Rhomboid proteins represent a recen

Rhomboid proteins represent a recently discovered family of intramembrane proteases present in a broad range of organisms and with increasing links to human diseases. The enteric parasite Entamoeba histolytica has evolved multiple mechanisms to adapt to the human host environment and establish infection. Our recent studies identified EhROM1 as a functional E. histolytica rhomboid protease with roles in adhesion to and phagocytosis of host cells. Since those studies were performed in a non-virulent strain, roles in parasite virulence could not be assessed. We focused this study on the comparison and validation of two genetic manipulation techniques: overexpression of a dominant-negative catalytic mutant of EhROM1 and knock down of EhROM1 using a RNAi-based silencing approach followed by functional studies of phenotypic analyses in virulent parasites. Both the EhROM1 catalytic mutant and parasites with EhROM1 downregulation were reduced in cytotoxicity, hemolytic activity, and directional and non-directional transwell migration. Importantly, the role for EhROM1 in cell migration mimics similar roles for rhomboid proteases from mammalian and apicomplexan systems. However, the EhROM1 catalytic mutant and EhROM1 downregulation parasites had different phenotypes for erythrophagocytosis, while complement resistance was not affected in either strain. In summary, in this study we genetically manipulated E. histolytica rhomboid protease EhROM1 by two different approaches and identified similarly attenuated phenotypes by both approaches, suggesting a novel role for EhROM1 in amebic motility.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โปรตีนเหมือนเป็นตัวแทนครอบครัวของโปรตีเอส intramembrane อยู่ในสิ่งมีชีวิต และเพิ่มลิงค์ไปยังโรคมนุษย์ถูกค้นพบเมื่อเร็ว ๆ นี้ ในลำไส้พยาธิ Entamoeba histolytica มีพัฒนากลไกการปรับตัวเข้ากับสภาพแวดล้อมที่โฮสต์มนุษย์ และสร้างเชื้อ การศึกษาล่าสุดของเราระบุ EhROM1 เป็นโปรติเอสเหมือนทำงาน E. histolytica มีบทบาทในการยึดเกาะกับ phagocytosis เซลล์โฮสต์ เนื่องจากผู้ศึกษาดำเนินการในสายพันธุ์-virulent อาจไม่มีประเมินบทบาทในความรุนแรงของพยาธิ เรามุ่งเน้นการศึกษานี้เปรียบเทียบและตรวจสอบของเทคนิคการจัดการทางพันธุกรรมสอง: แสดงออกของ mutant ตัวเร่งปฏิกิริยาเชิงลบที่โดดเด่นของ EhROM1 และเคาะลงของ EhROM1 โดยใช้แนวทางประสาน RNAi คะแนนตาม ด้วยงานศึกษาของฟีโนไทป์ใน virulent ปรสิต ทั้งกลายพันธุ์ตัวเร่งปฏิกิริยา EhROM1 และปรสิตกับ EhROM1 downregulation ถูกลดพิษ กิจกรรม hemolytic และ transwell ไม่มีทิศทาง และทิศทางการย้าย สำคัญ บทบาทสำหรับ EhROM1 ในการย้ายเซลล์เลียนแบบบทบาทที่คล้ายกันสำหรับปะทะโปรตีเอสจากระบบ apicomplexan และเลี้ยงลูกด้วยนม อย่างไรก็ตาม กลายพันธุ์ตัวเร่งปฏิกิริยา EhROM1 และ EhROM1 downregulation ปรสิตมีไทป์แตกต่างกันสำหรับ erythrophagocytosis ในขณะที่ไม่มีผลเสริมความต้านทานในสายพันธุ์ใด โดยสรุป ในการศึกษานี้ เราพันธุกรรมจัดการ E. histolytica ปะทะโปรติเอส EhROM1 โดยสองวิธีที่แตกต่างกัน และระบุไทป์ attenuated ในทำนองเดียวกัน โดยทั้งสองวิธี แนะนำบทบาทนวนิยายสำหรับ EhROM1 ใน amebic เคลื่อนไหว

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรตีน rhomboid เป็นตัวแทนของครอบครัวที่เพิ่งค้นพบของโปรตีเอส intramembrane อยู่ในความหลากหลายของสิ่งมีชีวิตและมีการเชื่อมโยงที่เพิ่มขึ้นเพื่อโรคของมนุษย์ ลำไส้ histolytica ปรสิต Entamoeba มีการพัฒนากลไกหลายปรับตัวเข้ากับสภาพแวดล้อมโฮสต์ของมนุษย์และการสร้างการติดเชื้อ การศึกษาล่าสุดของเราระบุ EhROM1 เป็นฟังก์ชั่นอีน้ำย่อย histolytica รูปสี่เหลี่ยมด้านขนานที่มีบทบาทสำคัญในการยึดเกาะและเซลล์ทำลายของเซลล์โฮสต์ เนื่องจากการศึกษาที่ได้ดำเนินการในสายพันธุ์ที่ไม่รุนแรงมีบทบาทสำคัญในพยาธิรุนแรงไม่สามารถประเมิน เรามุ่งเน้นการศึกษาครั้งนี้ในการเปรียบเทียบและการตรวจสอบของทั้งสองเทคนิคการจัดการทางพันธุกรรม: แสดงออกของมนุษย์กลายพันธุ์ที่โดดเด่นเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาเชิงลบของ EhROM1 และเคาะลง EhROM1 ใช้ RNAi ตามวิธีการห้ามไม่ให้พูดตามด้วยการศึกษาการทำงานของฟีโนไทป์วิเคราะห์ในปรสิตรุนแรง ทั้ง EhROM1 กลายพันธุ์ตัวเร่งปฏิกิริยาและปรสิตกับ EhROM1 downregulation ถูกลดความเป็นพิษในกิจกรรม hemolytic และทิศทางและไม่ใช่ทิศทางการโยกย้าย transwell ที่สำคัญบทบาทใน EhROM1 เลียนแบบการโยกย้ายเซลล์บทบาทคล้ายกันสำหรับโปรตีเอส rhomboid จากระบบที่เลี้ยงลูกด้วยนมและ apicomplexan อย่างไรก็ตาม EhROM1 กลายพันธุ์และการเร่งปฏิกิริยา EhROM1 ปรสิต downregulation มี phenotypes แตกต่างกันสำหรับ erythrophagocytosis ขณะต้านทานที่สมบูรณ์ไม่ได้รับผลกระทบในสายพันธุ์อย่างใดอย่างหนึ่ง โดยสรุปในการศึกษานี้เราพันธุกรรมจัดการ E. histolytica น้ำย่อย rhomboid EhROM1 โดยสองวิธีที่แตกต่างกันและมีการระบุ phenotypes จางเช่นกันโดยทั้งสองวิธีบอกบทบาทใหม่สำหรับ EhROM1 ในการเคลื่อนที่ amebic

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรตีนเปียกปูนเป็นตัวแทนค้นพบเมื่อเร็ว ๆ นี้ครอบครัวของทาง intramembrane ที่มีอยู่ในหลากหลายของสิ่งมีชีวิตและการเพิ่มการเชื่อมโยงกับการเกิดโรคในคน ที่เกี่ยวกับลำไส้ปรสิตปรับอากาศมีการพัฒนากลไกหลายที่จะปรับตัวให้เข้ากับสิ่งแวดล้อมโฮสต์ของมนุษย์ และสร้างการติดเชื้อ การศึกษาล่าสุดของเราระบุ ehrom1 การทำงานเช่นปีกที่มีบทบาทในการสร้างทั้งหมด 12 ตัวอย่างและ phagocytosis เซลล์โฮสต์ เนื่องจากการศึกษาที่ดำเนินการในสายพันธุ์ที่ไม่รุนแรง บทบาทในโรคพยาธิไม่สามารถประเมิน เราเน้นการศึกษาการเปรียบเทียบและการตรวจสอบของทั้งสองเทคนิคการจัดการทางพันธุกรรม : overexpression ของเด่นลบการกลายพันธุ์ของ ehrom1 และเคาะลงของ ehrom1 โดยใช้ RNAi ตามแนวทางการทำงานสามารถตามด้วยการศึกษาคุณสมบัติการวิเคราะห์ในปรสิตที่รุนแรง . ทั้ง ehrom1 การกลายพันธุ์และปรสิตกับ ehrom1 downregulation ลดลงในเซลล์ กิจกรรมหลัง และทิศทาง และไม่มีทิศทาง transwell การย้ายถิ่น คือ บทบาท ehrom1 ในเซลล์การเลียนแบบบทบาทคล้ายสี่เหลี่ยมขนมเปียกปูน proteases จากสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม apicomplexan และระบบ อย่างไรก็ตาม ehrom1 การกลายพันธุ์และ ehrom1 ปรสิต downregulation มีฟีโนไทป์ต่างกัน erythrophagocytosis ในขณะที่กว่าต้านทาน ได้รับผลกระทบ ทั้งเมื่อย โดยสรุป การศึกษานี้เราจัดการทั้งหมด 12 ตัวอย่างพันธุกรรมเช่นปีกโปร ehrom1 โดยสองวิธีที่แตกต่างกันและระบุในทํานองเดียวกัน การเกิด โดยทั้งสองวิธีแนะนำบทบาทใหม่สำหรับ ehrom1 ในเกี่ยวกับตัวอะมีบาที่เหมาะสม