Isolation and identification of bac

Isolation and identification of bacteriocin-producing lactic acid bacteria
Two different samples of boza from Belogratchik in the North-West of Bulgaria were screened for lactic acid bacteria that produce bacteriocins. Isolation of bacteriocinogenic lactic acid bacteria was as described by Todorov and Dicks [10]. Serial dilutions of the samples were made and plated onto MRS agar [11] supplemented with 50 mg l−1 Delvocid (Gist-brocades, B.V., Delft, The Netherlands). The colonies were covered with a second layer of MRS agar containing the same concentration Delvocid. The plates were incubated anaerobically (OXOID, Gas Generation Kit, Hampshire, England) at 30 °C for 48 h. Plates with 50 or less colonies were covered with semi-solid BHI (Merck, Darmstadt, Germany), inoculated with Lactobacillus casei LHS. The plates were then incubated for a further 24 h at 37 °C. Colonies producing inhibition zones were isolated, cultured in MRS broth and tested for antimicrobial activity by using the agar spot-test and the diffusion method, described by Schillinger and Lücke [12] and Tagg and McGiven [13]. The antimicrobial effect of lactic acid was eliminated by adjusting the pH of the supernatants to 6.0 with sterile 1N NaOH. Activity was expressed as arbitrary units (AU) ml−1. One AU was defined as the reciprocal of the highest serial two-fold dilution showing a clear zone of growth inhibition of the indicator strain [14].

Strains were identified based on carbohydrate fermentation reactions recorded with API 50 CHL (bio Merieux, France) and phenotypic characteristics described by Schillinger and Lücke [15] and Stiles and Holzapfel [16]. Further identification was by PCR-generated DNA banding patterns obtained with species-specific primers for Lactobacillus plantarum, Lactobacillus paracasei, Lactobacillus pentosus and Lactobacillus rhamnosus. The methods of Torriani et al. [17] and Ward and Timmins [18] were used. The spectrum of antimicrobial activity was recorded by using the agar-spot method, as described elsewhere. The indicator strains are listed in Table 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกและรหัสของแบคทีเรียกรดแลกติกผลิต bacteriocin
สองแตกต่างกันตัวอย่างของ boza จาก Belogratchik ใน North-West บัลแกเรียถูกฉายสำหรับแบคทีเรียกรดแลกติกที่ผลิต bacteriocins นั้น แยกของแบคทีเรียกรดแลคติ bacteriocinogenic ได้อธิบายไว้โดย Todorov Dicks [10] Dilutions ประจำอย่างที่ทำ และชุบบน MRS agar [11] เสริม ด้วย 50 mg Delvocid l−1 (เนื้อ brocades, B.V., Delft ประเทศเนเธอร์แลนด์) อาณานิคมถูกปกคลุม ด้วยชั้นที่สองของ MRS agar ที่ประกอบด้วยความเข้มข้นเดียวกัน Delvocid แผ่นที่ incubated anaerobically (OXOID ชุด อุปกรณ์สร้างแก๊ส แฮมเชียร์ อังกฤษ) ที่ 30 ° C สำหรับ 48 h แผ่นกับ 50 หรือน้อยอาณานิคมถูกปกคลุม ด้วยกึ่งแข็ง BHI (เมอร์ค ดาร์มส เยอรมนี), inoculated มีแลคโตบาซิลลัส casei LHS แผ่นได้แล้ว incubated สำหรับ 24 ชมเพิ่มเติมที่ 37 องศาเซลเซียส อาณานิคมผลิตยับยั้งโซนแยกต่างหาก อ่างในซุป MRS และทดสอบกิจกรรมจุลินทรีย์ โดยใช้ agar จุดทดสอบและวิธีการแพร่ อธิบาย โดย Schillinger และ Lücke [12] และ Tagg และ McGiven [13] ผลยับยั้งจุลินทรีย์ของกรดถูกตัดออก โดยการปรับ pH ของ supernatants กับ 6.0 กับกอซ 1N NaOH กิจกรรมถูกแสดงเป็น ml−1 หน่วยกำหนด (AU) AU หนึ่งถูกกำหนดเป็นส่วนกลับของที่สูงที่สุดประจำสองพับเจือจางแสดงโซนชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของพันธุ์บ่งชี้ [14]

สายพันธุ์ที่ระบุตามปฏิกิริยาการหมักคาร์โบไฮเดรตที่บันทึกกับ CHL 50 API (bio Merieux ฝรั่งเศส) และลักษณะไทป์โดย Schillinger และ Lücke [15] และ Stiles และ Holzapfel [16] ระบุเพิ่มเติมได้ โดย DNA PCR สร้างแถบลวดลายได้ ด้วยไพรเมอร์ species-specific สำหรับ plantarum แลคโตบาซิลลัส แลคโตบาซิลลัส paracasei Pentosus แลคโตบาซิลลัสและแลคโตบาซิลลัส rhamnosus มีใช้วิธี Torriani et al. [17] และ Ward Timmins [18] สเปกตรัมของกิจกรรมจุลินทรีย์ถูกบันทึกโดยวิธี agar จุด ตามที่อธิบายไว้ที่อื่น สายพันธุ์ตัวบ่งชี้มีการระบุไว้ในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกและจำแนกชนิดของแบคทีเรียผลิตกรดแลคติกแบคทีเรีย
สองตัวอย่างที่แตกต่างกันของ Boza จาก Belogratchik ในตะวันตกเฉียงเหนือของบัลแกเรียได้รับการคัดกรองแบคทีเรียแลกติกที่ผลิต bacteriocins การแยก bacteriocinogenic กรดแลคติกแบคทีเรียที่ได้รับการอธิบายว่าโดย Todorov และจู๋ [10] เจือจางอนุกรมของตัวอย่างที่ทำและชุบบน MRS agar [11] เสริมด้วย 50 mg L-1 Delvocid (สรุปสาระสำคัญ-brocades, BV, Delft, เนเธอร์แลนด์) โคโลนีที่ถูกปกคลุมไปด้วยชั้นที่สองของ MRS agar ที่มีความเข้มข้นเดียวกัน Delvocid แผ่นถูกบ่มแบบไม่ใช้อากาศ (OXOID, การสร้างก๊าซชุดนิวแฮมป์เชียร์อังกฤษ) ที่ 30 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง แผ่น 50 หรือน้อยกว่าอาณานิคมถูกปกคลุมไปด้วยกึ่งของแข็ง BHI (เมอร์ค, Darmstadt, เยอรมนี), เชื้อแลคโตบาซิลลัส Casei LHS แผ่นถูกบ่มแล้วอีก 24 ชั่วโมงที่ 37 องศาเซลเซียส อาณานิคมการผลิตโซนยับยั้งถูกแยกเลี้ยงในอาหาร MRS broth และทดสอบฤทธิ์ต้านจุลชีพโดยใช้จุดทดสอบอาหารเลี้ยงเชื้อและวิธีการแพร่อธิบายโดย Schillinger และLücke [12] และ Tagg และ McGiven [13] ผลต้านจุลชีพของกรดแลคติกที่ถูกกำจัดโดยการปรับค่าพีเอชของ supernatants 6.0 ที่มีการฆ่าเชื้อ 1N NaOH กิจกรรมที่ได้รับการแสดงเป็นหน่วยโดยพลการ (AU) มล-1 หนึ่งในออสเตรเลียถูกกำหนดเป็นกฎของการลดสัดส่วนที่สูงที่สุดอนุกรมสองเท่าแสดงโซนที่ชัดเจนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของตัวบ่งชี้สายพันธุ์ [14] สายพันธุ์ที่ถูกระบุขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาการหมักคาร์โบไฮเดรตบันทึกด้วย API 50 CHL (ไบโอ Merieux, ฝรั่งเศส) และ ลักษณะฟีโนไทป์อธิบายโดย Schillinger และLücke [15] และกั้นและ Holzapfel [16] ตัวต่อไปได้โดยวิธี PCR สร้างดีเอ็นเอรูปแบบแถบรับกับไพรเมอร์ชนิดที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ plantarum แลคโตบาซิลลัส, แลคโตบาซิลลัส paracasei แลคโตบาซิลลัส pentosus และแลคโตบาซิลลัส rhamnosus วิธีการของการ Torriani และคณะ [17] และวอร์ดและมิน [18] ถูกนำมาใช้ สเปกตรัมของฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้วิธี agar จุดตามที่กล่าวไว้ในที่อื่น สายพันธุ์ตัวบ่งชี้มีการระบุไว้ในตารางที่ 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกและจำแนกแบคทีเรียที่ผลิตกรดแลกติกต่อ
ที่แตกต่างกันสองตัวอย่างของ boza จาก belogratchik ในทางตะวันตกเฉียงเหนือของบัลแกเรียจากแบคทีเรียกรดแลคติกที่ผลิตวัตถุดิบ . การคัดแยกแบคทีเรียกรดแลคติก คือ bacteriocinogenic ตามที่อธิบายไว้โดย Todorov และจู๋ [ 10 ]อนุกรมของกลุ่มตัวอย่างและวิธีการทำชุบลงบนนางวุ้น [ 11 ] เติม 50 mg L − 1 เดลวอซิด ( เนื้อหา brocades ลดลง , เดลฟต์ , เนเธอร์แลนด์ ) อาณานิคมที่ถูกปกคลุมด้วยชั้นสองของนางวุ้นที่มีเดลวอซิดความเข้มข้นเดียวกัน จานถูกบ่มพ ( oxoid , รุ่นแก๊สชุด , Hampshire , อังกฤษ ) ที่ 30 ° C เป็นเวลา 48 ชั่วโมงแผ่นกับ 50 หรือน้อยกว่าอาณานิคมได้ถูกปกคลุมด้วยกึ่งแข็ง BHI ( เมอร์คดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี , เชื้อ Lactobacillus casei ) กับ LHS . จาน แล้วบ่มในอีก 24 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศา อาณานิคมการผลิตยับยั้งโซนมีแยกมาเลี้ยงในอาหาร MRS broth และทดสอบกิจกรรมการยับยั้งโดยใช้วุ้นจุดทดสอบ และการแพร่กระจายโดยอธิบายโดยชิลลีเงอร์และ L ü cke [ 12 ] และ tagg และ mcgiven [ 13 ] ผลการต้านจุลชีพของกรดแลคติกที่ถูกคัดออก โดยการปรับพีเอชของ supernatants 6.0 กับหมันกับ NaOH กิจกรรมที่แสดงเป็นหน่วยพล ( AU ) มล. − 1 หนึ่ง หรือ ถูกกำหนดเป็นส่วนกลับของ dilution สูงสุดด้านอนุกรมแสดงชัดเจน โซนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของตัวบ่งชี้ความเครียด [ 14 ] .

สายพันธุ์มีการระบุตามการเฟอร์เมนต์คาร์โบไฮเดรตการบันทึกกับ API 50 CHL ( ไบโอ merieux , ฝรั่งเศส ) และคุณสมบัติลักษณะที่อธิบายโดยชิลลีเงอร์และ L ü cke [ 15 ] และสไตล์ และ holzapfel [ 16 ] การสร้าง DNA โดยวิธี PCR ซึ่งเป็นแถบลวดลายได้ด้วยโดยเฉพาะ - ขยายพันธุ์เพื่อ paracasei Lactobacillus plantarum Lactobacillus ,Lactobacillus pentosus และ แลคโตบาซิลัส rhamnosus . วิธีการ torriani et al . [ 17 ] และวอร์ดและทิมมิน [ 18 ] ใช้ สเปกตรัมของฤทธิ์ต้านจุลชีพที่ถูกบันทึกไว้โดยใช้วุ้นจุดวิธีตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ตัวบ่งชี้สายพันธุ์อยู่ในตารางที่ 1