from CELPROGEN (Torrance, CA, USA).

from CELPROGEN (Torrance, CA, USA). Total RNA was extracted from
control and irradiated cells using TRIzol® reagent (Invitrogen, Carlsbad,
CA, USA), and the integrity of the isolated total RNAwasmeasuredwith
an Agilent Bioanalyzer 2100 RNA Nano kit (Agilent Technologies, Palo
Alto, CA, USA). Synthesis of target cRNA probes and hybridization
were performed using Agilent's Low RNA Input Linear Amplification
kit (Agilent Technologies) according to themanufacturer's instructions.
Briefly, each 1 μg of total RNA and T7 promoter primer mix were combined
and incubated at 65 °C for 10 min. The cDNA master mix (5×
first strand buffer; 0.1 M DTT, 10 mM dNTP mix, RNase-Out, and
MMLV-RT) was prepared and added to RNA and the primer mixture.
The samples were incubated at 40 °C for 2 h for reverse transcription
and double-stranded cDNA (dsDNA) synthesis, then terminated by incubating
at 65 °C for 15min. The transcriptionmastermixwas prepared
according to themanufacturer's protocol (4× transcription buffer, 0.1M
DTT,NTPmix, 50% PEG, RNase-Out, inorganic pyrophosphatase, T7-RNA
polymerase, and cyanine 3/5-CTP) and added to the dsDNA reaction
mixture, and incubated at 40 °C for 2 h for transcription of dsDNA. During
transcription–amplification,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จาก CELPROGEN (Torrance, CA, USA) รวม RNA
ถูกสกัดจากการควบคุมและเซลล์ฉายรังสีโดยใช้สารTRIzol® (Invitrogen, Carlsbad,
CA, USA) และความสมบูรณ์ของทั้งหมดที่แยก RNAwasmeasuredwith
Agilent Bioanalyzer 2100 RNA ชุดนาโน (Agilent Technologies, Palo
Alto, CA, USA) การสังเคราะห์โพรบเป้าหมายสีดำและผสมพันธุ์ได้ดำเนินการโดยใช้ของ Agilent ต่ำ RNA ป้อนข้อมูลเชิงเส้นขยายชุด(Agilent Technologies) ตามคำแนะนำ themanufacturer ของ. สั้น ๆ ในแต่ละ 1 ไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอรวมและผสมรองพื้นโปรโมเตอร์ T7 มารวมกันและบ่มที่65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที . ส่วนผสมหลัก cDNA (5 ×บัฟเฟอร์สาระแรก0.1 M DTT ผสม 10 มิลลิ dNTP, RNase ออกและMMLV-RT) จัดทำและเพิ่มให้กับอาร์เอ็นเอและมีส่วนผสมไพรเมอร์. กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงสำหรับการถอดความย้อนกลับและcDNA เกลียวคู่ (dsDNA) สังเคราะห์ยกเลิกแล้วโดยการบ่มที่65 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที transcriptionmastermixwas เตรียมตามโปรโตคอลthemanufacturer (4 ×บัฟเฟอร์ถอดความ 0.1M DTT, NTPmix 50% PEG, RNase-Out, pyrophosphatase นินทรีย์, T7-RNA โพลิเมอร์และ cyanine 3/5-CTP) และเพิ่มไปยังปฏิกิริยา dsDNA ส่วนผสม และบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงสำหรับการถอดความจาก dsDNA ในระหว่างการถอดความขยาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จาก celprogen ( Torrance , CA , USA ) อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก
ควบคุมและการฉายรังสีเซลล์โดยใช้ trizol ® Reagent ( Invitrogen ฮุสตัน
, CA , USA ) , และความสมบูรณ์ของการแยกรวม rnawasmeasuredwith
เป็นเลนต์ bioanalyzer 2100 RNA ชุดนาโน ( Agilent เทคโนโลยี Palo
อัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) การสังเคราะห์และ crna hybridization
เป้าหมายและการใช้ข้อมูลเชิงเส้น ( ด้านต่ำ RNA
Kit ( ด้านเทคโนโลยี ) ตามคำสั่งของผู้ผลิต .
สั้นอย่างละ 1 μกรัมของอาร์เอ็นเอทั้งหมด 6 กับ 7 สีรองพื้นผสมโปรโมเตอร์ร่วม
บ่มที่ 65 ° C 10 นาทีวิธี Master Mix ( 5 ×
แรก 0.1 M ส่วนสาระบัฟเฟอร์ ; 10 มม. dntp ผสม เลสออกแล้ว
mmlv-rt ) ถูกเตรียมและเพิ่ม RNA และไพรเมอร์ผสม .
ตัวอย่างที่อุณหภูมิ 40 องศา C 2 H สำหรับ
ถอดความย้อนกลับและดับเบิล stranded cDNA ( dsdna ) การสังเคราะห์แล้วยกเลิก โดยการแช่
65 ° C เป็นเวลา 15 นาที ใน transcriptionmastermixwas เตรียม
ตามขั้นตอนของผู้ผลิต ( 4 ×ถอดความบัฟเฟอร์ 0.1m
ส่วน ntpmix 50% เพ็ก เลสออก อนินทรีย์ pyrophosphatase t7-rna
polymerase ,และ cyanine 3 / 5-ctp ) และเพิ่มไปยัง dsdna ปฏิกิริยา
ส่วนผสมและอุณหภูมิ 40 องศา C 2 H สำหรับการถอดรหัสของ dsdna . ในการถอดรหัส (
) ,