2.3. Extraction and determination of organic acids
Organic acids were extracted and determined according to the
method of Wu et al. (2002), with some modifications. Frozen tissue
(3 g) was homogenized with 10 mL of ultrapure water and then
centrifuged at 15,000 g for 15 min at 4 C. The supernatant was
filtered through SEP-C18 cartridge (Supelclean ENVI C18 SPE), then
through a 0.45mm membrane filter (Millipore, Milford, MA, USA).
A 20mL sample was injected into an ODS-3C18 column (5mm,
250 mm 4.6 mm, GL science, Tokyo, Japan) for HPLC analysis
(Waters Alliance 2695 system, Waters Corporation, USA). The flow
rate was 0.8 mL min1 using 0.02 M KH2PO4 (pH 2.4) as the mobile
phase. The eluted peaks were detected with a Waters 2998 photodiode
array detector (Waters Corporation, USA) at a wavelength of
210 nm. Quantification of individual organic acid was made using
peak areas of standard samples and expressed in mg per g fresh
weight (mg g1 FW). All the standard organic acids were obtained
from Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Each treatment contained
three replications, and 10 fruit were used in each replicate.
2.3. Extraction and determination of organic acidsOrganic acids were extracted and determined according to themethod of Wu et al. (2002), with some modifications. Frozen tissue(3 g) was homogenized with 10 mL of ultrapure water and thencentrifuged at 15,000 g for 15 min at 4 C. The supernatant wasfiltered through SEP-C18 cartridge (Supelclean ENVI C18 SPE), thenthrough a 0.45mm membrane filter (Millipore, Milford, MA, USA).A 20mL sample was injected into an ODS-3C18 column (5mm,250 mm 4.6 mm, GL science, Tokyo, Japan) for HPLC analysis(Waters Alliance 2695 system, Waters Corporation, USA). The flowrate was 0.8 mL min1 using 0.02 M KH2PO4 (pH 2.4) as the mobilephase. The eluted peaks were detected with a Waters 2998 photodiodearray detector (Waters Corporation, USA) at a wavelength of210 nm. Quantification of individual organic acid was made usingpeak areas of standard samples and expressed in mg per g freshweight (mg g1 FW). All the standard organic acids were obtainedfrom Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Each treatment containedthree replications, and 10 fruit were used in each replicate.
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.3 การสกัดและความมุ่งมั่นของกรดอินทรีย์
กรดอินทรีย์ถูกสกัดและกำหนดให้เป็นไปตาม
วิธีการของ Wu et al, (2002) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เนื้อเยื่อแช่แข็ง
(3 กรัม) ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันกับ 10 มิลลิลิตรของน้ำบริสุทธิ์แล้ว
หมุนเหวี่ยงที่ 15,000? กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ใสถูก
กรองผ่าน SEP-C18 ตลับหมึก (Supelclean ENVI C18 SPE) จากนั้น
ผ่านตัวกรองเมมเบรน 0.45mm (คฟอร์ด, MA, USA).
ตัวอย่าง 20 มลถูกฉีดเข้าไปในคอลัมน์ ODS-3C18 (5mm,
250 มม? 4.6 มม GL วิทยาศาสตร์กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) สำหรับการวิเคราะห์ HPLC
(Waters พันธมิตร 2695 ระบบน้ำคอร์ปอเรชั่นสหรัฐอเมริกา) ไหล
อัตราเท่ากับ 0.8 มล min1 ใช้ 0.02 M KH2PO4 (pH 2.4) ในขณะที่มือถือ
เฟส ยอดเขาชะพบกับน่านน้ำ 2998 โฟโตไดโอด
อาร์เรย์เครื่องตรวจจับ (วอเตอร์คอร์ปอเรชั่นสหรัฐอเมริกา) ที่ความยาวคลื่นของ
210 นาโนเมตร ปริมาณของกรดอินทรีย์ของแต่ละบุคคลที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้
พื้นที่จุดสูงสุดของตัวอย่างมาตรฐานและแสดงในมิลลิกรัมต่อกรัมสด
น้ำหนัก (MG G1 FW) ทั้งหมดกรดอินทรีย์มาตรฐานที่ได้รับ
จาก Sigma-Aldrich ( St. Louis, มิสซูรี, สหรัฐอเมริกา) การรักษาแต่ละครั้งมี
สามซ้ำ, 10 และผลไม้ที่ถูกนำมาใช้ในการทำซ้ำ
การแปล กรุณารอสักครู่..

2.3 การสกัดและการหาปริมาณกรดอินทรีย์กรดอินทรีย์สกัดและมุ่งมั่นไปตามวิธีของ Wu et al . ( 2002 ) , มีการปรับเปลี่ยน เนื้อเยื่อแข็ง( 3 g ) บดกับ 10 ml ของน้ำบริสุทธิ์มากแล้วระดับ 12 , 000 G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 C สูง คือตลับกรองผ่าน sep-c18 ( supelclean Envi c18 เอสพี ) แล้วผ่าน 0.45mm เมมเบรนกรอง ( มิลลิ , ฟอร์ด , MA , USA )เป็นหลอดตัวอย่างถูกฉีดเข้าไป ods-3c18 คอลัมน์ ( มม.250 มม. 4.6 มม. , GL , วิทยาศาสตร์ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) สำหรับการวิเคราะห์ HPLC( พันธมิตร 2695 น้ำระบบน้ำ Corporation , USA ) การไหลอัตรา 0.8 ml min1 ใช้ 0.02 M kh2po4 ( pH 2.4 ) เป็นมือถือเฟส จากตัวอย่างพบว่ามียอดด้วยน้ำ 2998 โฟโตไดโอดเครื่องตรวจจับเรย์ ( น้ำ Corporation , USA ) ที่ความยาวคลื่น210 นาโนเมตร ปริมาณของกรดอินทรีย์ได้จากการบุคคลพื้นที่สูงสุดของตัวอย่างมาตรฐาน และแสดงออกในมิลลิกรัม ต่อ กรัม สดน้ำหนัก ( มก. G1 FW ) กรดอินทรีย์ที่ได้มาตรฐานทั้งหมดจากซิกม่า Aldrich ( St . Louis , MO , USA ) การรักษาแต่ละครั้ง ประกอบด้วย3 ซ้ำ และ 10 ผลไม้ที่ใช้ในแต่ละจําลอง
การแปล กรุณารอสักครู่..
