Method Development for Bacterial Ex

Method Development for Bacterial Extracts

The LC-MS/MS method described previously, having been validated with respect to its performance for purified metabolites, was tested on bacterial cell extracts (exponential phase). Extracts from bacteria grown both in unlabeled (12C-) and (with appropriate modification of the SRMs to account for the molecular weight increase) 13C-glucose were tested. Approximately 50% of the metabolites failed to give a specific and reproducible signal from the bacterial cell extracts, indicating that many of these metabolites are present in the bacterial extracts in low amounts. For a smaller number of metabolites, interfering peaks arising from other biological materials were present either in 12C- or in 13C-grown bacterial extracts and precluded reliable analysis. Therefore, analysis of bacterial extracts focused on 36 compounds for which both 12C- and 13C-grown cells showed readily detectable peaks without interferences. A method involving 72 SRMs corresponding to the 12C- and 13C-forms of these 36 metabolites (divided as described previously into segments) was developed accordingly.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การพัฒนาวิธีการสารสกัดจากแบคทีเรียวิธี LC-MS / MS อธิบายไว้ก่อนหน้าได้รับการตรวจสอบเกี่ยวกับการดำเนินงานสารบริสุทธิ์ได้รับการทดสอบสารสกัดจากเซลล์แบคทีเรีย (ระยะชี้แจง) สารสกัดจากแบคทีเรียเติบโตทั้งในที่ไม่มีป้ายกำกับ (12C-) และ (มีการปรับเปลี่ยนตามความเหมาะสมของ SRMs บัญชีสำหรับการเพิ่มขึ้นของน้ำหนักโมเลกุล) 13C กลูโคสได้รับการทดสอบ ประมาณ 50% ของสารที่ล้มเหลวในการให้สัญญาณที่เฉพาะเจาะจงและทำซ้ำได้จากสารสกัดจากเซลล์แบคทีเรียแสดงให้เห็นว่าจำนวนมากของสารเหล่านี้มีอยู่ในสารสกัดจากแบคทีเรียในปริมาณต่ำ สำหรับจำนวนของสารที่มีขนาดเล็กยอดรบกวนที่เกิดจากวัสดุทางชีวภาพอื่น ๆ อยู่ในปัจจุบันทั้งใน 12C- หรือสารสกัดจากแบคทีเรีย 13C ปลูกและจรรยาบรรณการวิเคราะห์ที่เชื่อถือได้ ดังนั้นการวิเคราะห์ของสารสกัดจากแบคทีเรียที่มุ่งเน้นไปที่ 36 สารประกอบที่ทั้ง 12C- และ 13C ปลูกเซลล์แสดงให้เห็นว่ายอดที่ตรวจพบได้อย่างง่ายดายโดยไม่ต้องรบกวน วิธีการที่เกี่ยวข้องกับ 72 SRMs สอดคล้องกับ 12C- 13C และรูปแบบของสารเหล่านี้ 36 (แบ่งตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้เป็นส่วน) ได้รับการพัฒนาตาม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพัฒนาวิธีการสกัดจากแบคทีเรีย

วิธีอินซูลิน MS ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ มีการตรวจสอบเกี่ยวกับประสิทธิภาพของสารสกัดบริสุทธิ์ ถูกทดสอบในเซลล์แบคทีเรีย ( ระยะ exponential ) สารสกัดจากแบคทีเรียที่เติบโตขึ้นทั้งในใกล้เคียง ( 12C - ) และ ( มีการปรับเปลี่ยนที่เหมาะสมของ srms เพื่อให้บัญชีเพิ่มน้ำหนักโมเลกุล 13C กลูโคสผสมอยู่ประมาณ 50% ของสารล้มเหลวที่จะให้สัญญาณที่เฉพาะเจาะจงและถอดแบบจากสารสกัดเซลล์แบคทีเรีย ระบุว่า หลายสายพันธุ์เหล่านี้มีอยู่ในสารสกัดที่มีปริมาณต่ำ . สำหรับจำนวนขนาดเล็กของ metabolitesรบกวนยอดที่เกิดจากวัสดุทางชีวภาพอื่น ๆที่เป็นปัจจุบันทั้งใน 12C หรือปลูกสารสกัดจากแบคทีเรียใน 13C ลบการวิเคราะห์ที่เชื่อถือได้ ดังนั้น การวิเคราะห์สารสกัดจากแบคทีเรียเน้น 36 ( ซึ่งทั้งสอง 12C - 13C โตเซลล์ พบตรวจพบได้อย่างง่ายดายโดยไม่มีการแทรกแซงยอด .วิธีการที่เกี่ยวข้องกับ 72 srms สอดคล้องกับ 12C 13C และรูปแบบเหล่านี้ 36 หลายชนิด ( แบ่งตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในกลุ่ม ) ที่ถูกพัฒนาขึ้นตาม