2.9. HO-1 activity assayHO-1 activi

2.9. HO-1 activity assay
HO-1 activity was measured using the HO-1 ELISA kit (Assay designs, Ann Arbor,
MI, USA) according to the manufacturer’s instructions. In brief, RAW 264.7 cells
(1  106 cells/mL) were treated with galic extracts (0.1%), hemin (10 lM), allicin
(1 lg/mL), and/or LPS (1 lg/mL) for 8 h. Garlic extracts, hemin, and allicin were pretreated
2 h prior to LPS treatment. Cells were resuspended in the HO-1 extraction
reagent. The cell extracts were incubated for 30 min on ice and sonicated briefly,
and the extracts were centrifuged at 21000  g for 15 min in a 4C refrigerated
microfuge. The supernatants were used for analysis of HO-1 activity. The samples
and standards were added to each well of immunoassay plate and incubated for
1 h. After incubation, the samples and standards were washed, incubated with
HO-1 antibody (100 lL) for 1 h, washed, and then incubated with HO-1 conjugate
for 30 min. After washing, TMB substrate solution was added to each well and incubated
for 15 min at room temperature. The reaction was quenched by adding
100 lL of TMB stop solution, and the absorbance of the plates was read at
450 nm with a microplate reader (Molecular Devices). The activity was calculated
by comparing standard curve.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.9. ทดสอบกิจกรรมโฮจิมินห์-1กิจกรรม 1 โฮจิมินห์ถูกวัดโดยใช้ชุด ELISA โฮจิมินห์-1 (วิเคราะห์ออกแบบ Ann ArborMI สหรัฐอเมริกา) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในเซลล์ RAW 264.7 โดยย่อ(1 106 เซลล์/มล.) ได้รับการรักษา ด้วยสารสกัด galic (0.1%), hemin (10 lM), allicin(1 lg/มล.), หรือ LPS (1 lg/มล) h. 8 กระเทียมสารสกัด จาก hemin และ allicin มี pretreatedh 2 ก่อนรักษา LPS เซลล์ที่ถูก resuspended ในสกัดโฮจิมินห์-1รีเอเจนต์ เซลล์สารสกัดจาก incubated สำหรับ 30 นาทีบนน้ำแข็ง และ sonicated สั้น ๆและสารสกัดได้ centrifuged ที่ 21000 g สำหรับ 15 นาทีในการ C 4 รเออร์microfuge Supernatants ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์กิจกรรมโฮจิมินห์-1 ตัวอย่างและมีเพิ่มมาตรฐานแต่ละดี immunoassay จาน และ incubated สำหรับ1 h หลังจากคณะทันตแพทยศาสตร์ ตัวอย่างและมาตรฐานถูกล้าง incubated ด้วยโฮจิมินห์-1 แอนติบอดี (100 lL) สำหรับ 1 h ล้าง แล้ว incubated กับโฮจิมินห์-1 ค่าสังยุคสำหรับ 30 นาที หลังจากซักผ้า ทหารไทยแก้ปัญหาพื้นผิวถูกเพิ่มในแต่ละดี และ incubatedใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ปฏิกิริยาถูก quenched โดยเพิ่ม100 ของทหารไทยจะหยุดการแก้ไขปัญหา และ absorbance ของแผ่นไม่อ่านที่450 nm กับอ่าน microplate (โมเลกุลอุปกรณ์) มีคำนวณกิจกรรมโดยการเปรียบเทียบเส้นโค้งมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.9 กิจกรรมทดสอบ HO-1
กิจกรรม HO-1 วัดโดยใช้ชุด ELISA HO-1 (การออกแบบ Assay, Ann Arbor,
MI, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในช่วงสั้น ๆ RAW 264.7 เซลล์
(1? 106 เซลล์ / มิลลิลิตร) ได้รับการรักษาด้วยสารสกัดจาก Galic (0.1%) hemin (10 LM), อัลลิซิ
(1 LG / มิลลิลิตร) และ / หรือ LPS (1 LG / มิลลิลิตร) 8 ชั่วโมง สารสกัดจากกระเทียม hemin และอัลลิซิถูกปรับสภาพ
2 ชั่วโมงก่อนที่จะมีการรักษา LPS เซลล์ที่ถูก resuspended ในการสกัด HO-1
น้ำยา สารสกัดจากเซลล์ถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีบนน้ำแข็งและ sonicated สั้น ๆ
และสารสกัดจากถูกหมุนเหวี่ยงที่ 21,000 หรือไม่ กรัมเป็นเวลา 15 นาทีใน 4 องศาเซลเซียสในตู้เย็น
microfuge supernatants ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ของกิจกรรม HO-1 กลุ่มตัวอย่างและมาตรฐานที่ถูกเพิ่มเข้ากันของแผ่น immunoassay แต่ละคนและบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากการบ่มตัวอย่างและมาตรฐานถูกล้างที่บ่มกับแอนติบอดี HO-1 (100 LL) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงล้างและบ่มแล้วด้วยคอนจูเกต HO-1 เป็นเวลา 30 นาที หลังจากล้าง, การแก้ปัญหาพื้นผิวทหารไทยถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีและบ่มเป็นเวลา15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ปฏิกิริยาถูกดับโดยการเพิ่ม100 LL ของการแก้ปัญหาทหารไทยหยุดและการดูดกลืนแสงของแผ่นได้อ่านที่450 นาโนเมตรกับผู้อ่าน microplate (ที่โมเลกุลอุปกรณ์) กิจกรรมที่ได้รับการคำนวณโดยการเปรียบเทียบกราฟมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.9 . ho-1 กิจกรรม (
ho-1 กิจกรรมวัดโดยใช้ ho-1 ชุด ELISA ( วิเคราะห์ออกแบบ Ann Arbor
, MI , สหรัฐอเมริกา ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในช่วงสั้น ๆดิบ 264.7 เซลล์
( 1  106 เซลล์ / มิลลิลิตร ) ได้รับการรักษาด้วยสารสกัด Galic ( 0.1% ) , จาก ( LM ) สาร
( 1 ) ต่อมิลลิลิตร ) และ / หรือสเปรย์หล่อลื่น ( 1 ) / ml ) 8 . กระเทียม สารสกัด จาก และอัลลิซินก็ผ่าน
2 LPS H ก่อนการรักษาเซลล์มี resuspended ในการสกัดสารเคมี
ho-1 . เซลล์สารสกัดและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีบนน้ำแข็งและ sonicated สั้น
และสารสกัดเป็นระดับที่ 21000  G สำหรับ 15 นาทีใน 4  C ตู้เย็น
microfuge . การ supernatants วิเคราะห์กิจกรรม ho-1 . ตัวอย่าง
และมาตรฐานมีการเพิ่มของผู้ป่วยแต่ละจานสำหรับ
1 H . หลังจากบ่มเชื้อ ,