How many cells per well should I us

How many cells per well should I use in ELISpot?
The number of cells in each well must be adjusted to the cell type and the expected frequency of the secreting cells. If the frequency is very low, e.g. 1 in 10,000 cells, a higher number of cells is needed, often around 250,000 cells/well. When the frequency of secreting cells is high, e.g 1 in 10 cells, around 5,000 cells/well are sufficient. Cell numbers do not always show linearity in the assays due to the need for optimal cell-to-cell contact with e.g. antigen-presenting cells for sufficient stimulation. When analyzing antigen-specific T-cells, PBMC should not be below 200,000 cells per well.

We generally do not recommend to use more than 500,000 cells/well since this may create multiple cell layers which, in turn, can result in reduced spot quality due to the increased distance between cells and the ELISpot membrane.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ฉันควรใช้กี่เซลล์ต่อใน ELISpotจำนวนของเซลล์ในแต่ละดีต้องปรับชนิดของเซลล์และความถี่ที่คาดไว้ของเซลล์ secreting ถ้าความถี่ต่ำมาก เช่น 1 ใน 10,000 เซลล์ ของเซลล์จำเป็น มักจะประมาณ 250,000 เซลล์/ดี เมื่อความถี่ของการซ่อนเซลล์สูง เช่น 1 ใน 10 เซลล์ ประมาณ 5,000 เซลล์/ดีเป็นพอ เซลล์ตัวเลขเสมอแสดงเป็นเชิงเส้นใน assays เนื่องจากต้องติดต่อเซลล์ไปยังเซลล์ที่เหมาะสมเช่นนำเสนอ antigen เซลล์สำหรับกระตุ้นเพียงพอ เมื่อวิเคราะห์เฉพาะ antigen T เซลล์ PBMC ไม่ควรต่ำกว่า 200,000 เซลล์ต่อเราโดยทั่วไปไม่แนะนำให้ใช้มากกว่า 500,000 เซลล์/ดีเนื่องนี้อาจสร้างเซลล์หลายชั้นซึ่ง จะ อาจส่งผลให้คุณภาพจุดลดลงเนื่องจากระยะห่างระหว่างเซลล์เมมเบรน ELISpot เพิ่มขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการหลายเซลล์ต่อกันฉันควรใช้ใน ELISPOT?
จำนวนของเซลล์ในแต่ละดีต้องได้รับการปรับให้เซลล์ชนิดและความถี่ที่คาดหวังของเซลล์หลั่ง ถ้าความถี่ต่ำมากเช่น 1 ใน 10,000 เซลล์จำนวนที่สูงขึ้นของเซลล์เป็นสิ่งจำเป็นมักรอบ 250,000 เซลล์ / ดี เมื่อความถี่ของเซลล์หลั่งอยู่ในระดับสูงเช่น 1 ใน 10 เซลล์ประมาณ 5,000 เซลล์ / ดีเพียงพอ จำนวนเซลล์ไม่เคยแสดงให้เห็นเป็นเส้นตรงในการตรวจเนื่องจากความต้องการสำหรับเซลล์ไปยังเซลล์ที่ดีที่สุดที่มีการติดต่อเช่นเซลล์แอนติเจนการนำเสนอสำหรับการกระตุ้นเพียงพอ เมื่อวิเคราะห์แอนติเจนเฉพาะ T-เซลล์ PBMC ไม่ควรจะต่ำกว่า 200,000 เซลล์ต่อกัน. โดยทั่วไปเราไม่แนะนำให้ใช้มากกว่า 500,000 เซลล์ / ดีตั้งแต่นี้อาจสร้างเซลล์ชั้นหลายที่ในที่สุดก็จะส่งผลให้คุณภาพจุดลดลง เนื่องจากระยะทางที่เพิ่มขึ้นระหว่างเซลล์และเยื่อ ELISPOT

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการหลายเซลล์ต่อก็ควรจะใช้ในอีไลสปอท ?จำนวนเซลล์ในแต่ละก็ต้องปรับให้เซลล์ชนิดและความถี่ของการหลั่งโดยเซลล์ ถ้าความถี่ต่ำมากๆ เช่น 1 ใน 10 , 000 เซลล์ , ปริมาณเซลล์เป็นเซลล์มักจะประมาณ 250 , 000 / ดี เมื่อความถี่ของ secreting เซลล์สูง เช่น 1 ใน 10 เซลล์ ประมาณ 5 , 000 เซลล์ / ดีเพียงพอ เบอร์มือถือไม่เสมอแสดงถึงในหรือเนื่องจากต้องการค่าเซลล์ เช่น เซลล์ที่ติดต่อด้วย antigen-presenting กระตุ้นที่เพียงพอ เมื่อวิเคราะห์ antigen-specific ทีเซลล์ขาว ไม่ควรต่ำกว่า 200000 เซลล์ต่อดีโดยทั่วไป เราไม่แนะนำให้ใช้มากกว่า 500000 เซลล์ / ตั้งแต่นี้อาจสร้างเซลล์หลายชั้น ซึ่งในที่สุดจะส่งผลในการลดจุดที่มีคุณภาพเนื่องจากการเพิ่มระยะห่างระหว่างเซลล์และเมมเบรนอีไลสปอท .