A 12% separating gel and a 4% stack

A 12% separating gel and a 4% stacking gel were prepared for SDS–PAGE, followed by Coomassie Brilliant Blue R-250 staining. The gels were captured by an image analyzer (E-Box VX2 coupled with E-Capt software, Heidelberg, Germany) for protein bands quantitation. For two-dimensional electrophoresis, the desalted protein samples were resuspended in a lysis buffer at 350 lL (100 lg of protein) and applied onto IPG strips (18 cm, pH 4–7 Nonlinear IPG strip) (GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA). After rehydration, isoelectric focusing was conducted at 10,000 V for 60,000 V h. The equilibrated strips were then transferred onto a 10% SDS polyacrylamide slab gel (18 cm 18 cm), and the separated proteins were then visualised using the Typhoon 9200 laser scanner, and image data were analysed using ImageMaster 2D Platinum 7.0 Software Package .

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกเจและเจซ้อน 4% 12% ถูกเตรียมไว้สำหรับองค์กรหน้า แล้วตาม ด้วยย้อมสี Coomassie Brilliant Blue R-250 เจถูกจับ โดยการวิเคราะห์ภาพ (กล่อง E VX2 ที่ควบคู่กับ Capt อีซอ ไฮเดลเบิร์ก เยอรมนี) สำหรับการวิเคราะห์หาปริมาณโปรตีนวง สำหรับสอง electrophoresis ตัวอย่างโปรตีน desalted ได้ resuspended ในบัฟเฟอร์ lysis ที่ 350 จะ (100 แอลจีโปรตีน) และใช้บนแถบ IPG (18 ซม. แถบไม่เชิงเส้น IPG pH 4-7) (วิทยาศาสตร์สุขภาพสุขอนามัยการ GE พิตส์เบิร์ก PA) เน้น isoelectric ถูกดำเนินหลังจาก rehydration ที่ 10000 V สำหรับ 60000 V h ในแถบ equilibrated ได้แล้วโอนย้ายไป 10% SDS polyacrylamide พื้นเจ (18 ซม. 18 ซม.), โปรตีนที่แยกได้ visualised ใช้ลม 9200 เลเซอร์สแกนเนอร์แล้ว และข้อมูลภาพได้ analysed ใช้ ImageMaster 2D แพลทินัม 7.0 ซอฟต์แวร์แพคเกจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

12% แยกเจลและ 4% ซ้อนเจลกำลังเตรียมพร้อมสำหรับการ SDS-PAGE ตามด้วยการย้อมสีที่สว่างสดใส Coomassie สีน้ำเงิน R-250 เจลถูกจับโดยวิเคราะห์ภาพ (E-Box VX2 คู่กับซอฟแวร์ E-รไฮเดลเบิร์ก, เยอรมนี) หาปริมาณโปรตีนวงดนตรี สำหรับอิสองมิติตัวอย่างโปรตีน desalted ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์สลายที่ 350 LL (100 lg โทรศัพท์ของโปรตีน) และนำไปใช้บนแถบ IPG (18 ซมค่า pH 4-7 ไม่เชิงเส้นแถบ IPG) (GE Healthcare วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต, พิตส์เบิร์ก PA) หลังจากคืน, Isoelectric โฟกัสได้ดำเนินการที่ 10,000 60,000 V V ชั่วโมง แถบ equilibrated ถูกย้ายลงแล้ว 10% SDS polyacrylamide แผ่นเจล (18 ซม. 18 ซม) และโปรตีนที่แยกออกมาจากนั้นก็มองเห็นการใช้ไต้ฝุ่น 9200 เลเซอร์สแกนเนอร์และข้อมูลภาพที่ได้มาวิเคราะห์โดยใช้ ImageMaster 2D Platinum 7.0 ซอฟท์แวแพคเกจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทรายเย็นทรายเย็นทรายเย็น