2.4. SDS–polyacrylamide gel electro

2.4. SDS–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE)
SDS–PAGE was performed following the method of Laemmli
[34] with slight modifications, using 7.5% separating and 5% stacking
gel. Collagen sample was dissolved in sample buffer and
obtained mixture (1.5 mg/1 ml) was heated at 95 ◦C for 5 min. The
mixture was centrifuged at 4000 rpm for 5 min using micro centrifuge
at room temperature to remove debits. 10 g of sample was
loaded on to polyacrylamide gel and subjected to electrophoresis
at a constant current (15 mA/gel) for 1 h and 30 min using Mini
Protein II unit (Bio-Rad Laboratories, Inc., Richmond, CA, USA).
Resultant gel was stained with 0.05% (w/v) Coomassie blue R-
250 in 15% (v/v) methanol and 5% (v/v) acetic acid for 4 h and
destained with 30% (v/v) methanol and 10% (v/v) acetic acid.
High MW markers were loaded alongside the collagen to estimate
the molecular weight of collagen and porcine skin type
I collagen was loaded next to protein marker as a standard
collagen.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. SDS – polyacrylamide เจอิ (SDS – หน้า)มีดำเนินการตามวิธีการของ Laemmli SDS – หน้า[34] ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ใช้แยก 7.5% และ 5% ซ้อนเจ ตัวอย่างคอลลาเจนที่ละลายในบัฟเฟอร์ตัวอย่าง และส่วนผสมที่ได้รับ (1.5 มิลลิกรัมต่อ 1 มิลลิลิตร) ถูกความร้อนที่ 95 ◦C สำหรับ 5 นาทีในส่วนผสมถูกเหวี่ยงที่ 4000 rpm 5 นาทีใช้เหวี่ยงไมโครที่อุณหภูมิห้องเพื่อเอาเดบิต มีตัวอย่าง 10 กรัมโหลดไป polyacrylamide เจล และหักอิณ ปัจจุบันคง (15 mA เจล) 1 ชั่วโมง และ 30 นาทีใช้มินิโปรตีน II หน่วย (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad, Inc. ริชมอนด์ CA, USA)เจผลลัพธ์ถูกย้อม ด้วย 0.05% (w/v) สี Coomassie R-250 ใน 15% (v/v) เมทานอลและกรดอะซิติก 5% (v/v) สำหรับ 4 h และdestained กับเมทานอล 30% (v/v) และกรดอะซิติก 10% (v/v)เครื่องหมาย MW สูงถูกโหลดควบคู่กับคอลลาเจนในการประเมินน้ำหนักโมเลกุลของคอลลาเจนและผิว porcineผมคอลลาเจนถูกโหลดอยู่ถัดจากเครื่องหมายโปรตีนเป็นมาตรฐานคอลลาเจน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ระบบ SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)
ระบบ SDS-PAGE ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้วิธีการ Laemmli
[34] มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยใช้แยก 7.5% และ 5% ซ้อน
เจล ตัวอย่างคอลลาเจนถูกละลายในบัฟเฟอร์ตัวอย่างและ
ได้รับสารผสม (1.5 มก. / 1 มล.) ที่ถูกความร้อนที่ 95 ◦Cเป็นเวลา 5 นาที
ส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 4000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้เครื่องหมุนเหวี่ยงขนาดเล็ก
ที่อุณหภูมิห้องเพื่อเอาเดบิต 10 กรัมของกลุ่มตัวอย่างได้รับการ
โหลดในเจลอะคริเลตและยัดเยียดให้ electrophoresis
ที่คงที่ในปัจจุบัน (15 mA / เจล) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและ 30 นาทีโดยใช้มินิ
โปรตีน II หน่วย (Bio-Rad Laboratories, Inc ริชมอนด์, CA, USA) .
เจลผลลัพธ์ที่ถูกย้อมด้วยสี 0.05% (w / v) Coomassie สีฟ้า R-
250 ใน 15% (v / v) เมทานอลและ 5% (v / v) กรดอะซิติกสำหรับ 4 ชั่วโมงและ
destained กับ 30% (v / v) เมทานอลและ 10% (v / v) กรดอะซิติก.
เครื่องหมายเมกะวัตต์สูงถูกโหลดควบคู่ไปกับคอลลาเจนเพื่อประเมิน
น้ำหนักโมเลกุลของคอลลาเจนและสุกรประเภทของผิว
ผมคอลลาเจนถูกโหลดติดกับเครื่องหมายโปรตีนเป็นมาตรฐาน
คอลลาเจน