2. Materials and methods2.1. Bacter

2. Materials and methods
2.1. Bacterial cultures
In this study, Bacillus licheniformis NBRC 12195 (from now abbreviated as B. licheniformis) and Lactobacillus paracasei subsp.paracasei NBRC 15889 (from now abbreviated as L. paracasei) were used to represent Bacillus species which are one of the most detected spoilage bacteria in raw milk (White, 2001) and lactic acid bacteria which are commonly present in dairy products (Mayra-Makinen & Bigret, 2004), respectively. These strains were obtained from the collection of National Institute of Technology and Evaluation, Biological Resource Center (NBRC), Japan. B. licheniformis was aerobically grown in nutrition agar (NA) medium (polypepton, 10.0 g; yeast extract, 2.0 g; MgSO4.7H2O,
1.0 g; agar, 15.0 g; distilled water, 1000 ml; pH 7.0). L. paracasei was anaerobically grown in de Man, Rogosa and Sharp medium (MRS agar or broth, Merck, Germany). These bacteria were incubated at 30
C for 48 h in correspondent growth agar plates. Anaerobic conditions were created in a parafilm-sealed plastic box using oxygen-absorbing and carbon dioxide-generating agents (Anaero-Pack-MicroAero, Mitsubishi Gas Chemical Co., Inc). Cells were harvested by spreaders and then suspended in correspondent growth media. After being reincubated at 30
C for 48 h, they were
removed from growth suspensions and washed twice with water.The cells were pelleted by centrifugation (3000 rpm, 10 min, and 4
C). Obtained bacteria were resuspended in sterile distilled water at an initial concentration of about 108e109 colony forming unit per milliliter (CFU/ml). Thiswas done by adjusting the optical density of the suspension to a previously calculated absorbance at 600 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. แบคทีเรียวัฒนธรรมในการศึกษานี้ คัด licheniformis NBRC 12195 (จากนี้ย่อเป็น licheniformis เกิด) และแลคโตบาซิลลัส paracasei subsp.paracasei NBRC 15889 (จากนี้ย่อเป็น L. paracasei) ใช้เพื่อแสดงสายพันธุ์คัดซึ่งเป็นของตรวจพบแบคทีเรียเน่าเสียในน้ำนมดิบ (สีขาว 2001) และแบคทีเรียกรดแลกติกซึ่งโดยทั่วไปมีอยู่ในนม (Mayra Makinen & Bigret, 2004), ตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ได้รับมาจากชุดของสถาบัน เทคโนโลยีแห่งชาติ และการประเมินผล ศูนย์ทรัพยากรชีวภาพ (NBRC) ญี่ปุ่น Licheniformis เกิดถูกปลูกในโภชนาการ agar (NA) ปานกลาง (polypepton, 10.0 g สารสกัดจากยีสต์ 2.0 g; aerobically MgSO4.7H2O1.0 g agar, 15.0 g น้ำกลั่น 1000 ml pH 7.0) L. paracasei ถูก anaerobically โตเดอแมน Rogosa และคมชัดปานกลาง (MRS agar หรือซุป เมอร์ค เยอรมนี) แบคทีเรียเหล่านี้ถูก incubated ที่ 30 C สำหรับ h 48 ในแผ่น agar เติบโตผู้สื่อข่าว มีสร้างเงื่อนไขไม่ใช้ในการปิดผนึก parafilm กล่องพลาสติกใช้แทน ดูดออกซิเจน และสร้างก๊าซคาร์บอนไดออกไซด์ (Anaero ชุด MicroAero มิตซูบิชิแก๊สเคมี Co., Inc) เซลล์เก็บเกี่ยว โดย spreaders และหยุดชั่วคราวแล้ว เจริญเติบโตของผู้สื่อข่าวสื่อ หลังจากที่ reincubated ที่ 30 C สำหรับ 48 h พวกเขาลบออกจากบริการเจริญเติบโต และล้าง ด้วยน้ำสองครั้งเซลล์ได้ pelleted โดย centrifugation (3000 รอบต่อนาที 10 นาที และ 4 C) แบคทีเรียได้รับถูก resuspended ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อที่มีความเข้มข้นเริ่มต้นของเกี่ยวกับอาณานิคม 108e109 เป็นหน่วยละ milliliter (CFU/ml) Thiswas ด้วยความหนาแน่นออปติคัลของระงับการ absorbance ที่คำนวณไว้ก่อนหน้านี้ที่ 600 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัฒนธรรมแบคทีเรีย
ในการศึกษานี้ Bacillus licheniformis NBRC 12195 (จากยากในขณะนี้ B. licheniformis) และแลคโตบาซิลลัส paracasei subsp.paracasei NBRC 15889 (จากยากในขณะนี้ลิตร paracasei) ถูกนำมาใช้เพื่อเป็นตัวแทนของสายพันธุ์ Bacillus ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของการเน่าเสียที่ตรวจพบมากที่สุด แบคทีเรียในน้ำนมดิบ (สีขาว, 2001) และกรดแลคติกแบคทีเรียที่มีอยู่ทั่วไปในผลิตภัณฑ์นม (Mayra-Makinen & Bigret, 2004) ตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ได้มาจากการเก็บเงินจากสถาบันเทคโนโลยีแห่งชาติและการประเมินผลทางชีวภาพ Resource Center (NBRC), ญี่ปุ่น B. licheniformis โตออกซิเจนในอาหารเลี้ยงเชื้อโภชนาการ (NA) ปานกลาง (polypepton 10.0 กรัมสารสกัดจากยีสต์ 2.0 กรัม; MgSO4.7H2O,
1.0 กรัมวุ้น 15.0 กรัมน้ำกลั่น 1000 ml; pH 7.0) L. paracasei ปลูกแบบไม่ใช้อากาศในแมน Rogosa และชาร์ปกลาง (MRS agar หรือน้ำซุป, เมอร์ค, เยอรมนี) แบคทีเรียเหล่านี้ไปบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงในจานอาหารเลี้ยงเชื้อเจริญเติบโตของผู้สื่อข่าว สภาวะไร้ออกซิเจนถูกสร้างขึ้นในกล่องพลาสติก parafilm ปิดผนึกโดยใช้ก๊าซที่ก่อให้เกิดตัวแทนออกซิเจนดูดซับและคาร์บอนไดออกไซด์ (Anaero แพ็ค-MicroAero มิตซูบิชิ Gas Chemical Co. , Inc) เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวด้วยปุ๋ยคอกแล้วที่ลอยอยู่ในสื่อการเจริญเติบโตของผู้สื่อข่าว หลังจากได้รับการ reincubated วันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงพวกเขาถูก
ลบออกจากสนองการเจริญเติบโตและการล้างครั้งที่สองกับเซลล์ water.The ถูกเม็ดโดยการหมุนเหวี่ยง (3000 รอบต่อนาที, 10 นาทีและ 4 องศาเซลเซียส) แบคทีเรียที่ได้มา resuspended ในน้ำกลั่นปลอดเชื้อที่ความเข้มข้นเริ่มต้นประมาณ 108e109 โคโลนีต่อมิลลิลิตร (CFU / ml) Thiswas ทำได้โดยการปรับความหนาแน่นของแสงการระงับการดูดกลืนแสงคำนวณก่อนหน้านี้ที่ 600 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 .
วัฒนธรรมแบคทีเรียในการศึกษา , Bacillus licheniformis nbrc 12195 ( ตอนนี้ย่อเป็น B . licheniformis ) และแลคโตบาซิลัส paracasei subsp.paracasei nbrc 15889 ( ตอนนี้ย่อเป็นลิตร paracasei ) เพื่อใช้เป็นตัวแทนของ Bacillus สายพันธุ์ซึ่งเป็นหนึ่งในที่สุดที่ตรวจพบเชื้อแบคทีเรียที่ทำให้เกิดการเน่าเสียในน้ำนมดิบ ( สีขาว2544 ) และแบคทีเรียกรดแลคติก ซึ่งมักอยู่ในนม ( เมย์แมคิเนิ่น& bigret , 2004 ) ตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ได้มาจากคอลเลกชันของสถาบันเทคโนโลยีและการประเมินผลศูนย์ทรัพยากรชีวภาพ ( nbrc ) , ญี่ปุ่น B . licheniformis เป็น aerobically โตในอาหารโภชนาการ ( na ) ขนาดกลาง ( polypepton , 10.0 กรัม ; สารสกัดจากยีสต์ 2.0 G ;
mgso4.7h2o 1.0 g ; ,วุ้น , 15.0 g ; น้ำกลั่น , 1000 ml ; pH 7.0 ) ล. พ paracasei คือปลูกใน เดอ ชาย rogosa แหลมและกลาง ( นางวุ้นหรือน้ำซุป เมอร์ค เยอรมนี ) แบคทีเรียเหล่านี้ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง ผู้สื่อข่าว
การเจริญเติบโตวุ้นแผ่น สภาวะอากาศถูกสร้างขึ้นในพาราฟิล์มปิดผนึกกล่องพลาสติกที่ใช้ดูดซับออกซิเจนและคาร์บอนไดออกไซด์สร้างตัวแทน ( anaero microaero แพ็ค ,มิตซูบิชิแก๊ส Chemical Co . , Inc ) เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดย Spreaders และระงับการเจริญเติบโตในสื่อนักข่าว . หลังจากถูก reincubated 30
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง พวกเขา
ลบออกจากสารแขวนลอยการเจริญเติบโตและล้างซ้ำด้วยน้ำ เซลล์มีเม็ดโดยการเหวี่ยงแยก ( 3000 รอบต่อนาที 10 นาที และ 4
C )ได้รับ resuspended ปลอดเชื้อแบคทีเรียถูกในน้ำกลั่นที่ความเข้มข้นเริ่มต้นของเรื่อง 108e109 อาณานิคมสร้างหน่วยต่อมิลลิลิตร ( CFU / ml ) หลังจากนั้นจะทำโดยการปรับความหนาแน่นของแสงของช่วงล่าง เพื่อคำนวณค่าเดิมที่ 600 นาโนเมตร