For a malate dehydrogenase assay, s

For a malate dehydrogenase assay, samples (5 ml) of cultures in-
cubated for 25 h in the growth medium and for up to 35 h in the
production medium were prepared as previously described (Pines
et al. 1996).
For the determination of the kinetic parameters of MDH2, cells
harboring plasmid pGAL-MDH were broken by a French press (83
MPa) and centrifuged at 12 000 ´ g for 10 min at 4 oC. Protamine
sulfate (50 ll/ml 2% solution) was added to cell extracts, which
were then incubated for 15 min and centrifuged. To the superna-
tant fraction, solid ammonium sulfate was added to a ®nal con-
centration of 75%. The pellet obtained was suspended in 50%
ammonium sulfate solution and the suspension was centrifuged to
obtain the supernatant fraction, which was used for the MDH2
assay.
Saccharomyces cerevisiae DMM1-15A cells were grown for 9 h
in galactose medium labeled with [35S]methionine and cell extracts
were prepared as previously described (Pines et al. 1996; Stein et al.
1994).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับการทดสอบ dehydrogenase มาลา ตัวอย่าง (5 ml) วัฒนธรรมในcubated h 25 ในการเจริญเติบโต และถึง 35 h ในการผลิตสื่อเตรียมไว้เป็นก่อนหน้านี้อธิบาย (ไพน์ร้อยเอ็ด al. 1996)สำหรับการกำหนดพารามิเตอร์เดิม ๆ ของ MDH2 เซลล์harboring plasmid pGAL MDH ถูกหัก โดยกดฝรั่งเศส (83บริษัทเอ็มพีเอ) และ centrifuged ที่ 12 000 ´ g สำหรับ 10 นาทีที่ 4 oC. Protamineซัลเฟต (50/ml จะ 2% โซลูชัน) ถูกเพิ่มไปยังเซลล์สารสกัดจาก ที่แล้ว incubated สำหรับ 15 นาที และ centrifuged กับ superna-tant เศษ เพิ่มการแข็งแอมโมเนียมซัลเฟตเป็น ® nal คอน -centration 75% เม็ดที่ได้ถูกหยุดชั่วคราวใน 50%แอมโมเนียมซัลเฟตโซลูชันและการระงับได้ centrifugedรับเศษ supernatant ซึ่งถูกใช้สำหรับการ MDH2วิเคราะห์Saccharomyces cerevisiae DMM1 15A เซลล์ที่โต 9 hกาแล็กโทสกลางป้ายกับ methionine [35S] และแยกเซลล์ถูกเตรียมเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ไพน์ et al. 1996 สไตน์ et al1994)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการทดสอบ malate dehydrogenase ตัวอย่าง (5 ml) ของวัฒนธรรม
In-cubated 25 ชั่วโมงในสื่อการเจริญเติบโตและได้นานถึง 35
ชั่วโมงในกลางการผลิตได้จัดทำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(ไพน์
et al. 1996).
สำหรับความมุ่งมั่นของ พารามิเตอร์การเคลื่อนไหวของ MDH2
เซลล์เก็บงำพลาสมิดpGAL-MDH ถูกทำลายโดยการกดฝรั่งเศส (83
MPa) และหมุนเหวี่ยงที่ 12 000 'กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส Protamine
ซัลเฟต (50 LL / มล. 2 การแก้ปัญหา%)
ถูกบันทึกอยู่ในสารสกัดจากเซลล์ซึ่งถูกบ่มแล้วเป็นเวลา15 นาทีและหมุนเหวี่ยง เพื่อ superna-
ส่วนสำา, แอมโมเนียมซัลเฟตที่เป็นของแข็งถูกเพิ่มให้กับทำา®nal
centration 75% เม็ดได้ถูกระงับใน 50%
วิธีการแก้ปัญหาแอมโมเนียมซัลเฟตและระงับถูกหมุนเหวี่ยงที่จะได้รับส่วนใสซึ่งถูกนำมาใช้สำหรับ MDH2 ทดสอบ. เซลล์ Saccharomyces cerevisiae DMM1-15A ปลูก 9 ชั่วโมงในสื่อกาแลคโตกำกับด้วย[35S] methionine และสารสกัดจากเซลล์ได้จัดทำตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(ไพน์ et al, 1996;.. สไตน์ et al, 1994)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับ malate dehydrogenase assay ตัวอย่าง ( 5 มล. ) ของโลก --
cubated 25 H ในการเจริญเติบโตปานกลาง และถึง 35 H ใน
การผลิตขนาดกลางเตรียมเป็นอธิบายไว้ก่อนหน้า ( ต้นสน
et al . 1996 ) .
สำหรับการหาค่าพารามิเตอร์จลน์ของ mdh2 เซลล์ที่ถูกทำลาย pgal
พลาสมิดชนิดโดยกดฝรั่งเศส ( 83
MPa ) และระดับที่ 12 000 ใหม่ G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส
โปรตามีนซัลเฟต ( 50 จะ / ml 2 % Solution ) เพิ่มสารสกัดเซลล์ซึ่ง
แล้วบ่ม 15 นาทีไฟฟ้า . การ superna -
ดังนั้นเศษส่วนแข็งแอมโมเนียมซัลเฟต คือเพิ่มเป็น®นัล คอน -
centration 75% เม็ดได้ถูกระงับใน 50 %
แอมโมเนียมซัลเฟต โซลูชั่น และระงับได้ระดับ

ขอรับ ส่วนสูง ซึ่งใช้สำหรับ mdh2

( . . .dmm1-15a Saccharomyces cerevisiae เซลล์มีการเจริญเติบโต
H 9 ในกาแลกโตสกลางป้ายชื่อ [ 35s ] เมทไธโอนีนและเซลล์สารสกัด
เตรียมตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( ไพน์ et al . 1996 ; Stein et al .
1994 )