Deficiency of glucose-6-phosphate d

Deficiency of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) is an X-linked hereditary genetic defect that is the most
common polymorphism and enzymopathy in humans. To investigate functional properties of two clinical variants,
G6PDViangchan and G6PDViangchan + Mahidol, these two mutants were created by overlap-extension PCR, expressed in
Escherichia coli and purified to homogeneity. We describe an overexpression and purification method to obtain sub-
stantial amounts of functionally active protein. The KM for G6P of the two variants was comparable to the KM of the
native enzyme, whereas the KM for NADP+ was increased 5-fold for G6PDViangchan and 8-fold for
G6PDViangchan + Mahidol when compared with the native enzyme. Additionally, kcat of the mutant enzymes was mark-
edly reduced, resulting in a 10- and 18-fold reduction in catalytic efficiency for NADP+ catalysis for G6PDViangchan
and G6PDViangchan + Mahidol, respectively. Furthermore, the two variants demonstrated significant reduction in ther-
mostability, but similar susceptibility to trypsin digestion, when compared with the wild-type enzyme. The pres-
ence of NADP+ is shown to improve the stability of G6PD enzymes. This is the first report indicating that protein
instability and reduced catalytic efficiency are responsible for the reduced catalytic activity of G6PDViangchan and
G6PDViangchan + Mahidol and, as a consequence, contribute to the clinical phenotypes of these two clinical variants.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ร่างกายขาดกลูโคส-6-ฟอสเฟตพร่อง (G6PD) เป็นการเชื่อมโยง X ทางพันธุกรรมบกพร่องทางกรรมพันธุ์ที่มีมากที่สุดทั่วไปแตกต่างและ enzymopathy ในมนุษย์ การตรวจสอบการทำงานคุณสมบัติของสองสายพันธุ์ทางการแพทย์G6PDViangchan และ G6PDViangchan + มหิดล การกลายพันธุ์ที่สองเหล่านี้สร้างขึ้น โดยนามสกุลทับซ้อน PCR แสดงในEscherichia coli และบริสุทธิ์ไปเนื้อเดียวกัน เราอธิบายวิธีการแสดงออกและทำให้บริสุทธิ์การย่อย-ยอดเงิน stantial ของโปรตีนใช้งานตามหน้าที่ กม.สำหรับ G6P ของสองสายพันธุ์มาเทียบเคียงกม.ของการเจ้าของเอนไซม์ ในขณะที่กม.สำหรับ NADP + เพิ่ม 5-fold สำหรับ G6PDViangchan และ 8-fold สำหรับG6PDViangchan + มหิดลเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์ดั้งเดิม นอกจากนี้ kcat ของเอนไซม์กลายพันธุ์เป็นเครื่องหมาย-edly ลดลง ส่งผลให้ลด fold 10 และ 18 ในประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับปฏิกิริยา NADP + สำหรับ G6PDViangchanและ G6PDViangchan + มหิดล ตามลำดับ นอกจากนี้ ตัวแปรที่สองแสดงให้เห็นในเธอ-mostability แต่ง่ายคล้ายทริปซินย่อย เมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์แบบธรรมชาติ เค้น-ence ของ NADP + จะแสดงการปรับปรุงเสถียรภาพของเอนไซม์ G6PD นี่เป็นรายงานแรกที่บ่งชี้ว่า โปรตีนความไม่มีเสถียรภาพและประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยาลดลงต้องรับผิดชอบกิจกรรมการเร่งปฏิกิริยาการลดลงของ G6PDViangchan และG6PDViangchan + มหิดลและ เป็นผล ไทป์ทางคลินิกของคลินิกต่าง ๆ 2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขาดกลูโคส -6- ฟอสเฟต dehydrogenase (G6PD) เป็นข้อบกพร่องทางพันธุกรรม X-เชื่อมโยงทางพันธุกรรมที่เป็นส่วนใหญ่ที่
มีหลายรูปแบบที่พบบ่อยและ enzymopathy ในมนุษย์ เพื่อตรวจสอบคุณสมบัติการทำงานของทั้งสองสายพันธุ์คลินิก
G6PDViangchan และ G6PDViangchan + มหิดลทั้งสองกลายพันธุ์ถูกสร้างขึ้นโดยทับซ้อนขยาย PCR แสดงออกใน
Escherichia coli และบริสุทธิ์จะเป็นเนื้อเดียวกัน เราอธิบายแสดงออกและการทำให้บริสุทธิ์วิธีการที่จะได้รับย่อย
จำนวน stantial ของโปรตีนที่ใช้งานตามหน้าที่ กมสำหรับ G6P ของทั้งสองสายพันธุ์คือเปรียบได้กับ KM ของ
เอนไซม์พื้นเมืองในขณะที่กม NADP + เพิ่มขึ้น 5 เท่าสำหรับ G6PDViangchan และ 8 เท่าสำหรับ
G6PDViangchan + มหิดลเมื่อเปรียบเทียบกับการทำงานของเอนไซม์พื้นเมือง นอกจากนี้ kcat ของเอนไซม์กลายพันธุ์ได้รับการ mark-
ลด edly ส่งผลในการลด 10- และ 18 เท่าในประสิทธิภาพการใช้ตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับ NADP + เร่งปฏิกิริยาสำหรับ G6PDViangchan
และ G6PDViangchan + มหิดลตามลำดับ นอกจากนี้ทั้งสองสายพันธุ์ที่แสดงให้เห็นถึงการลดลงอย่างมีนัยสำคัญใน ther-
mostability แต่อ่อนแอคล้ายกับการย่อยอาหาร trypsin เมื่อเทียบกับเอนไซม์ชนิดป่า ดัน
ence ของ NADP + แสดงให้เห็นเพื่อปรับปรุงเสถียรภาพของเอนไซม์ G6PD รายงานนี้เป็นรายงานแรกที่แสดงให้เห็นว่าโปรตีน
ความไม่แน่นอนและการลดประสิทธิภาพการเร่งปฏิกิริยามีความรับผิดชอบในการเร่งปฏิกิริยาที่ลดลงของ G6PDViangchan และ
G6PDViangchan + มหิดลและเป็นผลให้นำไปสู่การ phenotypes ทางคลินิกของทั้งสองสายพันธุ์ทางคลินิก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขาด glucose-6-phosphate dehydrogenase ( G6PD ) เป็น x-linked กรรมพันธุ์พันธุกรรมบกพร่องที่สำคัญที่สุด- enzymopathy ทั่วไปและในมนุษย์ เพื่อศึกษาคุณสมบัติของคลินิกสองตัวแปรและ g6pdviangchan g6pdviangchan + มหิดล ทั้งสองสายพันธุ์ ที่ถูกสร้างขึ้นโดยวิธี PCR และนามสกุลซ้อนกันและวิธีการแยกเชื้อ Escherichia coli . เราอธิบายเป็น overexpression และวิธีการขอรับซับ - บำบัดน้ำเสียติดอยู่ stantial ปริมาณของโปรตีน กิโลเมตรสำหรับ g6p ของทั้งสองสายพันธุ์ คือ เปรียบกับ km จากพื้นเมืองของเอนไซม์ ส่วนกม. nadp + ถูกผู้อื่นมากขึ้นและ g6pdviangchan 8-fold สำหรับg6pdviangchan + มหิดลเมื่อเทียบกับเอนไซม์ดั้งเดิม นอกจากนี้ kcat กลายพันธุ์ของเครื่องหมาย - คือedly ลดลงส่งผลให้ 10 - 18 พับลดประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับปฏิกิริยา nadp g6pdviangchan + สำหรับและ g6pdviangchan + มหิดลตามลำดับ นอกจากนี้ สองตัวแปร ) ลดลงในชาย -mostability แต่คล้ายกันเกิดการย่อยเอนไซม์ เมื่อเทียบกับของเอนไซม์ ท่านประธาน -อิทธิพล ( ของ nadp + แสดงการปรับปรุงเสถียรภาพของเอ็นไซม์ G6PD . นี่เป็นครั้งแรกที่รายงานระบุว่าโปรตีนเสถียรภาพและลดประสิทธิภาพการรับผิดชอบเพื่อลดความว่องไวของ g6pdviangchan และg6pdviangchan + มหิดล และเป็นผลให้เกิดทางคลินิกของทั้งสองพันธุ์