2.2. Antagonist
The yeast antagonist R. mucilaginosa was isolated from the
surfaces of peach blossom picked in unsprayed orchards. Classical
methods based on colony and cell morphologies were used for
a preliminary characterization of the yeast. Subsequently, sequence
analysis of the 5.8S internal transcribed spacer (ITS) ribosomal DNA
(rDNA) region was used to identify the yeast (Li et al., 2010). R.
mucilaginosa has been shown to be safe in animal testing, including
physiology experiments, acute toxicity studies, and the Ames test
(our unpublished data). R. mucilaginosa isolates were maintained at
4 C on Nutrient Yeast Dextrose Agar (NYDA) medium containing
8 g nutrient broth, 5 g yeast extract, 10 g glucose and 20 g agar
(Sangon Co., Shanghai, China), in 1 l of distilled water. Liquid
cultures of the yeast were grown in 250 ml Erlenmeyer flasks
containing 50 ml of NYD Broth (NYDB) which had been inoculated
with a loop of the culture. Flasks were incubated on a rotary shaker
at 28 C for 20 h. Following incubation, cells were centrifuged (TGL-
16M Centrifuge, Xiangyi Co., Changsha, China) at 5000 g for 10 min and washed twice with sterile distilled water in order to
remove the growth medium. Yeast cell pellets were re-suspended
in sterile distilled water and adjusted to an initial concentration
of 2e5 109 cells/ml before being adjusted to the concentrations
required for the different experiments.
2.2 ศัตรูศัตรูยีสต์อาร์ mucilaginosa ถูกแยกออกจากพื้นผิวของดอกพีชเลือกในสวนผลไม้unsprayed คลาสสิกวิธีการขึ้นอยู่กับอาณานิคมและรูปร่างลักษณะของเซลล์ที่ใช้สำหรับลักษณะเบื้องต้นของยีสต์ ต่อมาตามลำดับวิเคราะห์ของ spacer คัดลอกภายใน 5.8S (ITS) โซมอลดีเอ็นเอ (rDNA) ภูมิภาคถูกใช้ในการระบุยีสต์ (Li et al., 2010) อาร์mucilaginosa ได้รับการแสดงเพื่อความปลอดภัยในการทดสอบในสัตว์รวมทั้งการทดลองสรีรวิทยาการศึกษาความเป็นพิษเฉียบพลันและการทดสอบAmes (ที่ไม่ได้เผยแพร่ข้อมูลของเรา) อาร์ mucilaginosa สายพันธุ์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่4 องศาเซลเซียสในยีสต์สารอาหาร Dextrose Agar (Nyda) ขนาดกลางที่มี8 กรัมน้ำซุปสารอาหาร 5 กรัมสารสกัดจากยีสต์ 10 กรัมกลูโคสและ 20 กรัมวุ้น(Sangon จำกัด , เซี่ยงไฮ้, จีน) ใน 1 ลิตร น้ำกลั่น ของเหลววัฒนธรรมของยีสต์ที่ถูกปลูกในขวด 250 มล Erlenmeyer มี 50 มิลลิลิตร NYD น้ำซุป (NYDB) ซึ่งได้รับการฉีดวัคซีนกับวงของวัฒนธรรม ขวดถูกบ่มในเครื่องปั่นหมุนที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง ต่อไปนี้การบ่มเซลล์ถูกหมุนเหวี่ยง (TGL- 16 ล้านเครื่องปั่นเหวี่ยง Xiangyi Co. , ฉางชา, จีน) ที่ 5,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและล้างสองครั้งด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อเพื่อที่จะเอาสื่อการเจริญเติบโต เซลล์ยีสต์เม็ดเป็นอีกครั้งที่ถูกระงับในน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและปรับเปลี่ยนเพื่อความเข้มข้นเริ่มต้นของ2e5 109 เซลล์ / มล. ก่อนที่จะถูกปรับเปลี่ยนเพื่อความเข้มข้นที่จำเป็นสำหรับการทดลองที่แตกต่างกัน
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.2 . ปฏิปักษ์
ยีสต์ปฏิปักษ์ อาร์ mucilaginosa ถูกแยกจาก
พื้นผิวของดอกท้อ unsprayed เลือกในสวนผลไม้ คลาสสิก
โดยวิธีโคโลนีและเซลล์ที่ใช้สำหรับวิเคราะห์
ลักษณะเฉพาะเบื้องต้นของยีสต์ จากการวิเคราะห์ลำดับ
ของ 5.8s ภายในและ spacer ( ITS )
ดีเอ็นเอ ( rDNA Protein ) เขตถูกใช้เพื่อระบุยีสต์ ( Li et al . ,2010 ) R .
mucilaginosa ได้รับการแสดงเพื่อความปลอดภัยในสัตว์ทดลอง รวมทั้ง
สรีรวิทยาการทดลอง การศึกษาความเป็นพิษเฉียบพลัน และเอมทดสอบ
( ข้อมูลพิมพ์ของเรา ) อาร์ mucilaginosa ไอโซเลทสามารถ
4 C สารอาหารของยีสต์ dextrose agar ( nyda ) อาหารที่มีสารอาหารน้ำซุป
8 G , 5 กรัมยีสต์สกัด 10 กรัม กลูโคสและ 20 กรัมวุ้น
( จีนแสงอ่อน Co . , Shanghai ) ใน 1 ลิตรของน้ำ .วัฒนธรรมเหลว
ของยีสต์เติบโตหมักในฟลาสก์ขนาด 250 มิลลิลิตร ขวดบรรจุ 50 มล. ของน้ำซุปนีด
( nydb ) ซึ่งได้รับเชื้อ
ด้วยห่วงของวัฒนธรรม ถูกบ่มในขวดเขย่า โรตารี่ ที่ 28
C เป็นเวลา 20 ชั่วโมง ตามระยะเวลาและระดับเซลล์ ( tgl -
16m เครื่องหมุน xiangyi Co . , ฉางชา , จีน ) ที่ 5 , 000 กรัมต่อ 10 นาที และล้างด้วยน้ำกลั่นสองครั้งเป็นหมันเพื่อ
เอาปานกลางการเจริญเติบโต เม็ดเซลล์ยีสต์ได้อีกครั้งระงับ
ในหมันน้ำกลั่นและปรับเป็น
ความเข้มข้นเริ่มต้นของ 2e5 109 เซลล์ / มิลลิลิตร ก่อนการปรับความเข้มข้น
ที่จําเป็นสําหรับการทดลองต่าง ๆ .
การแปล กรุณารอสักครู่..
