เป็นหมันครอบคลุมสมบูรณ์กระเป๋า ( รูป 4D )หมายเหตุ : ครอบคลุมถุง vermiculite ป้องกันแสงจากการเข้าถึงราก ; นี้เป็นสำคัญ เช่น การเปิดรับแสง ยับยั้งการเกิดพี [ 47 ]9 | หล่อเลี้ยง vermiculite กับน้ำและสถานที่ในหม้อในถาดในการควบคุมการเจริญเติบโตของห้อง น้ำพืชโดยการเพิ่มน้ำในถาด และ Vermiculite รักษาสภาพแวดล้อมที่ชื้นสำหรับกระเป๋าและกระดาษกรอง10 | 2 วัน ก่อนการปลูกวัฒนธรรมเพียงข้างต้นหมายเหตุ : อย่าให้น้ำพืชในช่วงเวลานี้ เพื่อลดปริมาณน้ำที่เหลือในถุง ถ้ากระเป๋าเป็นเปียกเกินไปเชื้อลดลงจะยังคงไม่อยู่ในราก มันมีความสําคัญเฉพาะเวลาก่อนหน้านี้รดน้ำ ดังนั้นในขั้นตอนนี้กระเป๋าจะชื้น11 | หลังจาก 5 วันของการเติบโตในถุง , รากด้านข้างจะมีความยาวที่เหมาะสมสำหรับจุด ( ตัวเลข ( 4E ) เอากระเป๋าจากหม้อและพบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ผ่าโซนที่เสี่ยงต่อการติดเชื้อมากที่สุด ได้แก่ ภูมิภาคที่รากขนจะเริ่มโผล่จากราก สถานที่ นี้มักจะเป็น 0.5-1 ซม. ห่างจากปลายรากฟัน .หมายเหตุ : การควบแน่นของในถุงพลาสติก สามารถขัดขวางการของราก ค่อยๆยกชั้นบนสุดของกระเป๋าจากด้านล่าง และใช้กรองกระดาษปลอดเชื้อเพื่อเอาน้ำหยด .12 | เครื่องหมายเขตของไวที่สุดบนด้านนอกของกระเป๋า ด้วยหลักฐาน เครื่องหมายตัวเลข ( 4E ) ไม่ให้เกิดความเสียหายรากเมื่อใช้เครื่องหมาย ; ถ้าจำเป็น จับพื้นผิวด้านบนของถุงไปจากรากและใช้เครื่องหมายไปยังตำแหน่งที่ต้องการ .13 | ยกแผ่นพลาสติกด้านบนที่ปลายด้านล่างของกระเป๋า และใช้กับหลอดขนาดเล็กลงบนราก 0.5 μผมวางของช่วงล่างที่ปรับให้สูงได้ 6.4 × 104 cfus ความหนาแน่นเซลล์ / มิลลิลิตรหมายเหตุ : ไม่ควรวางด้านบนของกระเป๋ากลับไปที่รากทันที ปล่อยให้หล่นจมลงในรากและกระดาษก่อนปิดถุง14 | คืนกระเป๋าให้หม้อและครอบคลุมกับเวอร์มิคูไลท์ ( รูปแทนที่ ) น้ำพืชเมื่อต้องการ ; บ่งชี้ที่ดีที่จะทำเช่นนั้นจะได้รับเมื่อสีของกระเป๋า การเปลี่ยนแปลงมันเริ่มแห้ง การเก็บเกี่ยวในเวลาที่ต้องการ ( รูปที่ 4G )15 | ในการทดลองภายใต้เงื่อนไขที่อธิบายให้เราสังเกตเหตุการณ์การเกิด เช่น หน่วยงานของเพริไซเคิลเซลล์ เป็นต้น ตลอด 24 ชั่วโมง หลังจากจุดเชื้อ ; ก้อนสีชมพูจะเห็นที่ 10 ได้