RESULTSPlant defense responses afte

RESULTS
Plant defense responses after F. subglutinans, F. proliferatum,
and A. flavus inoculations were probed in two maize genotypes
with contrasting resistance to ear rot, the resistant CO441 and the
susceptible CO354 maize lines. The response was assayed at
72 hpi based on the evidence obtained in previous experiments in
which infection with F. verticillioides was monitored over a time
course of 96 h by performing microarrays and RNA-Seq analysis.
The highest activation of resistance mechanisms was observed
at 72 hpi (Lanubile et al. 2012a, 2014).
Evaluation of fungal growth on CO441
and CO354 maize genotypes.
The growth of F. proliferatum, F. subglutinans, and A. flavus
was assayed at 72 hpi, in maize kernels surrounding the inoculation
point, by absolute quantification of the calmodulin
transcript through real-time RT-PCR. For all assayed fungal
species, the inoculated kernels of resistant maize line showed
a statistically significant lower growth of pathogens, revealed by
a lower copy number of the housekeeping gene (Fig. 1). In
particular, the absolute copy number was 1.33 times higher in
CO354, compared with CO441, after F. proliferatum inoculation,
1.54 times higher after F. subglutinans inoculation, and 1.70
times higher after A. flavus inoculation. F. subglutinans appeared
to be the pathogen that grew more rapidly in maize kernels
(2,050 vs. 3,163 in CO441 and CO354, respectively), followed
by F. proliferatum (1,013 vs. 1,352), and A. flavus (482 vs. 818).
Regulation of PR and oxidative stress–related genes
before and after fungal inoculations.
The expression levels of PR genes and genes protecting from
oxidative stress were measured in real-time RT-PCR. The
assayed genes consisted in PR5, PRm6, PRm3, PR1, POD, CAT,
SOD, and APX. Their expression profile is reported in Figure 2 as
fold change (FC) in transcript content of inoculated kernels over
uninoculated controls. All assayed genes were up-regulated in
both maize lines after fungal inoculations with all strains.
Exceptions were observed for POD after A. flavus inoculation
(FC = 0.9) (Fig. 2C) and for APX and SOD genes for all fungal
inoculation in the resistant line (FC £ 2). Significant inductions
of these genes were detected in the susceptible line (FC ranging
from 2.7 to 3.8), except for A. flavus inoculation (FC < 2). Higher
changes in expression (FC > 2) were associated with PR
transcripts rather than oxidative stress–related genes in both
maize lines, with FC ranging from 35.0 to 3,587.5 for the former
category and from 0.9 to 10.9 for the latter one. PRm6 showed
the highest induction values in CO354 line ranging from 3,417.1
with F. proliferatum inoculation to 3,587.5 with A. flavus inoculation.
Among oxidative-stress genes, CAT was the most induced,
with values ranging from 7.6 and 10.9 in the susceptible
line after F. proliferatum and F. subglutinans inoculation, respectively
(Fig. 2A and B). The susceptible line showed
a stronger induction at 72 hpi for all genes in comparison with
the resistant line. The greatest difference was found in the expression
of PRm6, for which F. proliferatum inoculation elicited
a reaction almost 70 times higher in the susceptible line than that
in the resistant one (3,417.1 vs. 49.7, respectively) (Fig. 2A).
PR1 was another gene strongly induced in the susceptible line,
with a FC 15 times greater in the case of F. subglutinans inoculation
(639.2 vs. 41.9) and almost eight times greater after
F. proliferatum inoculation (129.8 vs. 17.4) (Fig. 2A and B).
Although a weak induction of POD occurred after A. flavus inoculation
in the resistant line, the FC value was 10 times higher
in the CO354 genotype (Fig. 2C).
Comparing the plant responses to different fungal inoculations,
stronger changes in gene expression were generally
featured after F. subglutinans treatment in both genotypes (Fig.
2B). Intriguingly, this pathogen recorded the most extended
growth in maize kernels, as stated by absolute quantification of the
calmodulin gene (Fig. 1). However, higher differences in gene induction
between genotypes were observed after F. proliferatum and
A. flavus inoculations, with the exception of PR1, for which a
more elevated FC was detected in CO354 kernels inoculated
with F. subglutinans.
In order to consider constitutive defense responses, the FC
was measured by comparing control samples (CO441 control
vs. CO354 control) and inoculated samples (CO441 72 hpi vs.
CO354 72 hpi) (Fig. 3). Interestingly, in control samples, enhanced
expression levels were measured for the assayed genes
in the resistant line before the fungal inoculation. The differences
in the expression results were greater for PR genes than
for genes involved in oxidative stress, with values reaching 74.9
for PRm6, 16.7 for PRm3, 7.84 for PR1, and 3.90 for PR5.
Overexpression was also detected for the remaining genes in
control samples of the resistant line, albeit at lower levels,
ranging from 2.4 for POD to 1.5 for SOD.
Transcriptional changes induced by pathogens were also investigated,
by comparing resistant and susceptible inoculated
kernels. In general, induction of PR genes was stronger in the
resistant line (Fig. 3). Greater differences were found for PRm6 in
CO441 as compared with CO354, in which A. flavus inoculation
induced its expression value up to 51.7 times and F. subglutinans
and F. proliferatum up to 40.7 and 3.4, respectively. In contrast
to PR genes, the expression of ROS-scavenging genes was unaffected
by the fungal inoculations (SOD) or was greater in the
susceptible line (POD, APX, CAT). Comparing plant defense
responses elicited by the different fungal inoculations (Fig. 3),
F. proliferatum causes a similar regulation of PR genes in the two
genotypes, excluding the more induced PR5 in the susceptible
line (0.5). In comparison with other fungi, the inoculation with
F. proliferatum induced lower FC values for ROS-scavenging
genes in the resistant line, although POD wasmore down-regulated
in response to A. flavus.
Regulation of the oxidative status in control
and inoculated kernels.
The study of the differential plant defense responses was extended
to proteins and products related to oxidative stress. The
assays were conducted, on the same susceptible and resistant
maize kernels, by comparing uninoculated control samples and
inoculated samples at 72 hpi with F. proliferatum, F. subglutinans,
and A. flavus. The enzymatic assays included enzymes involved
in the oxidative burst and in ROS detoxification, i.e., SOD, APX,
CAT, cytosolic and wall PODs (PODc and PODw, respectively),
monodehydroascorbate reductase (MDHAR), dehydroascorbate
reductase (DHAR), and glutathione reductase (GR). The amount
of H2O2, the substrates or products of these enzymes, and the
index of oxidative stress were measured contextually toMDA and
GSH-ASC contents.
The specific activity of CAT in CO441 and CO354 kernels is
shown in Figure 4A. In uninoculated kernels, CAT results were
significantly (P < 0.001) different from the inoculated kernels in
both genotypes and the resistant line showed considerably more
CAT activity (166 vs. 35). After inoculation with all pathogens,
CATactivity increased in kernels of both lines in comparison with
controls, and the greatest differences occurred after A. flavus inoculation
for CO441 line and after F. subglutinans for CO354 line.
In the resistant line, CAT activity results were higher in absolute
terms, although a greater increase occurred in the susceptible line.
Fig. 1. Copy number of transcripts for the constitutive gene calmodulin in kernels of the resistant CO441 (gray boxes) and susceptible CO354 (white boxes)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์ตอบสนองการป้องกันพืชหลังจาก F. subglutinans, F. proliferatumและ A. flavus ประเทศได้พิสูจน์ในการศึกษาจีโนไทป์ข้าวโพดสองห้องทนต่อหู rot, CO441 ทนและไวต่อข้าวโพด CO354 รายการ การตอบสนองถูก assayed ที่ตามหลักฐานที่ได้รับในการทดลองก่อนหน้านี้ใน hpi 72ที่ติดเชื้อกับ F. verticillioides ถูกตรวจสอบช่วงเวลาการหลักสูตรของ h 96 โดยดำเนิน microarrays และวิเคราะห์ลำดับอาร์เอ็นเอการเรียกใช้กลไกความต้านทานสูงสุดถูกตรวจสอบที่ 72 hpi (Lanubile et al. 2012a, 2014)ประเมินการเจริญเติบโตของเชื้อราบน CO441และการศึกษาจีโนไทป์ CO354 ข้าวโพดเลี้ยงสัตว์การเจริญเติบโต ของ F. proliferatum, F. subglutinans, A. flavusมี assayed ที่ 72 hpi ในเมล็ดข้าวโพด inoculation ที่ล้อมรอบจุด โดยนับแบบสัมบูรณ์ของ calmodulinเสียงบรรยายผ่าน RT-PCR แบบเรียลไทม์ ทั้งหมด assayed เชื้อราแสดงให้เห็นว่าสปีชีส์ เมล็ดข้าวโพดบรรทัดทน inoculatedเจริญเติบโตต่ำกว่าอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของโรค การเปิดเผยโดยหมายเลขล่างสำเนาของยีนทำความสะอาด (Fig. 1) ในเฉพาะ จำนวนสำเนาแน่นอนถูกเวลา 1.33 สูงกว่าCO354 เปรียบเทียบกับ CO441 หลังจาก F. proliferatum inoculationสูงเวลา 1.54 F. subglutinans inoculation และ 1.70ครั้งสูงหลัง inoculation A. flavus F. subglutinans ปรากฏต้อง ศึกษาที่เติบโตอย่างรวดเร็วในข้าวโพดเมล็ด(เทียบกับ 3,163 CO441 และ CO354, 2,050 ตามลำดับ), ไปมาแล้วโดยเอฟ proliferatum (1,013 เทียบกับ 1,352), และ A. flavus (482 เทียบกับ 818)ระเบียบของ PR และยีนเกี่ยวกับความเครียด oxidativeก่อน และ หลังประเทศเชื้อราระดับนิพจน์ของ PR ยีนและยีนที่ป้องกันจากความเครียด oxidative ถูกวัดในแบบเรียลไทม์ RT-PCR ที่ประกอบด้วยยีน assayed PR5, PRm6, PRm3, PR1, POD แมวสด และให้ APX มีรายงานค่าของนิพจน์ในรูปที่ 2 เป็นพับเปลี่ยนแปลง (FC) ในเสียงบรรยายเนื้อหาของเมล็ด inoculatedควบคุม uninoculated Assayed ยีนทั้งหมดถูกกำหนดขึ้นในทั้งข้าวโพดบรรทัดหลังจากประเทศที่เชื้อราสายพันธุ์ทั้งหมดข้อยกเว้นถูกสังเกตในฝักหลัง inoculation A. flavus(FC = 0.9) (Fig. 2C) ยีนให้ APX และสดทั้งหมดและเชื้อราinoculation ในบรรทัดทน (FC £ 2) Inductions อย่างมีนัยสำคัญของยีนเหล่านี้พบในบรรทัดไวต่อ (FC ตั้งแต่จาก 2.7 กับ 3.8), ยกเว้น inoculation A. flavus (FC < 2) สูงการเปลี่ยนแปลงในนิพจน์ (FC > 2) สัมพันธ์กับ PRใบแสดงผลมากกว่ายีน oxidative ที่เกี่ยวกับความเครียดทั้งในข้าวโพดบรรทัด FC ตั้งแต่ 35.0 3,587.5 ในอดีตประเภท จาก 0.9 ถึง 10.9 สำหรับหลังการ PRm6 แสดงให้เห็นว่าค่าเหนี่ยวนำสูงสุดในบรรทัด CO354 ตั้งแต่ 3,417.1มี F. proliferatum inoculation เพื่อ 3,587.5 กับ inoculation A. flavusระหว่างความเครียด oxidative ยีน แมวถูกที่สุดอาจมีค่าตั้งแต่ 7.6 และ 10.9 ในไวต่อบรรทัดหลัง F. proliferatum และ F. subglutinans inoculation ตามลำดับ(Fig. 2A และ B บรรทัดไวต่อแสดงเหนี่ยวนำที่แข็งแกร่งที่ hpi 72 สำหรับยีนทั้งหมดเปรียบเทียบกับบรรทัดทน พบความแตกต่างที่ยิ่งใหญ่ที่สุดในนิพจน์ของ PRm6, proliferatum inoculation elicited สำหรับที่นี่ปฏิกิริยาที่เกือบ 70 ครั้งมากกว่าในไวต่อบรรทัดที่ในทน (3,417.1 เทียบกับ 49.7 ตามลำดับ) (Fig. 2A)PR1 มียีนอื่นขอเกิดในบรรทัด ไวต่อมี FC ที่มากกว่า 15 เท่าในกรณีของ F. subglutinans inoculation(639.2 เทียบกับ 41.9) และมากกว่าเกือบแปดครั้งหลังF. proliferatum inoculation (129.8 เทียบกับ 17.4) (Fig. 2A และ Bแม้อ่อนแอการเหนี่ยวนำของฝักที่เกิดขึ้นหลังจาก inoculation A. flavusในบรรทัดทน ค่า FC ได้สูงกว่า 10 เท่าใน CO354 ลักษณะทางพันธุกรรม (Fig. 2C)เปรียบเทียบการตอบสนองพืชเพื่อประเทศเชื้อราต่าง ๆการเปลี่ยนแปลงในยีนแข็งแกร่งได้โดยทั่วไปที่โดดเด่นหลังจากรักษา subglutinans F. ในทั้งศึกษาจีโนไทป์ (ฟิก2B) การศึกษานี้ Intriguingly บันทึกเพิ่มเติมมากที่สุดเจริญเติบโตในเมล็ดข้าวโพด ทีวีจอแบนโดยนับที่แน่นอนของการcalmodulin ยีน (Fig. 1) อย่างไรก็ตาม สูงส่วนต่างในการเหนี่ยวนำยีนระหว่างศึกษาจีโนไทป์ได้สังเกตหลังจาก F. proliferatum และA. flavus ประเทศ ยกเว้น PR1 ซึ่งเป็นสูงมาก FC พบในเมล็ด CO354 inoculatedมี subglutinans เอฟการพิจารณาตอบรับขึ้นกลาโหม FCถูกวัด โดยการเปรียบเทียบตัวอย่างควบคุม (ตัวควบคุม CO441เทียบกับตัวควบคุม CO354) และ inoculated (เทียบกับ hpi CO441 72 ตัวอย่างHpi CO354 72) (Fig. 3) เป็นเรื่องน่าสนใจ ในตัวอย่างควบคุม การปรับปรุงมีวัดระดับนิพจน์ยีน assayedในบรรทัดทนก่อน inoculation เชื้อรา ความแตกต่างในนิพจน์ ผลลัพธ์มากขึ้นสำหรับยีน PR มากกว่าสำหรับยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียด oxidative มีค่าถึง 74.9สำหรับ PRm6, 16.7 สำหรับ PRm3, 7.84 สำหรับ PR1 และเป็น 3.90 สำหรับ PR5นอกจากนี้ยังพบ overexpression สำหรับยีนที่เหลือในควบคุมตัวอย่างของบรรทัดทน แม้ว่าอยู่ในระดับที่ต่ำกว่าตั้งแต่ 2.4 สำหรับฝัก 1.5 สำหรับสดตรวจสอบเปลี่ยนแปลง transcriptional ที่เกิดจากโรคยังโดยการเปรียบเทียบ ทน และไวต่อ inoculatedเมล็ด ทั่วไป การเหนี่ยวนำของ PR มีกำลังในการทนบรรทัด (Fig. 3) พบความแตกต่างมากสำหรับ PRm6 ในCO441 ตก CO354 ใน inoculation A. flavus ซึ่งทำให้เกิดค่าของนิพจน์ครั้ง 51.7 และ F. subglutinansและ F. proliferatum ระหว่าง 40.7 และ 3.4 ตามลำดับ ในทางตรงข้ามการที่ยีน PR นิพจน์ของยีน ROS scavenging ถูกผลกระทบโดยประเทศที่เชื้อรา (สด) หรือเป็นมากขึ้นในการไวต่อบรรทัด (POD ให้ APX แมว) เปรียบเทียบพืชป้องกันตอบ elicited โดยประเทศเชื้อราต่าง ๆ (Fig. 3),F. proliferatum ทำให้เกิดระเบียบคล้ายของ PR ในสองศึกษาจีโนไทป์ รวมยิ่งเกิด PR5 ในไวต่อบรรทัด (0.5) เมื่อเปรียบเทียบกับเชื้อราอื่น ๆ inoculation ด้วยF. proliferatum เกิดค่า FC ต่ำสำหรับ ROS scavengingยีนในบรรทัดทน แม้ว่า POD wasmore ลงระเบียบตอบ A. flavusระเบียบของ oxidative สถานะในการควบคุมและเมล็ด inoculatedมีขยายการศึกษาการป้องกันพืชที่แตกต่างโปรตีนและผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องกับความเครียด oxidative ที่assays ได้ดำเนินการ ในเดียวกันทน และไวต่อเมล็ดข้าวโพด โดยการเปรียบเทียบตัวอย่างควบคุม uninoculated และตัวอย่าง inoculated ที่ 72 hpi กับ F. proliferatum, F. subglutinansและ A. flavus เอนไซม์ที่เกี่ยวข้องรวม assays เอนไซม์ในระบบในระเบิด oxidative และล้าง พิษ ROS เช่น สด ให้ APXแมว cytosolic และผนังฝัก (PODc และ PODw ตามลำดับ),monodehydroascorbate reductase (MDHAR), dehydroascorbatereductase (ดาร์), และกลูตาไธโอน reductase (GR) ยอดเงินH2O2 พื้นผิว หรือผลิตภัณฑ์เอนไซม์เหล่านี้ และมีวัดดัชนีความเครียด oxidative contextually toMDA และGSH-ASC เนื้อหากิจกรรมเฉพาะของแมวในเมล็ด CO441 และ CO354แสดงในรูปที่ 4A ในเมล็ด uninoculated แมวก็อย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) แตกต่างจากเมล็ด inoculated ในศึกษาจีโนไทป์และเส้นทนพบมากเพิ่มเติมกิจกรรมแมว (166 เทียบกับ 35) หลังจาก inoculation กับโรคทั้งหมดเพิ่มขึ้นในเมล็ดของทั้งสองบรรทัดเปรียบเทียบกับ CATactivityควบคุม และความแตกต่างสูงสุดที่เกิดขึ้นหลังจาก inoculation A. flavusในรายการ CO441 และ F. subglutinans CO354 บรรทัดในบรรทัดทน แมวกิจกรรมก็สูงในสัมบูรณ์เงื่อนไข แม้ว่าการเพิ่มขึ้นมากกว่าที่เกิดขึ้นในบรรทัดไวต่อการFig. 1 คัดลอกหมายเลขของใบแสดงผลสำหรับ calmodulin ยีนขึ้นในเมล็ดของ CO441 ทน (กล่องสีเทา) และไวต่อ CO354 (กล่องขาว)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการตอบสนองการป้องกันพืชหลังจากที่เอฟ subglutinans เอฟ proliferatum, และ A. flavus วัคซีนได้รับการตรวจสอบในสองสายพันธุ์ข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ที่มีความต้านทานตัดกันเน่าหูที่CO441 ทนและCO354 สายข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ที่ไวต่อ การตอบสนองที่ได้รับการวิเคราะห์ที่72 hpi บนพื้นฐานของหลักฐานที่ได้รับในการทดลองก่อนหน้านี้ในที่ติดเชื้อverticillioides เอฟได้รับการตรวจสอบในช่วงเวลาหลักสูตรของ96 ชั่วโมงโดยการดำเนินการและการวิเคราะห์ microarrays RNA-Seq. เปิดใช้งานสูงสุดของกลไกการต้านทานเป็นข้อสังเกตที่ 72 HPI (Lanubile et al. 2012a, 2014). การประเมินผลการเจริญเติบโตของเชื้อราบน CO441 และจีโนไทป์ข้าวโพด CO354. การเจริญเติบโตของเอฟ proliferatum, subglutinans เอฟและเอ flavus ได้รับการวิเคราะห์ที่ 72 hpi ในเมล็ดข้าวโพดโดยรอบการฉีดวัคซีนจุดโดยปริมาณที่แน่นอนของ calmodulin หลักฐานผ่านแบบ real-time RT-PCR สำหรับเชื้อราทั้งหมด assayed ชนิดเมล็ดเชื้อของเส้นข้าวโพดทนแสดงให้เห็นการเติบโตที่ลดลงอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของเชื้อโรคเปิดเผยโดยจำนวนสำเนาล่างของยีนทำความสะอาด(รูปที่ 1). ในโดยเฉพาะอย่างยิ่งจำนวนสำเนาแน่นอนเป็น 1.33 เท่าสูงใน CO354 เมื่อเทียบกับ CO441 หลังจากฉีดวัคซีนเอฟ proliferatum, 1.54 เท่าสูงหลังจากการฉีดวัคซีนเอฟ subglutinans และ 1.70 เท่าสูงหลังจากการฉีดวัคซีน A. flavus เอฟ subglutinans ปรากฏจะเป็นเชื้อโรคที่ขยายตัวขึ้นอย่างรวดเร็วในเมล็ดข้าวโพด(2050 กับ 3163 ใน CO441 และ CO354 ตามลำดับ) ตามโดยเอฟproliferatum (1013 กับ 1352) และ A. flavus (482 กับ 818) . กฎระเบียบของการประชาสัมพันธ์และการออกซิเดชั่ยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดก่อนและหลังการฉีดวัคซีนเชื้อรา. ระดับการแสดงออกของยีนยีนประชาสัมพันธ์และการปกป้องจากความเครียดออกซิเดชันวัดในแบบ real-time RT-PCR ยีน assayed ประกอบด้วย PR5, PRm6, PRm3, PR1, POD, CAT, SOD และ APX รายละเอียดการแสดงออกของพวกเขาจะมีการรายงานในรูปที่ 2 เป็นการเปลี่ยนแปลงเท่า(ซี) ในเนื้อหาของบันทึกของเมล็ดเชื้อมากกว่าการควบคุมuninoculated ยีน assayed ทั้งหมดได้รับการขึ้นควบคุมในทั้งสองเส้นข้าวโพดหลังจากฉีดวัคซีนเชื้อราสายพันธุ์ที่มีทั้งหมด. ยกเว้นถูกตั้งข้อสังเกตสำหรับ POD หลังจากฉีดวัคซีน A. flavus (เอฟซี = 0.9) (รูป. 2C) และสำหรับการ APX และยีน SOD สำหรับเชื้อราทุกการฉีดวัคซีนในสายทน (เอฟซี£ 2) inductions ที่สําคัญของยีนเหล่านี้ถูกตรวจพบในสายความอ่อนไหว(เอฟซีตั้งแต่2.7-3.8) ยกเว้นสำหรับการฉีดวัคซีน A. flavus (เอฟซี <2) ที่สูงขึ้นการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออก (เอฟซี> 2) มีความสัมพันธ์กับการประชาสัมพันธ์ใบรับรองผลการเรียนมากกว่ายีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชันทั้งในสายข้าวโพดกับเอฟซีตั้งแต่35.0 3,587.5 ไปสำหรับอดีตหมวดหมู่และ0.9-10.9 สำหรับหลังหนึ่ง PRm6 แสดงให้เห็นสูงสุดค่าการเหนี่ยวนำในสายCO354 ตั้งแต่ 3,417.1 กับเอฟ proliferatum การฉีดวัคซีนที่จะฉีดวัคซีนกับ 3,587.5 A. flavus. ท่ามกลางยีน oxidative ความเครียดกสทเป็นผู้ชักนำให้เกิดมากที่สุดที่มีค่าตั้งแต่7.6 และ 10.9 ในไวต่อสายหลังจากF . proliferatum และการให้วัคซีนเอฟ subglutinans ตามลำดับ(รูป. 2A และ B) บรรทัดที่แสดงให้เห็นความเสี่ยงที่เหนี่ยวนำที่แข็งแกร่งที่ 72 hpi ยีนทั้งหมดในการเปรียบเทียบกับสายทน ที่ยิ่งใหญ่ที่สุดความแตกต่างที่พบในการแสดงออกของ PRm6 ซึ่งการฉีดวัคซีนเอฟ proliferatum ออกมาเป็นปฏิกิริยาเกือบ70 ครั้งที่สูงขึ้นในสายที่อ่อนแอกว่าในหนึ่งทน(เทียบกับ 3,417.1 49.7 ตามลำดับ) (รูป. 2A). PR1 เป็น ยีนอื่นเหนี่ยวนำอย่างยิ่งในสายไวต่อการที่มีเอฟซี15 ครั้งมากขึ้นในกรณีที่มีการฉีดวัคซีนเอฟ subglutinans (639.2 เทียบกับ 41.9) และเกือบแปดครั้งมากขึ้นหลังจากที่เอฟ การฉีดวัคซีน proliferatum (129.8 เทียบกับ 17.4) (รูป. 2A และ B). แม้จะมีการเหนี่ยวนำที่อ่อนแอของ POD เกิดขึ้นหลังจากการฉีดวัคซีน A. flavus ในสายทน, ค่าเอฟซี 10 เท่าสูงในจีโนไทป์CO354 (รูป. 2C) การเปรียบเทียบการตอบสนองของพืชที่จะฉีดวัคซีนเชื้อราที่แตกต่างกันการเปลี่ยนแปลงที่แข็งแกร่งในการแสดงออกของยีนที่ได้รับโดยทั่วไปให้ความสำคัญหลังการรักษาเอฟsubglutinans ในยีนทั้งสอง (รูป. 2B) น่าเชื้อโรคนี้บันทึกส่วนใหญ่ขยายการเจริญเติบโตในเมล็ดข้าวโพดดังกล่าวโดยปริมาณที่แน่นอนของยีนcalmodulin (รูปที่ 1). แต่ความแตกต่างที่สูงขึ้นในการเหนี่ยวนำยีนระหว่างยีนถูกตั้งข้อสังเกตหลังจากที่เอฟ proliferatum และเอ flavus วัคซีนมีข้อยกเว้นของ PR1 สำหรับที่เอฟซีที่สูงมากขึ้นถูกตรวจพบในเมล็ดCO354 เชื้อกับเอฟsubglutinans. เพื่อพิจารณาการตอบสนองการป้องกันส่วนประกอบที่เอฟซีโดยวัดจากการเปรียบเทียบตัวอย่างการควบคุม (ควบคุม CO441 กับการควบคุม CO354) และตัวอย่างเชื้อ (CO441 72 hpi กับCO354 72 HPI) (รูป. 3) ที่น่าสนใจในตัวอย่างควบคุมที่เพิ่มระดับการแสดงออกวัดสำหรับยีน assayed ในสายทนก่อนที่จะฉีดวัคซีนเชื้อรา ความแตกต่างในผลการแสดงออกได้มากขึ้นสำหรับยีนประชาสัมพันธ์กว่าสำหรับยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชันมีค่าถึง74.9 สำหรับ PRm6 16.7 สำหรับ PRm3, 7.84 สำหรับ PR1 และ 3.90 สำหรับ PR5. Overexpression ที่ตรวจพบยังสำหรับยีนที่เหลืออยู่ในตัวอย่างการควบคุมของสายทนแม้จะอยู่ในระดับที่ต่ำกว่าตั้งแต่ 2.4 สำหรับ POD 1.5 สำหรับ SOD. การเปลี่ยนแปลงการถอดรหัสพันธุกรรมที่เกิดจากเชื้อโรคที่ถูกตรวจสอบด้วยโดยการเปรียบเทียบเชื้อทนและอ่อนไหวเมล็ด โดยทั่วไป, การเหนี่ยวนำของยีนประชาสัมพันธ์แข็งแรงในสายทน(รูปที่. 3) ความแตกต่างที่ยิ่งใหญ่ถูกพบใน PRm6 CO441 เทียบกับ CO354 ซึ่งในการฉีดวัคซีน A. flavus เหนี่ยวนำให้เกิดมูลค่าการแสดงออกได้ถึง 51.7 เท่าและเอฟ subglutinans และเอฟ proliferatum ถึง 40.7 และ 3.4 ตามลำดับ ในทางตรงกันข้ามยีนประชาสัมพันธ์การแสดงออกของยีนขับ-ROS ได้รับผลกระทบจากการฉีดวัคซีนเชื้อรา(SOD) หรือเป็นมากขึ้นในแนวความอ่อนไหว(POD, APX กสท) การเปรียบเทียบการป้องกันพืชตอบสนองออกมาโดยการฉีดวัคซีนเชื้อราที่แตกต่างกัน (รูปที่. 3), เอฟ proliferatum ทำให้เกิดการควบคุมของยีนที่คล้ายกันประชาสัมพันธ์ในสองสายพันธุ์ไม่รวมPR5 เหนี่ยวนำให้เกิดมากขึ้นในการที่อ่อนแอเส้น(0.5) ในการเปรียบเทียบกับเชื้อราอื่น ๆ การฉีดวัคซีนกับเอฟ proliferatum เหนี่ยวนำต่ำกว่าค่าเอฟซีสำหรับการขับ-ROS ยีนในสายทนแม้ว่า POD wasmore ควบคุมลงในการตอบสนอง A. flavus. กฎระเบียบของสถานะออกซิเดชันในการควบคุมและเมล็ดเชื้อ. การศึกษาการตอบสนองการป้องกันพืชที่แตกต่างกันที่ยื่นออกไปโปรตีนและผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชัน ตรวจได้ดำเนินการเกี่ยวกับความเสี่ยงที่เดียวกันและทนเมล็ดข้าวโพดโดยการเปรียบเทียบตัวอย่างการควบคุม uninoculated และตัวอย่างเชื้อที่72 hpi กับเอฟ proliferatum, subglutinans เอฟและเอflavus ตรวจเอนไซม์รวมเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องในการออกมาออกซิเดชันและในการล้างสารพิษอนุมูลอิสระเช่น SOD, APX, กสท cytosolic และ PODs ผนัง (PODc และ PODw ตามลำดับ) reductase monodehydroascorbate (MDHAR) dehydroascorbate reductase (ดาห์ร) และ reductase กลูตาไธโอน (GR) จำนวนเงินของ H2O2 พื้นผิวหรือผลิตภัณฑ์ของเอนไซม์เหล่านี้และดัชนีของความเครียดออกซิเดชันวัดtoMDA บริบทและเนื้อหาGSH-ASC. กิจกรรมเฉพาะของกสท. ในเมล็ด CO441 และ CO354 จะแสดงในรูปที่4A ในเมล็ด uninoculated ผลกสท. ได้อย่างมีนัยสำคัญ(P <0.001) แตกต่างจากเมล็ดเชื้อในทั้งสองสายพันธุ์และสายทนมากขึ้นแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมที่กสท. (166 เทียบกับ 35) หลังจากการฉีดวัคซีนที่มีเชื้อโรคทุกCATactivity ที่เพิ่มขึ้นในเมล็ดของทั้งสองสายในการเปรียบเทียบกับการควบคุมและความแตกต่างที่ยิ่งใหญ่ที่สุดที่เกิดขึ้นหลังจากการฉีดวัคซีนA. flavus สำหรับสาย CO441 และหลังเอฟ subglutinans สำหรับสาย CO354. ในบรรทัดที่ทนผลกิจกรรม CAT สูง แน่นอนในแง่แม้ว่าจะเพิ่มขึ้นมากขึ้นที่เกิดขึ้นในสายอ่อนแอ. รูป 1. สำเนาจำนวนใบแสดงผลสำหรับ calmodulin ยีนที่เป็นส่วนประกอบในเมล็ดของ CO441 ทน (กล่องสีเทา) และไวต่อ CO354 (กล่องสีขาว)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลของพืชป้องกันการตอบสนองหลังจาก subglutinans
F . F . A . flavus และ proliferatum
, Inoculations ถูกตรวจสอบใน 2 ข้าวโพดพันธุ์
ที่มีความต้านทานเน่าหูตัด , co441 ต้านทานและอ่อนแอ co354
( สาย การตอบสนองของซีรั่มที่
72 ชั่วโมงขึ้นอยู่กับหลักฐานได้ในการทดลองก่อนหน้านี้ในการติดเชื้อที่ verticillioides กับ F .

ถูกตรวจสอบผ่านเวลาหลักสูตร 96 ชั่วโมง โดยการแสดงการแสดงและการวิเคราะห์ seq RNA .
เปิดใช้งานสูงสุดของกลไกความต้านทานพบ
72 HPI ( lanubile et al . 2012a 2014 ) .
การประเมินผลของเชื้อราในข้าวโพดพันธุ์ co354 และ co441
.
การเจริญเติบโตของ proliferatum F , F . subglutinans , และ A . flavus
ซีรั่มที่ 72 ชั่วโมง ในข้าวโพดเมล็ดรอบจุด (
,โดยปริมาณที่แน่นอนของการผ่าตัดช่องคลอด
หลักฐานผ่านเทคนิคแบบเรียลไทม์ สำหรับปริมาณเชื้อรา
ชนิด , พืชเมล็ดของข้าวโพดทนสายพบ
อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติลดการเจริญเติบโตของเชื้อโรค เปิดเผยโดย
ลดจำนวนชุดของยีนแม่บ้าน ( รูปที่ 1 ) ใน
โดยเฉพาะหมายเลขคัดลอกสัมบูรณ์คือ 1.33 เท่าสูงกว่าใน
co354 เมื่อเทียบกับ co441 หลังจาก Fproliferatum เชื้อ
154 ครั้งสูงกว่าหลัง F . subglutinans เชื้อและ 1.70
ครั้งสูงขึ้นหลังจากเชื้อเชื้อรา A . F . subglutinans ปรากฏ
เป็นเชื้อโรคที่เติบโตขึ้นอย่างรวดเร็วในข้าวโพดเมล็ด
( 2050 กับ 3163 ใน co441 และ co354 ตามลำดับ ) ตาม
โดย F . proliferatum ( 1013 และกำ ) และ A . flavus ( 482 กับ 818 ) .
ระเบียบของ PR และ oxidative ความเครียดและยีนที่เกี่ยวข้อง
ก่อนและหลังของ Inoculations .
ระดับการแสดงออกของยีนยีน PR และปกป้องจากวัดนี้
ความเครียดออกซิเดชันในแบบเรียลไทม์
มีปริมาณยีนใน pr5 prm6 prm3 pr1 , , , , ฝัก , แมว ,
SOD และ APX . โปรไฟล์ของการแสดงออกของพวกเขารายงานในรูป 2
พับเปลี่ยน ( FC ) ในบันทึกเนื้อหาของเมล็ดมากกว่าการปลูก
การควบคุมทั้งหมดปริมาณยีนคา
ข้าวโพดทั้ง 2 เส้น หลังจาก Inoculations เชื้อราทุกสายพันธุ์ ยกเว้นมีสังเกตสำหรับ

( A . flavus ฝักหลังจากใส่ FC = 0.9 ) ( รูปที่ 2 ) และยีน APX และ SOD ( เชื้อรา
ทั้งหมดในเส้นแนวต้าน ( เอฟซี ง 2 ) ที่สำคัญผสม
ของยีนเหล่านี้ถูกตรวจพบในบรรทัดที่อ่อนแอ ( FC ตั้งแต่
จาก 2.7 ถึง 3.8 ) ยกเว้น .เชื้อรา เชื้อ ( เอฟซี < 2 ) การเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกที่สูง
FC > 2 ) ที่เกี่ยวข้องกับ pr
ใบมากกว่าความเครียดออกซิเดชันและยีนที่เกี่ยวข้องกับทั้ง
ข้าวโพด บรรทัด กับ ชลบุรี เอฟซี ตั้งแต่ 35.0 เพื่อ 3587.5 สำหรับประเภทอดีต
และจาก 0.9 จะช่วยให้หนึ่งหลัง . prm6 พบ
ค่าสูงสุดในการนำ co354 สายตั้งแต่ 3417.1
กับ F . proliferatum เชื้อเพื่อ 3587.5 กับ .เชื้อรา เชื้อ
ระหว่างยีนเครียดออกซิเดชัน , แมวมากที่สุดคือ เหนี่ยว
ที่มีค่าตั้งแต่ 7.6 , 10.9 ในบรรทัดและไว
หลังจาก F . proliferatum และ f . subglutinans เชื้อตามลำดับ
( รูปที่ 2A และ B ) สายไวพบ
induction แข็งแกร่งที่ 72 ชั่วโมงสำหรับยีนในการเปรียบเทียบกับ
สายทน ความแตกต่างที่ยิ่งใหญ่ที่สุดที่พบในการแสดงออกของ prm6
,ที่ F (
proliferatum โดยใช้ปฏิกิริยาเกือบ 70 เท่าสูงกว่าในบรรทัดที่อ่อนแอกว่า
ใน m ( 3417.1 และ 49.7 ตามลำดับ ) ( รูปที่ 2A )
pr1 ยีนอื่นขอนำสายพันธุ์
กับ FC , 15 ครั้งมากขึ้นในกรณีของ subglutinans (
( F 639.2 vs 41.9 ) และเกือบแปดครั้งมากขึ้นหลังจาก
Fproliferatum เชื้อ ( 129.8 กับสินค้า ) ( รูปที่ 2A และ b )
ถึงแม้การอ่อนแอของฝักเกิดขึ้นหลังจากที่ A . flavus (
ในสายป้องกัน ค่า FC สูงกว่า 10 เท่า
ใน co354 จีโนไทป์ ( รูปที่ 2 ) .
เปรียบเทียบพืชตอบสนอง Inoculations เชื้อรา
แข็งแกร่งการเปลี่ยนแปลงในการแสดงออกที่แตกต่างกัน ยีนโดยทั่วไป
แนะนำหลังการรักษา subglutinans ทั้งสองพันธุ์ ( รูป
F2B ) ฟังดู เชื้อโรคนี้บันทึกส่วนใหญ่ขยาย
การเจริญเติบโตในเมล็ด ข้าวโพด ตามที่ระบุ โดยปริมาณที่แน่นอนของ
คาลโมดูลินยีน ( รูปที่ 1 ) อย่างไรก็ตาม , อุดมความแตกต่างในยีนระหว่างจีโนไทป์
เหนี่ยวพบหลังจาก F . proliferatum
A . flavus และ Inoculations ด้วยข้อยกเว้นของ pr1 , ซึ่งเป็น ชลบุรี เอฟซี ที่ตรวจพบในการยกระดับมากขึ้น

กับเมล็ด co354 เชื้อ F .subglutinans .
เพื่อพิจารณาการตอบสนองการป้องกัน และ เอฟซี
วัดโดยการเปรียบเทียบตัวอย่างควบคุม ( co441 ควบคุม
และควบคุม co354 ) และเชื้อตัวอย่าง ( co441 72 ชั่วโมงกับ
co354 72 ชั่วโมง ) ( รูปที่ 3 ) แต่ในตัวอย่างควบคุม ปรับปรุง
ระดับการแสดงออกและวัดสำหรับปริมาณยีน
ในบรรทัดก่อนที่วัคซีนป้องกันเชื้อรา ความแตกต่าง
ในการแสดงผลสูง PR ยีนกว่า
สำหรับยีนที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชัน ด้วยค่าถึง 74.9
สำหรับ prm6 16.7 สำหรับ prm3 7.84 , สำหรับ pr1 และ 3.90 สำหรับ pr5 .
overexpression ยังตรวจพบยีนที่เหลือใน
ตัวอย่างควบคุมสายป้องกัน แม้ว่าในระดับล่าง
ตั้งแต่ จาก 2.4 ฝัก 1.5
สดลองเปลี่ยนแปลงที่เกิดจากเชื้อโรคที่ยังศึกษา โดยเปรียบเทียบกันไว

ปลูกเมล็ด โดยทั่วไปการทำงานของยีน PR แข็งแกร่งใน
เส้นแนวต้าน ( รูปที่ 3 ) พบความแตกต่างมากขึ้นสำหรับ prm6 ใน
co441 เมื่อเทียบกับ co354 ซึ่งใน A . flavus (
) ค่าของตนเองและแสดงออกถึงเวลา subglutinans
F และ Fproliferatum ถึง 40.7 และ 3.4 ตามลำดับ ในทางตรงกันข้าม
PR ยีน , การแสดงออกของยีนการรอสถูกผลกระทบ
โดย Inoculations รา ( SOD ) หรือมากกว่าใน
สายไว ( ฝัก APX , แมว ) เปรียบเทียบพืชป้องกัน
คำตอบโดยใช้เชื้อราต่าง ๆ Inoculations ( รูปที่ 3 ) ,
F . proliferatum ให้เกิดระเบียบที่คล้ายกันของ PR ยีนสองชนิด
,ไม่รวมเพิ่มเติมจาก pr5 ในบรรทัดที่อ่อนแอ
( 0.5 ) ในการเปรียบเทียบกับเชื้อรา อื่น ๆ , การ proliferatum
F ) ต่ำกว่าค่า FC สำหรับผลตอบแทนการ
ยีนในแนวป้องกัน แต่พอด wasmore ลงระเบียบในการตอบสนองต่อ A . flavus
.
ระเบียบสภาพออกซิเดชันในการควบคุมเชื้อ

และเมล็ดการศึกษาพืชป้องกันการตอบสนองความแตกต่างคือขยาย
โปรตีนและผลิตภัณฑ์ที่เกี่ยวข้องกับความเครียดออกซิเดชัน
) ทำการทดลองในเดียวกันไวและทน
เมล็ด ข้าวโพด โดยเปรียบเทียบกับตัวอย่างควบคุมและตัวอย่างการปลูกที่ 72 ชั่วโมงด้วย

subglutinans proliferatum F , F . , และ A . flavus . หรือเอนไซม์ เอนไซม์ที่เกี่ยวข้อง
รวมในระเบิดและเกิดใน รอส ล้างพิษ เช่น SOD , APX
, แมว , cytosolic และผนังฝัก ( podc และ podw ตามลำดับ ) ,
monodehydroascorbate เตส ( mdhar ) เกร็ดเล็กเกร็ดน้อย
รีดักเทส ( Dh ā r ) , และ กลูต้าไธโอนรีดักเทส ( GR ) จํานวน
ของ H2O2 , พื้นผิวหรือผลิตภัณฑ์เอนไซม์เหล่านี้ , และ
ดัชนีความเครียดออกซิเดชันและวัดแล้วจะ tomda และ

gsh-asc เนื้อหากิจกรรมเฉพาะของแมวใน co441 และเมล็ด co354 คือ
แสดงในรูปที่ 4 . ใส่เมล็ดผลแมวถูก
อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p < 0.001 ) แตกต่างจากเชื้อทั้ง 2 สายพันธุ์ และเมล็ดใน
สายป้องกัน พบมากขึ้น
แมวกิจกรรม ( 166 vs . 35 ) หลังการฉีดวัคซีนกับเชื้อโรค ,
catactivity เพิ่มขึ้นในเมล็ดของทั้งสองสายในการเปรียบเทียบกับ
ควบคุมและความแตกต่างที่ยิ่งใหญ่ที่สุดเกิดขึ้นหลังจาก A . flavus (
สำหรับ co441 บรรทัดและหลังจาก F . subglutinans สำหรับ co354 บรรทัด .
ในแนวป้องกัน แมวกิจกรรมผลสูงกว่าในแง่แน่นอน
แม้ว่าจะเพิ่มมากขึ้น ที่เกิดขึ้นในบรรทัดที่อ่อนแอ .
รูปที่ 1จำนวนสำเนาของยีนในแคลโมดูลินยีนและในเมล็ดของ co441 ทน ( กล่องเทา ) และเสี่ยง co354 ( กล่องขาว )