Enzymatically digested samples were

Enzymatically digested samples were diluted in 0.1% formic acid (1:5, v/v) and analyzed by LC–MS/MS. LC–MS/MS experiments were performed on a Dionex U3000 LC system coupled to a qExactive mass spectrometer, both from Thermo Scientific (San Jose, CA, USA). Chromatographic separation was performed on a Zorbax SB-C18 column (150×2.1mmi.d., 5 μmparticle size, 300 Å porosity) fromAgilent Technology (Palo Alto, CA, USA). Peptides from BSA were eluted from the column at a flow rate of 200 μl/min using water as mobile phase A and acetonitrile as mobile phase B, both containing 0.1% formic acid. A fast linear gradient from 5 to 60% B in 8 min was performed. Then the column was washed for 2 min at 95% B. The equilibration time before the next analysis was set at 5 min, so that the time between two experimental cycles was 15 min. Column temperature was maintained at 60 °C. The column effluentwas directly introduced into the electrospray source of the qExactive mass spectrometer. Analyseswere performed in the positive ion mode, and sequential MS2 experiments were performed using the data-dependent acquisition method. The five most abundant precursor ions (charge states higher than +1) were selected for fragmentation using higher energy collisional dissociation (HCD).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Enzymatically ต้องการตัวอย่างถูกทำให้เจือจางในกรด 0.1% (1:5, v/v) และวิเคราะห์ โดย LC – MS/นางสาว LC – MS/MS ดำเนินการทดลองในระบบ Dionex U3000 LC ควบคู่ไปกับการ qExactive โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์ ทั้งจากทางวิทยาศาสตร์เทอร์โม (San Jose, CA, USA) แยก chromatographic ถูกดำเนินการบนคอลัมน์ Zorbax SB-C18 (150 × 2 .1mmi .d ขนาด 5 μmparticle, 300 Å porosity) fromAgilent เทคโนโลยี (ดัลลัส CA, USA) เปปไทด์จากบีเอสเอได้ eluted จากคอลัมน์ในอัตราการไหล 200 μl/min ใช้น้ำเคลื่อนระยะ A และ acetonitrile เป็นโมบายระยะ B ทั้งมี 0.1% กรด ทำการไล่เส้นอย่างรวดเร็วจาก 5 ถึง 60% B ใน 8 นาที แล้ว มีล้างคอลัมน์สำหรับ 2 นาที 95% เกิด เวลา equilibration ก่อนการวิเคราะห์ต่อไปได้ตั้งที่ 5 นาที ให้เวลาระหว่างทดลองรอบสอง 15 นาทีอุณหภูมิคอลัมน์ถูกรักษาไว้ที่ 60 องศาเซลเซียส Effluentwas คอลัมน์ที่แนะนำโดยตรงเป็นต้นวิธีพ่นละอองไฟฟ้าของสเปกโตรมิเตอร์มวล qExactive Analyseswere ทำในโหมดไอออนบวก และดำเนินการทดลอง MS2 ตามลำดับโดยใช้วิธีการซื้อขึ้นอยู่กับข้อมูล 5 มากสุดสารตั้งต้นประจุ (อเมริกาค่าธรรมเนียมสูงกว่า + 1) ถูกเลือกสำหรับการกระจายตัวที่ใช้สูงกว่าพลังงาน collisional dissociation (HCD)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างเอนไซม์ย่อยถูกเจือจางใน 0.1% กรด (1: 5, v / v) และวิเคราะห์โดย LC-MS / MS LC-MS / MS ทดลองได้ดำเนินการใน Dionex U3000 ระบบ LC คู่กับสเปกโตรมิเตอร์มวล qExactive ทั้งจากเทอร์โมวิทยาศาสตร์ (San Jose, CA, USA) การแยกสารได้ดำเนินการในคอลัมน์ Zorbax SB-C18 (150 × 2.1mmi.d. 5 ขนาดμmparticle 300 Åพรุน) fromAgilent เทคโนโลยี (Palo Alto, CA, USA) เปปไทด์จากบีเอสเอถูกชะจากคอลัมน์ที่อัตราการไหลของ 200 ไมโครลิตร / นาทีใช้น้ำเป็นเฟสเคลื่อนที่และ acetonitrile เป็นเฟสเคลื่อนที่ B ทั้งที่มี 0.1% กรด ลาดเชิงเส้นอย่างรวดเร็ว 5-60% B 8 นาทีที่ได้ดำเนินการ จากนั้นคอลัมน์ถูกล้างสำหรับ 2 นาทีที่ 95% บีเวลาสมดุลก่อนที่จะวิเคราะห์ต่อไปตั้งอยู่ที่ 5 นาทีเพื่อให้เวลาระหว่างสองรอบการทดลองเป็นเวลา 15 นาที อุณหภูมิคอลัมน์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 60 องศาเซลเซียส คอลัมน์ effluentwas แนะนำโดยตรงในแหล่ง electrospray ของสเปกโตรมิเตอร์มวล qExactive Analyseswere ดำเนินการในโหมดไอออนบวกและการทดลอง MS2 ลำดับได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการเก็บข้อมูลขึ้นอยู่กับ ห้าไอออนสารตั้งต้นที่มีมากที่สุด (ค่าใช้จ่ายที่สูงกว่ารัฐ 1) ถูกเลือกสำหรับการกระจายตัวของการใช้พลังงานที่สูงขึ้นการแยกตัวออก collisional (HCD)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

enzymatically ย่อยตัวอย่างที่เจือจางใน 0.1% กรด ( 1 : 5 , v / v ) และวิเคราะห์โดย LC MS / MS และคุณ LC / MS ) ทดลองใน DIONEX u3000 LC ระบบคู่กับสเปกโตรมิเตอร์มวล qexactive ทั้งจากเทอร์โมวิทยาศาสตร์ ( San Jose , CA , USA ) ดิ้นรนทำใน zorbax sb-c18 คอลัมน์ ( 150 × 2.1mmi . D , 5 μ mparticle ขนาด•มีรูพรุน ) 300 fromagilent เทคโนโลยี ( อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) เปปไทด์จาก BSA มีตัวอย่างจากคอลัมน์ที่อัตราการไหลของμ 200 ลิตร / นาที ใช้น้ำเป็นเฟสเคลื่อนที่และไนเป็นเฟสเคลื่อนที่ B ทั้งประกอบด้วย 0.1% กรด . เร็วเชิงเส้นไล่ระดับจาก 5 ถึง 60 % B ใน 8 นาทีแสดง แล้วเสาซัก 2 นาทีที่ 95 % Bการ equilibration เวลาก่อนการวิเคราะห์ต่อไปไว้ที่ 5 นาที ดังนั้นเวลาระหว่างทดลองสองรอบคือ 15 นาที คอลัมน์อุณหภูมิไว้ที่ 60 ° C effluentwas แนะนำลงในคอลัมน์ โดยวิธีพ่นละอองไฟฟ้าแหล่งสเปกโตรมิเตอร์มวล qexactive . analyseswere ดำเนินการในโหมดอิออนบวกลำดับ MS2 และทดลองใช้ข้อมูลซึ่งขึ้นอยู่กับวิธี ห้าชุกชุมมากที่สุดสารไอออน ( ค่าใช้จ่ายรัฐสูงกว่า 1 ) ถูกเลือกสำหรับการใช้พลังงานที่สูงขึ้น collisional หวิว ( hcd )