At the appropriate time, rats were

At the appropriate time, rats were rapidly euthanized for tissue
collection. The whole brain was removed, split sagitally, and placed
immediately on dry ice. Trunk blood was collected in heparinized tubes,
spunat 1000 g for 10 min, andRBCs were collected. After addition of 0.1M
NaPO4, pH 8.0/1.0% Triton buffer at a 1:2 dilution (1 part plus 2 parts), the
RBC tubes were placed in dry ice. Tissues were stored at−80 °C until the
day of assay.
2.4. Cholinesterase assay
A radiometric assay was used to determine brain and RBC
cholinesterase (ChE) activity, based on the method of Johnson and
Russell (1975) and as previously described (Moser et al., 2005). On
the day of assay, brains were homogenized on ice in 0.1 M sodium
phosphate buffer (pH 8.0) with 1% Triton X-100 at a 1:2 dilution. The
acetylcholine (final concentration 1.2 mM) hydrolysis reaction took
place in a water bath at 26 °C; incubation times were 30 s for brain
and 2 min for RBC. Following addition of scintillant, the reaction vials
were shaken to allow extraction of the labeled [3H] acetate, and [3H]
activity was counted within a few hours in a Beckman scintillation
counter (model LS6000LL, Fullerton, CA). All samples were run in
duplicate; duplicates N20% apart were not used. Negative values after
blank subtraction were set to zero.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในเวลาที่เหมาะสม หนูได้อย่างรวดเร็ว euthanized ในเนื้อเยื่อคอลเลกชัน สมองทั้งหมดถูกลบออก แยก sagitally และวางทันทีในน้ำแข็งแห้ง ลำตัวเลือดถูกรวบรวมใน heparinized หลอดspunat 1000 กรัมสำหรับ 10 นาที andRBCs ถูกเก็บรวบรวม หลังจากเพิ่ม 0.1MNaPO4, pH 8.0/1.0% ไตรตั้นบัฟเฟอร์ที่เจือจาง 1:2 (ส่วนที่ 1 และ 2 ส่วน), การหลอด RBC ถูกวางในน้ำแข็งแห้ง เนื้อเยื่อที่เก็บ at−80 ° C จนถึงการวันทดสอบ2.4 cholinesterase assayทดสอบนับถูกใช้เพื่อกำหนดสมองและ RBC(ChE) นเอส ตามวิธีการของ Johnson และรัสเซล (1975) และได้เคย อธิบายไว้ (โม et al., 2005) บนวันทดสอบ สมองถูก homogenized เป็นกลุ่มบนน้ำแข็งในโซเดียม 0.1 Mฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 8.0) 1% ไตรตั้น X 100 ที่เจือจาง 1:2 ที่acetylcholine (ความเข้มข้นสุดท้าย 1.2 mM) เอาไฮโตรไลซ์ปฏิกิริยาใส่ในอ่างน้ำที่ 26 ° C คณะทันตแพทยศาสตร์ครั้ง 30 s สำหรับสมองและ นาที 2 สำหรับ RBC แห่ง scintillant, vials ปฏิกิริยาต่อไปนี้ถูกเขย่าให้แยกป้าย acetate [3H] และ [3H]กิจกรรมตรวจนับได้ภายในกี่ชั่วโมงใน Beckman scintillationเคาน์เตอร์ (รุ่น LS6000LL ฟูลเลอร์ตัน CA) ตัวอย่างทั้งหมดถูกเรียกใช้ในซ้ำ ไม่ได้ใช้ซ้ำ N20% ห่างกัน ค่าลบหลังจากว่างเปล่าลบถูกกำหนดเป็นศูนย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในเวลาที่เหมาะสมหนูถูก euthanized
อย่างรวดเร็วสำหรับเนื้อเยื่อคอลเลกชัน สมองทั้งหมดถูกลบออกแยก sagitally
และวางทันทีในน้ำแข็งแห้ง เลือดลำต้นถูกเก็บรวบรวมไว้ในหลอด heparinized,
spunat 1,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที, andRBCs ถูกเก็บรวบรวม หลังจากที่นอกเหนือจาก 0.1M
NaPO4 ค่า pH 8.0 / 1.0% บัฟเฟอร์ไทรทันที่ 1: 2 เจือจาง (ส่วนที่ 1 บวก 2 ส่วน)
ที่หลอดRBC ถูกวางไว้ในน้ำแข็งแห้ง เนื้อเยื่อที่ถูกเก็บไว้ที่ -80
องศาเซลเซียสจนถึงวันที่มีการทดสอบ.
2.4 ทดสอบ Cholinesterase
ทดสอบ radiometric ถูกใช้ในการตรวจสอบของสมองและ RBC
ที่แท้จริงของเอนไซม์ (สกอ) กิจกรรมขึ้นอยู่กับวิธีการของจอห์นสันและรัสเซล (1975) และในขณะที่อธิบายไว้ก่อนหน้า (Moser et al., 2005)
ในวันที่มีการทดสอบที่สมองถูกปั่นบนน้ำแข็งใน 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์(pH 8.0) 1% Triton X-100 ที่ 1: 2 เจือจาง acetylcholine (ความเข้มข้นสุดท้าย 1.2 มิลลิ) ปฏิกิริยาไฮโดรไลซิเอาสถานที่ในอ่างน้ำที่26 ° C; เวลาฟักตัวเป็น 30 วินาทีสำหรับสมองและ2 นาทีสำหรับ RBC ต่อไปนี้การเพิ่มขึ้นของ scintillant, ขวดปฏิกิริยาถูกเขย่าเพื่อให้การสกัดที่มีข้อความ[3H] อะซิเตทและ [3H] กิจกรรมนับภายในไม่กี่ชั่วโมงในเบคค์ประกายเคาน์เตอร์ (LS6000LL รุ่น Fullerton, CA) ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการทำงานในที่ซ้ำกัน; ซ้ำ N20% ออกจากกันไม่ได้ใช้ ค่าลบหลังจากลบว่างเปล่าถูกกำหนดให้เป็นศูนย์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในเวลาที่เหมาะสม , หนู euthanized อย่างรวดเร็วเก็บเนื้อเยื่อ

ทั้งสมองถูกแบ่ง sagitally และวางไว้
ทันทีในน้ำแข็งแห้ง เลือดรถเก็บข้อมูลในกลุ่มหลอด
spunat 1000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที andrbcs ถูกเก็บ หลังจากเพิ่ม 0.1m
napo4 บัฟเฟอร์ pH 8.0 / 1.0 % Triton ที่เจือจาง 1 : 2 ( บวก 1 ส่วน 2 ส่วน )
RBC หลอดไว้ในน้ำแข็งแห้งเนื้อเยื่อที่อุณหภูมิ 80 องศา C −จนถึงวัน

( . . . 2.4 . โคลีนเอสเตอเรสในวิธีของการศึกษาสมองและ RBC cholinesterase
( CHE ) กิจกรรมตามวิธีการของ จอห์นสัน และ
รัสเซล ( 1975 ) และตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( โมเซอร์ et al . , 2005 ) บน
วันวิเคราะห์สมองถูกบดน้ำแข็งใน 0.1 โมลาร์โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 8.0 )
1 % Triton X-100 ที่ 12 เจือจาง
acetylcholine ( สุดท้ายความเข้มข้น 1.2 มม. ) ปฏิกิริยาไฮโดรไลซิสเอา
สถานที่อาบน้ำที่ 26 องศา C ; บ่มเวลา 30 วินาที และ 2 นาทีสมอง
RBC . ต่อไปนี้เพิ่ม scintillant ปฏิกิริยาขวด
สั่นสะเทือนอนุญาตการสกัดข้อความ [ 3 ] , และ [ 3 ]
ก็นับว่ากิจกรรมภายในไม่กี่ชั่วโมงในเคาน์เตอร์ข้อมูล
เบคแมน ( แบบ ls6000ll - , ,แคลิฟอร์เนีย ) ตัวอย่างทั้งหมดจะถูกเรียกใช้ในที่ซ้ำกันซ้ำกัน 20 %
; ไม่ได้ใช้ ค่านิยมเชิงลบหลังจากลบว่าง
ตั้งศูนย์