DNA extraction, amplification and s

DNA extraction, amplification and sequencing. Total genomic DNA was extracted from ethanol preserved
tissues, following a CTAB-phenol-chloroform based protocol (Dawson et al. 1998; Dawson & Jacobs 2001).
Polymerase chain reactions (PCR) were performed in an Eppendorf Mastercycler Gradient thermal cycler.
Mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (COI) was amplified using the primers LCOjf (Dawson 2005) and
HCO2198 (Folmer et al. 1994) using the following profile: 94°C for 4 min, 51°C for 2 min, 72°C for 2 min, 94°C
for 4 min, 51°C for 2 min, 72°C for 2 min; 33 cycles of 94°C for 45 sec, 50°C for 45 sec, 72°C for 60 sec; final
extension at 72°C for 5 min and refrigeration at 4°C. 28S rDNA was amplified with the primers Aa_L28S_21 and
Aa_H28S_1078 (Bayha et al. 2010) using the reaction conditions suggested by the authors.
The size and quality of PCR products were examined on 1.5% agarose gels stained with GelRed™ and then
purified with DE-001 GEL/PCR extraction and purification kit (Fisher Molecular Biology). The purified products
were used as template DNA for cycle sequencing reactions performed by Macrogen (Korea). Both DNA strands
were sequenced

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอ ขยาย และจัดลำดับ ถูกแยกดีเอ็นเอทั้งหมดที่ออกจากเอทานอลในการรักษาเนื้อเยื่อ CTAB-ฟีนอลคลอโรฟอร์มดังต่อไปนี้ใช้โพรโทคอล (ดอว์สัน et al. 1998 ดอว์สันและ Jacobs 2001)ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) ถูกดำเนินการใน cycler ความร้อนการไล่ระดับสี Eppendorf Mastercyclerยล cytochrome c oxidase ย่อยผม (COI) ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ LCOjf (2005 ดอว์สัน) และHCO2198 (Folmer et al. 1994) โดยใช้โพรไฟล์ต่อไปนี้: 94° C เป็นเวลา 4 นาที 51° C เป็นเวลา 2 นาที 72° C เป็นเวลา 2 นาที 94° C4 นาที 51° C เป็นเวลา 2 นาที 72° C เป็นเวลา 2 นาที รอบ 33 94° c สำหรับ 45 วินาที 50° C ใน 45 วินาที 72° C สำหรับ 60 วินาที ขั้นสุดท้ายนามสกุลที่ 72° C เป็นเวลา 5 นาทีและเครื่องทำความเย็นที่ 4 องศาเซลเซียส 28S rDNA ถูกขยาย ด้วยไพรเมอร์ Aa_L28S_21 และAa_H28S_1078 (Bayha et al. 2010) ใช้เงื่อนไขปฏิกิริยาที่แนะนำ โดยผู้เขียนขนาดและคุณภาพของผลิตภัณฑ์ PCR ตรวจสอบบน 1.5% agarose เจย้อม ด้วย GelRed™ แล้วบริสุทธิ์กับ DE-001 เจล/PCR ชุดการสกัดและทำให้บริสุทธิ์ (Fisher อณูชีววิทยา) ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ถูกใช้เป็นแม่แบบดีเอ็นเอสำหรับวงจรปฏิกิริยาลำดับที่ดำเนินการ โดย Macrogen (เกาหลี) ทั้งสองสายของดีเอ็นเอมีการเรียงลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สกัดดีเอ็นเอขยายและการเรียงลำดับ ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากเอทานอลที่เก็บรักษาไว้
เนื้อเยื่อต่อไปนี้โปรโตคอล CTAB-ฟีนอลคลอโรฟอร์ม based (ดอว์สัน et al, 1998. ดอว์สันและจาคอบส์ 2001)
ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR) ได้ดำเนินการในการให้ความร้อน Cycler Eppendorf Mastercycler ไล่โทนสี
ยล subunit cytochrome c เด I (COI) ถูกขยายโดยใช้ไพรเมอร์ LCOjf (ดอว์สัน 2005) และ
HCO2198 (Folmer et al, 1994.) โดยใช้รายละเอียดดังต่อไปนี้: 94 ° C เป็นเวลา 4 นาที 51 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที 72 ° C 2 นาที 94 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 4 นาที 51 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที; 33 รอบจาก 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาที 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 45 วินาที, 72 ° C เป็นเวลา 60 วินาที; สุดท้าย
ส่วนขยายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและเครื่องทำความเย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส 28S rDNA ถูกขยายด้วยไพรเมอร์และ Aa_L28S_21
Aa_H28S_1078 (บัญหา et al, 2010) โดยใช้เงื่อนไขปฏิกิริยาที่แนะนำโดยผู้เขียน
ขนาดและคุณภาพของผลิตภัณฑ์ PCR ถูกตรวจสอบได้ที่ 1.5% agarose เจลย้อมด้วยสี GelRed ™แล้ว
ทำให้บริสุทธิ์ด้วยการสกัด DE-001 / GEL PCR และชุดฟอก (ฟิชเชอร์อณูชีววิทยา) ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์
ถูกนำมาใช้เป็นดีเอ็นเอแม่แบบสำหรับปฏิกิริยาวงจรลำดับดำเนินการโดย Macrogen (เกาหลี) ทั้งสองสายดีเอ็นเอ
มีลำดับขั้นตอน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัด DNA Amplification และการหาลำดับเบส . รวมจีโนมดีเอ็นเอจากเอทานอล เก็บรักษาไว้เนื้อเยื่อต่อไปนี้ ctab ฟีนอล ( ใช้โปรโตคอล ( ดอว์สัน et al . 1998 ; ดอว์สัน & จาคอบส์ 2001 )วิธีปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส ( พีซีอาร์ ) มีการปฏิบัติในเพนดอร์ฟ mastercycler ไล่ระดับความร้อนรอบ .อุตสาหกรรมอุปกรณ์ข้อมูลออกซึ่งฉัน ( ผม ) คือการขยายการใช้ไพรเมอร์ lcojf ( ดอว์สัน 2005 ) และhco2198 ( โฟลเมอร์ et al . 1994 ) โดยใช้ข้อมูลต่อไปนี้ : 94 ° C เป็นเวลา 4 นาทีที่ 51 ° C เป็นเวลา 2 นาที 72 ° C เป็นเวลา 2 นาที 94 ° C4 นาทีที่ 51 ° C เป็นเวลา 2 นาที 72 ° C เป็นเวลา 2 นาที ; 33 รอบ 94 ° C 45 sec 50 ° C เป็นเวลา 45 วินาที , 72 ° C เป็นเวลา 60 วินาที ; สุดท้ายนามสกุลที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาทีและอุณหภูมิ 4 องศา 28s rDNA ถูกขยายด้วยไพรเมอร์ aa_l28s_21 และaa_h28s_1078 ( bayha et al . 2010 ) โดยใช้ปฏิกิริยาเงื่อนไขที่เสนอโดยผู้เขียนขนาดและคุณภาพของผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกตรวจสอบใน 1.5% , เจล gelred ™เปื้อนแล้วบริสุทธิ์กับ de-001 เจล / เทคนิคการสกัดและบริสุทธิ์ Kit ( ฟิชเชอร์ ( อณูชีววิทยา ) และผลิตภัณฑ์ถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับการจัดลำดับดีเอ็นเอวงจรปฏิกิริยาโดย macrogen ( เกาหลี ) ทั้งเส้นดีเอ็นเอเป็นลำดับ