Using a combination of chromatograp

Using a combination of chromatographic methods, purification of the target molecule is achieved. The purpose of purifying proteins with FPLC is to deliver quantities of the target at sufficient purity in a biologically active state to suit its further use. The quality of the end product varies depending the type and amount of starting material, efficiency of separation, and selectivity of the purification resin. The ultimate goal of a given purification protocol is to deliver the required yield and purity of the target molecule in the quickest, cheapest, and safest way for acceptable results. The range of purity required can be from that required for basic analysis (SDS-PAGE or ELISA, for example), with only bulk impurities removed, to pure enough for structural analysis (NMR or X-ray crystallography), approaching >99% target molecule. Purity required can also mean pure enough that the biological activity of the target is retained. These demands can be used to determine the amount of starting material required to reach the experimental goal. If the starting material is limited and full optimization of purification protocol cannot be performed, then a safe standard protocol that requires a minimum adjustment and optimization steps are expected. This may not be optimal with respect to experimental time, yield, and economy but it will achieve the experimental goal. On the other hand, if the starting material is enough to develop more complete protocol, the amount of work to reach the separation goal depends on the available sample information and target molecule properties. Limits to development of purification protocols many times depends on the source of the substance to be purified, whether from natural sources (harvested tissues or organisms, for example), recombinant sources (such as using prokaryotic or eukaryotic vectors in their respective expression systems), or totally synthetic sources.

No chromatographic techniques provide 100% yield of active material and overall yields depend on the number of steps in the purification protocol. By optimizing each step for the intended purpose and arranging them that minimizes inter step treatments, the number of steps will be minimized.

A typical multistep purification protocol starts with a preliminary capture step which many times utilizes ion exchange chromatography (IEC). The media (stationary phase) employed range from large bead resins (good for fast flow rates and little to no sample clarification at the expense of resolution) to small bead resins (for best possible resolution with all other factors being equal). Short and wide column geometries are amenable to high flow rates also at the expense of resolution, typically because of lateral diffusion of sample on the column. For techniques such as size exclusion chromatography to be useful, very long, thin columns and minimal sample volumes (maximum 5% of column volume) are required. Hydrophobic interaction chromatography (HIC) can also be used for first and/ or intermediate steps. Selectivity in HIC is independent of running pH and descending salt gradients are used. For HIC, conditioning involves adding ammonium sulphate to the sample to match the buffer A concentration. If HIC is used before IEC, the ionic strength would have to be lowered to match that of buffer A for IEC step by dilution, dialysis or buffer exchange by gel filtration. This is why IEC is usually performed prior to HIC as the high salt elution conditions for IEC are ideal for binding to HIC resins in the next purification step. Polishing is used to achieve the final level of purification required and is commonly performed on a gel filtration column. An extra intermediate purification step can be added or optimization of the different steps is performed for improving purity. This extra step usually involves another round of IEC under completely different conditions.

Although this is an example of a common purification protocol for proteins, the buffer conditions, flow rates, and resins used to achieve final goals can be chosen to cover a broad range of target proteins. This flexibility is imperative for a functional purification system as all proteins behave differently and often deviate from predictions.[

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้วิธี chromatographic ฟอกของโมเลกุลเป้าหมายที่ทำ วัตถุประสงค์ของบริสุทธิ์โปรตีนกับ FPLC คือการ นำเสนอปริมาณเป้าหมายที่บริสุทธิ์เพียงพอในชิ้นงานให้เหมาะสมกับการใช้เพิ่มเติม คุณภาพของผลิตภัณฑ์สุดท้ายแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดและจำนวนของวัสดุ ประสิทธิภาพของการแยก การเริ่มต้น ความใวสูงของยางฟอก เป้าหมายสูงสุดของโพรโทคอลที่กำหนดฟอกส่งผลตอบแทนที่ต้องการความบริสุทธิ์ของโมเลกุลเป้าหมายด้วยวิธีที่เร็วที่สุด ถูกสุด และปลอดภัยที่สุดสำหรับผลลัพธ์ที่ยอมรับได้ ช่วงของความบริสุทธิ์ที่ต้องได้จากที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์พื้นฐาน (SDS-หน้าหรือ ELISA ตัวอย่าง), มีเฉพาะจำนวนมากสิ่งสกปรกเอา ถึงความบริสุทธิ์เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์โครงสร้าง (NMR หรือเอกซเรย์ผลิกศาสตร์), ใกล้ > โมเลกุลเป้าหมาย 99% บริสุทธิ์ต้องยังหมายถึงความบริสุทธิ์เพียงพอที่รักษากิจกรรมชีวภาพของเป้าหมาย ความต้องการเหล่านี้สามารถใช้เพื่อกำหนดจำนวนของวัสดุที่จำเป็นในการเข้าถึงเป้าหมายทดลองเริ่มต้น ถ้าวัสดุเริ่มต้นมีจำกัด และไม่สามารถดำเนินการเพิ่มประสิทธิภาพเต็มรูปแบบของโพรโทคอฟอก โพรโทคอมาตรฐานปลอดภัยที่จำเป็นต้องมีขั้นตอนการปรับปรุงและเพิ่มประสิทธิภาพต่ำสุดมีการคาดว่า นี้อาจไม่เหมาะสมกับเวลาที่ทดลอง ผลผลิต และเศรษฐกิจ แต่มันจะบรรลุเป้าหมายทดลอง ในทางตรงข้าม ถ้าวัสดุเริ่มต้นไม่เพียงพอในการพัฒนาโพรโทคอลเซอร์วิส จำนวนของงานถึงเป้าหมายแยกขึ้นอยู่กับตัวอย่างมีข้อมูลและเป้าหมายโมเลกุลคุณสมบัติ ขีดจำกัดการพัฒนาของโปรโตคอลฟอกหลายครั้งขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของสารเพื่อจะบริสุทธิ์ ไม่ว่าจากแหล่งน้ำธรรมชาติ (เก็บเกี่ยวเนื้อเยื่อหรือสิ่งมีชีวิต ตัวอย่าง), แหล่ง recombinant (เช่นใช้ prokaryotic หรือ eukaryotic เวกเตอร์ในระบบของพวกเขาแต่ละนิพจน์), หรือแหล่งสังเคราะห์ทั้งหมด

ไม่เทคนิค chromatographic ให้ผลตอบแทน 100% ของวัสดุที่ใช้ และผลผลิตโดยรวมขึ้นอยู่กับจำนวนขั้นตอนในการโพรโทคอลฟอก อินเตอร์ โดยแต่ละขั้นตอนการปรับให้เหมาะสมสำหรับวัตถุประสงค์กำหนดไว้ และจัดให้ที่ช่วยลดขั้นตอนการรักษา หมายเลขของขั้นตอนจะถูกย่อให้เล็กสุด

โพรโทคอฟอก multistep ทั่วไปเริ่มต้น ด้วยขั้นตอนเบื้องต้นจับภาพหลายครั้งที่ใช้สารกรอง chromatography (IEC) สื่อ (ระยะเครื่องเขียน) ว่าจ้างช่วงจากลูกปัดขนาดใหญ่เรซิ่น (ดีสำหรับอัตราการไหลอย่างรวดเร็ว และไม่ชี้แจงอย่างละเอียดค่าใช้จ่ายน้อย) เรซิ่นลูกปัดขนาดเล็ก (สำหรับการแก้ปัญหาได้ดีที่สุดกับปัจจัยอื่นเป็นเท่า) รูปทรงเรขาคณิตที่สั้น และกว้างคอลัมน์จะคล้อยตามการอัตราไหลสูงนอกจากนี้ค่าใช้จ่ายความละเอียด ตก โดยทั่วไปเนื่องจากการแพร่ที่ด้านข้างของตัวอย่างในคอลัมน์ สำหรับเทคนิคต่าง ๆ เช่น chromatography แยกขนาดเป็นประโยชน์ นาน บางคอลัมน์และไดรฟ์ข้อมูลอย่างน้อยที่สุด (สูงสุด 5% ของปริมาตรคอลัมน์) จำเป็นการ โต้ตอบ hydrophobic chromatography (ชไอ) สามารถใช้สำหรับขั้นตอนแรกและ/ หรือระดับกลาง ใวในชไอเป็นอิสระใช้ค่า pH และใช้เรียงไล่ระดับสีเกลือ สำหรับชไอ นี่เกี่ยวข้องกับการเพิ่มแอมโมเนียมซัลเฟตอย่างให้ตรงกับบัฟเฟอร์ความเข้มข้นที่ ถ้าใช้ชไอก่อน IEC, ionic แรงจะต้องถูกลดลงให้ตรงกับที่ A บัฟเฟอร์สำหรับขั้น IEC เจือจาง แลกเปลี่ยนหน่วยหรือบัฟเฟอร์ โดยการกรองเจ นี่คือเหตุผลที่ IEC จะดำเนินการก่อนชไอเป็นเงื่อนไข elution เกลือสูงสำหรับ IEC เหมาะสำหรับผูกกับเรซิ่นชไอในขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป ขัดถูกใช้เพื่อให้บรรลุระดับสุดท้ายต้องฟอก และมักดำเนินการบนคอลัมน์กรองเจ คุณสามารถเพิ่มขั้นตอนการฟอกกลางเสริม หรือเพิ่มประสิทธิภาพของขั้นตอนต่าง ๆ จะดำเนินการปรับปรุงความบริสุทธิ์ ขั้นตอนพิเศษนี้มักจะเกี่ยวข้องกับ IEC รอบอื่นภายใต้เงื่อนไขต่าง ๆ ทั้งหมด

ถึงแม้ว่านี้เป็นตัวอย่างของโพรโทคอฟอกทั่วไปโปรตีน บัฟเฟอร์สภาพ ราคาไหล และเรซิ่นที่ใช้ในการบรรลุเป้าหมายขั้นสุดท้ายสามารถเลือกครอบคลุมหลากหลายของโปรตีนเป้าหมาย ความยืดหยุ่นนี้เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับระบบการทำงานเป็นโปรตีนทั้งหมดทำงานแตกต่างกัน และมักจะแตกต่างจากการคาดคะเน[

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใช้การรวมกันของวิธีโครมา, การทำให้บริสุทธิ์ของโมเลกุลเป้าหมายคือความสำเร็จ วัตถุประสงค์ของโปรตีนบริสุทธิ์กับ fplc คือการส่งมอบปริมาณของเป้าหมายที่มีความบริสุทธิ์เพียงพอในสภาพที่ใช้งานทางชีวภาพเพื่อให้เหมาะกับการใช้งานของตนต่อไป คุณภาพของผลิตภัณฑ์สุดท้ายจะแตกต่างกันขึ้นอยู่กับชนิดและปริมาณของวัสดุที่เริ่มต้นในการใช้ประสิทธิภาพของการแยกและการเลือกของเรซินบริสุทธิ์ เป้าหมายสูงสุดของโปรโตคอลการทำให้บริสุทธิ์ที่ได้รับคือการส่งมอบผลตอบแทนที่จำเป็นและความบริสุทธิ์ของโมเลกุลเป้าหมายในเร็วที่สุดที่ถูกที่สุดและวิธีที่ปลอดภัยที่สุดเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่ยอมรับได้ ช่วงของความบริสุทธิ์ที่ต้องการได้จากที่จำเป็นต้องใช้สำหรับการวิเคราะห์ขั้นพื้นฐาน (SDS-PAGE หรือ ELISA ตัวอย่างเช่น) กับสิ่งสกปรกที่เป็นกลุ่มเดียวที่ออกจะบริสุทธิ์เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์โครงสร้าง (NMR หรือเอ็กซ์เรย์ผลึก) ใกล้เป้าหมาย> 99% โมเลกุล ความบริสุทธิ์ที่จำเป็นยังสามารถหมายถึงความบริสุทธิ์พอที่จะทำให้กิจกรรมทางชีวภาพของเป้าหมายจะถูกเก็บไว้ ความต้องการเหล่านี้สามารถใช้ในการกำหนดจำนวนของวัสดุเริ่มต้นที่จำเป็นในการบรรลุเป้าหมายการทดลอง ถ้าวัสดุเริ่มต้นที่มี จำกัด และการเพิ่มประสิทธิภาพเต็มรูปแบบของโปรโตคอลบริสุทธิ์ไม่สามารถดำเนินการแล้วโปรโตคอลมาตรฐานความปลอดภัยที่ต้องมีการปรับตัวและการเพิ่มประสิทธิภาพขั้นต่ำขั้นตอนที่คาดว่า นี้อาจจะไม่ดีที่สุดด้วยความเคารพต่อเวลาการทดลองผลผลิตและเศรษฐกิจ แต่มันจะบรรลุเป้าหมายการทดลอง ในทางตรงกันข้ามถ้าวัสดุที่เริ่มต้นก็เพียงพอที่จะพัฒนาโปรโตคอลสมบูรณ์มากขึ้นปริมาณของการทำงานที่จะบรรลุเป้าหมายการแยกขึ้นอยู่กับข้อมูลตัวอย่างที่มีอยู่และเป้าหมายคุณสมบัติโมเลกุล ข้อ จำกัด ในการพัฒนาของโปรโตคอลการทำให้บริสุทธิ์หลายต่อหลายครั้งขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของสารเคมีที่จะทำให้บริสุทธิ์ไม่ว่าจะเป็นจากแหล่งน้ำธรรมชาติ (เนื้อเยื่อที่เก็บเกี่ยวหรือสิ่งมีชีวิตเช่น) แหล่ง recombinant (เช่นการใช้เวกเตอร์โปรคาริโอหรือยูคาริโอในระบบการแสดงออกของตน) หรือแหล่งสังเคราะห์ทั้งหมดไม่มีเทคนิคโครมาให้ผลตอบแทน 100% ของวัสดุที่ใช้งานและอัตราผลตอบแทนโดยรวมขึ้นอยู่กับจำนวนของขั้นตอนในโปรโตคอลการทำให้บริสุทธิ์ โดยการเพิ่มประสิทธิภาพในแต่ละขั้นตอนเพื่อวัตถุประสงค์ที่ตั้งใจไว้และจัดให้พวกเขาที่ช่วยลดขั้นตอนการรักษาระหว่างจำนวนของขั้นตอนที่จะลดลงโปรโตคอลบริสุทธิ์หลายขั้นตอนโดยทั่วไปเริ่มต้นด้วยขั้นตอนเบื้องต้นจับซึ่งหลายครั้งใช้การแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโต (IEC) สื่อ (เฟส) ช่วงจ้างจากเรซินขนาดใหญ่ลูกปัด (ดีสำหรับอัตราการไหลอย่างรวดเร็วและไม่น้อยไปชี้แจงตัวอย่างที่ค่าใช้จ่ายของการแก้ปัญหา) เพื่อผลิตเม็ดพลาสติกลูกปัดเล็ก ๆ (สำหรับการแก้ปัญหาที่ดีที่สุดที่มีปัจจัยอื่น ๆ ที่เท่าเทียมกัน) สั้นและกว้างรูปทรงเรขาคณิตเป็นคอลัมน์คล้อยตามอัตราการไหลสูงยังที่ค่าใช้จ่ายของการแก้ปัญหาโดยทั่วไปเนื่องจากการกระจายด้านข้างของกลุ่มตัวอย่างในคอลัมน์ สำหรับเทคนิคเช่นการยกเว้นขนาดโคจะเป็นประโยชน์มากยาวคอลัมน์บางและปริมาณตัวอย่างน้อยที่สุด (สูงสุด 5% ของปริมาณคอลัมน์) จะต้อง ปฏิสัมพันธ์โคชอบน้ำ (HIC) นอกจากนี้ยังสามารถใช้สำหรับขั้นตอนแรกและ / หรือกลาง หัวกะทิใน HIC มีความเป็นอิสระจากการทำงานของพีเอชและลงเกลือไล่ระดับสีที่ใช้ สำหรับ HIC, เครื่องเกี่ยวข้องกับการเพิ่มแอมโมเนียมซัลเฟตตัวอย่างเพื่อให้ตรงกับบัฟเฟอร์ความเข้มข้น ถ้า HIC ถูกนำมาใช้ก่อนที่จะ IEC, ความแข็งแรงอิออนจะต้องถูกลดลงให้ตรงกับของบัฟเฟอร์สำหรับขั้นตอน IEC โดยการลดสัดส่วนการฟอกไตหรือแลกเปลี่ยนบัฟเฟอร์โดยการกรองเจล นี่คือเหตุผลที่ IEC มักจะดำเนินการก่อนที่จะ HIC เป็นเกลือเงื่อนไขชะสูงสำหรับ IEC เหมาะสำหรับการเชื่อมโยงไปยังเรซิน HIC ในขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป ขัดถูกนำมาใช้เพื่อให้บรรลุระดับสุดท้ายของการทำให้บริสุทธิ์ที่จำเป็นและจะดำเนินการทั่วไปในการกรองคอลัมน์เจ ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์พิเศษกลางสามารถเพิ่มหรือการเพิ่มประสิทธิภาพของขั้นตอนที่แตกต่างกันจะดำเนินการในการปรับปรุงความบริสุทธิ์ ขั้นตอนพิเศษนี้มักจะเกี่ยวข้องกับอีกรอบ IEC ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันอย่างสมบูรณ์แม้ว่านี่จะเป็นตัวอย่างของโปรโตคอลการทำให้บริสุทธิ์ทั่วไปสำหรับโปรตีนเงื่อนไขบัฟเฟอร์อัตราการไหลและเรซินที่ใช้ในการบรรลุเป้าหมายสุดท้ายสามารถเลือกที่จะครอบคลุมที่หลากหลายของ โปรตีนเป้าหมาย ความยืดหยุ่นนี้มีความจำเป็นสำหรับระบบฟอกทำงานเป็นโปรตีนทั้งหมดทำงานแตกต่างกันและมักจะเบี่ยงเบนไปจากการคาดการณ์. [

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โดยใช้การรวมกันของวิธีการทางโครมาโทกราฟี บริสุทธิ์ของโมเลกุลเป้าหมายได้ มีโปรตีนบริสุทธิ์ fplc จะให้ปริมาณที่เพียงพอของเป้าหมาย ความบริสุทธิ์ในสถานะที่ใช้งานทางชีวภาพเพื่อให้เหมาะกับการใช้งานต่อไปของมัน คุณภาพของผลิตภัณฑ์สุดท้ายที่แตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดและปริมาณของวัสดุเริ่มต้น ประสิทธิภาพของการแยกและการเลือกเกิดของผลิตเรซิ่น เป้าหมายสูงสุดของขั้นตอนผลิตเพื่อส่งมอบให้ใช้ผลผลิตและความบริสุทธิ์ของโมเลกุลเป้าหมายในที่เร็ว ราคาถูก และวิธีที่ปลอดภัยที่สุดสำหรับผลที่ยอมรับได้ ช่วงของความต้องการสามารถจากที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์พื้นฐาน ( SDS-PAGE หรือ ELISA , ตัวอย่างเช่น ) มีเพียงกลุ่มสิ่งสกปรกออกบริสุทธิ์พอสำหรับการวิเคราะห์โครงสร้าง ( NMR หรือรังสีเอกซ์ ) ใกล้ > 99% โมเลกุลเป้าหมาย ความบริสุทธิ์ที่จำเป็นยังสามารถหมายถึงเพียวพอและฤทธิ์ทางชีวภาพของเป้าหมายจะยังคงอยู่ ความต้องการเหล่านี้สามารถใช้เพื่อกำหนดปริมาณของวัสดุเริ่มต้นต้องถึงเป้าหมายทดลองถ้าตั้งต้นจะถูก จำกัด และเพิ่มประสิทธิภาพของการฟอกเต็มโปรโตคอลไม่สามารถดำเนินการแล้วปลอดภัยโปรโตคอลมาตรฐานที่ต้องมีการปรับน้อยที่สุด และขั้นตอนการเพิ่มประสิทธิภาพ คาดหวัง นี่อาจจะไม่ใช่เวลาที่เหมาะสมกับการทดลอง ผลผลิต และเศรษฐกิจ แต่จะบรรลุเป้าหมายทดลอง บนมืออื่น ๆถ้าตั้งต้นพอที่จะพัฒนาโปรโตคอลที่สมบูรณ์มากขึ้น ปริมาณของงานที่จะถึงแยกเป้าหมายขึ้นอยู่กับพร้อมตัวอย่างข้อมูลและคุณสมบัติของโมเลกุลเป้าหมาย พัฒนาจำกัดของระบบบำบัดน้ำเสีย หลายครั้งขึ้นอยู่กับแหล่งที่มาของสารจะบริสุทธิ์ ไม่ว่าจากแหล่งธรรมชาติ ( ปลูกเนื้อเยื่อ หรือสิ่งมีชีวิต ตัวอย่าง )แหล่งโปรตีน ( เช่นการใช้โพรคาริโอติกหรือ eukaryotic เวกเตอร์ในระบบการแสดงออกของตน ) หรือทั้งหมดสังเคราะห์แหล่ง

ไม่มีเทคนิคทางโครมาโตกราฟีให้ 100 เปอร์เซ็นต์ของวัสดุที่ใช้งานและผลผลิตโดยรวมขึ้นอยู่กับจำนวนของขั้นตอนในการขั้นตอน โดยการเพิ่มประสิทธิภาพในแต่ละขั้นตอน วัตถุประสงค์และการจัดเรียงพวกเขาที่ลดระหว่างขั้นตอนการรักษาหมายเลขของขั้นตอนจะลดลง

ขั้นตอนการ multistep โดยทั่วไปเริ่มต้นด้วยขั้นตอนเบื้องต้นจับหลายครั้งซึ่งใช้วิธีแลกเปลี่ยนไอออน ( IEC )สื่อ ( stationary phase ) ในช่วงจากเม็ดลูกปัดใหญ่ ( ดีสำหรับอัตราการไหลอย่างรวดเร็วและน้อยไปไม่มีตัวอย่างชัดเจนที่ค่าใช้จ่ายของความละเอียด ) เม็ดลูกปัดขนาดเล็ก ( ที่ดีที่สุดที่เป็นไปได้กับทุกปัจจัยอื่น ๆความละเอียดเท่า ) สั้นและกว้างที่มีอัตราการไหลสูงคอลัมน์จะซูฮกในค่าใช้จ่ายของความละเอียดโดยทั่วไปเนื่องจากการแพร่กระจาย ด้านข้างของตัวอย่างในคอลัมน์ สำหรับเทคนิค เช่น ขนาด ยกเว้นโครม มีประโยชน์มาก ยาวมาก เสาบางและน้อยที่สุดปริมาณตัวอย่าง ( สูงสุด 5 % ของปริมาณคอลัมน์ ) จะต้อง ไฮโดรโฟบิกปฏิสัมพันธ์ chromatography ( HIC ) ยังสามารถใช้สำหรับก่อนและ / หรือขั้นกลางในการเป็นอิสระ และสะอึกวิ่งลงมาไล่เกลือที่ใช้ สำหรับช่างปรับอากาศ , เกี่ยวข้องกับการเพิ่มแอมโมเนียมซัลเฟตกับตัวอย่างการบัฟเฟอร์ตรงกับความเข้มข้น ถ้าที่นี่คือใช้ก่อน IEC , ความแรงของไอออนจะถูกลดลงเพื่อให้ตรงกับที่ของบัฟเฟอร์สำหรับขั้นตอน IEC โดยเจือจาง ฟอกเลือด หรือ บัฟเฟอร์ที่ตราโดยเจลฟิลเตร .นี่คือเหตุผลที่ IEC ปกติจะแสดงก่อนที่จะสะอึกเป็นเกลือสูง ( เงื่อนไข IEC เหมาะสําหรับผูกเม็ด HIC ในขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป ขัดที่ใช้เพื่อให้บรรลุระดับสุดท้ายของการฟอกที่ต้องการและโดยทั่วไปจะแสดงในคอลัมน์เจลฟิล .เป็นขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์กลางพิเศษสามารถเพิ่มหรือเพิ่มประสิทธิภาพของขั้นตอนที่แตกต่างกันจะถูกดำเนินการเพื่อเพิ่มความบริสุทธิ์ ขั้นตอนพิเศษนี้มักจะเกี่ยวข้องกับรอบอื่นของ IEC ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันโดยสิ้นเชิง

ถึงแม้ว่านี้คือตัวอย่างของระบบบำบัดน้ำเสียทั่วไป โปรตีน บัฟเฟอร์ เงื่อนไข อัตราการไหลและเรซินที่ใช้เพื่อให้บรรลุเป้าหมายสุดท้ายสามารถเลือกที่จะครอบคลุมช่วงกว้างของโปรตีนเป้าหมาย ความยืดหยุ่นนี้เป็นสิ่งจำเป็น สำหรับระบบบำบัดน้ำเสียทุกหน้าที่เป็นโปรตีนพฤติกรรมแตกต่างกันและมักจะผิดเพี้ยนจากการคาดการณ์ [