Potential structure destabilizing

Potential
structure destabilizing residues may be identified based upon the crystal structure
of the antibody, and the effect of the residues on antibody stability can be tested by
generating and evaluating variants having mutations in the identified residues.
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย 1, 2
or 3 amino acid substitutions at the VH linear residue positions 11, 55 หรือ 99.
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the 1, 2 หรือ 3 amino acid
substitutions at the VH linear residue positions are V11L, N55Q, N55A, N55E, M99L หรือ M99I.
30 The substitutions at the VH linear residue positions 11, 55 หรือ 99 may
improve antibody stability and/or enhance its อะโกนิสต์ic activity.
Amino acid substitutions can be done for example by PCR mutagenesis (US Pat. No. 4,683,195). Libraries of variants can be generated using well known


methods, for example using random (NNK) หรือ non-random codons, for example
DVK codons, which encode 11 amino acids (Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg,
Ser, Tyr, Trp) and screening the libraries for variants with desired properties.
Although the embodiments illustrated in the Examples ประกอบรวมด้วย pairs of 5 variable regions, one from a heavy chain and one from a light chain, a skilled
artisan will recognize that alternative embodiments may ประกอบรวมด้วย single heavy หรือ บริเวณ แปรผัน สายเบาs. The single variable region can be used to screen for variable domains capable of forming a two-domain specific antigen-binding
fragment capable of, for example, binding to ฮิวเมน CD134 having the sequence of 10 SEQ ID NO: 1. The screening may be accomplished by phage display screening
methods using for example hierarchical dual combinatorial approach disclosed in
Int. Pat. Publ. No. W01992/01047. In this approach, an individual colony
containing either a H หรือ L chain clone คือ used to infect a complete library of clones
encoding the other chain (L หรือ H), and the resulting two-chain specific antigen-
15 binding domain คือ selected in accordance with phage display techniques as
described. Therefore, the individual VH and VL โพลีเปปไทด์ chains are useful in
identifying additional antibodies specifically binding ฮิวเมน CD134 having the
sequence ของ SEQ ID NO: 1 using the methods disclosed in Int. Pat. Publ. No.
W01992/01047.
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the
HCDR1, the HCDR2 and the HCDR3 amino acid sequences
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the antibodies ซึ่งประกอบรวมด้วย certain heavy chain and light chain CDR sequences as described herein are ฮิวเมไนซ์, ฮิวเมน หรือ DelmmunizedTM antibodies.
ฮิวเมน หรือ deImmunizedTM antibodies can be made as described herein.
5 ฮิวเมไนซ์ antibodies typically refers to an antibody in which the antigen binding
site คือ derived from non-ฮิวเมน species and the variable region frameworks are
derived from ฮิวเมน immunoglobulin sequences. ฮิวเมไนซ์ antibodies may
รวมถึง substitutions in the framework regions so that the framework may not be
an exact copy of expressed ฮิวเมน immunoglobulin หรือ germline gene sequences. 10 ฮิวเมไนซ์ antibodies against CD134 may be generated for example in Balb/c mice
using standard methods. The antibodies made in Balb/c mice หรือ other non-ฮิวเมน
animals can be ฮิวเมไนซ์ using various technologies to generate more ฮิวเมน-like
sequences. Exemplary ฮิวเมนization techniques ที่รวมถึง selection of ฮิวเมน
acceptor frameworks are known to skilled in the art and รวมถึง CDR grafting
15 (U.S. Pat. No. 5,225,539), SDR grafting (U.S. Pat. No. 6,818,749), Resurfacing
(Palin, Mol Immunol 28:489-499, 1991), Specificity Determining Residues
Resurfacing (U.S. Pat. Publ. No. 2010/0261620), ฮิวเมน-adaptation (or ฮิวเมน
framework adaptation) (U.S. Pat. Publ. No. US2009/0118127), Super ฮิวเมนization
(U.S. Pat. No. 7,709, 226) and guided selection (Osborn et al., Methods 36:61-68,
20 2005; U.S. Pat. No. 5,565,332).
ฮิวเมไนซ์ antibodies can be further optimized to improve their selectivity หรือ affinity to a desired antigen by incorporating altered framework support
residues to preserve binding affinity (back mutations) by techniques such as those disclosed as described in Int. Pat. Publ. No. W01990/007861 and in Int. Pat. Publ.
25 No. W01992/22653.
Immune เอฟเฟคเตอร์ properties of the antibodies of the การประดิษฐ์ may be
modulated through Fc การดัดแปลง by techniques known to those skilled in the
art. For example, Fc เอฟเฟคเตอร์ functions such as Clq binding, complement
dependent cytotoxicity (CDC), antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity
30 (ADCC), phagocytosis, down regulation of cell surface รีเซปเตอร์ (e.g., B cell
รีเซปเตอร์; BCR), etc. can be modulated by modifying residues in the Fc responsible
for these activities through binding to activating Fc gamma รีเซปเตอร์ (FcyR) FcyRI,
FcyRIIa หรือ FcyRIII, หรือ to inhibitory รีเซปเตอร์ FcyRIIb. Pharmacokinetic properties






24
may also be enhanced by mutating residues in the Fc domain that extend antibody
half-life by modulating Fc binding affinity to the neonatal Fc รีเซปเตอร์ FcRn.
Exemplary Fc การดัดแปลง are IgG4 S228P/L234A/L235A, IgG2
M252Y/S254T/T256E (Dall'Acqua et al, J Biol Chem 281:23514-24, 2006); หรือ IgG2 5 V234A/G237A/P238S, V234A/G237AJH268Q, H268A/V309L/A330S/P331 หรือ
V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S (Intl. Pat. Publ. No.
W02011/066501), หรือ those described in US. Pat. No. 6,737,056 (residue numbering
according to the EU Index). Antibody Fc affinity to the inhibitory FcyRIIb may be
augmented to enhance antibody cross-linking and อะโกนิสต์ic signals. Exemplary Fc 10 การดัดแปลง that enhance Fc binding to the FcyRIIb are S267E/L328F and
E233D/G237D/H268D/P271G/A330R (residue numbering according to the EU Index).
Another embodiment of the การประดิษฐ์ คือ an isolated antibody that binds
ฮิวเมน CD134, ซึ่งประกอบรวมด้วย a บริเวณ แปรผัน สายเบา (VL) ของ SEQ ID NO: 98 and 15 a บริเวณ แปรผัน สายหนัก (VH) ซึ่งประกอบรวมด้วย heavy chain complementarity
determining regions (HCDR)s HCDR1, HCDR2 and HCDR3, optionally having 1, 2
or 3 amino acid substitutions in the VL ของ SEQ ID NO: 98.


SEQ ID NO: 98:
20 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNVVYQQKPGKAX5KLLIYYTSRL
HSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYX6CQQGNTLPWTFGQGTKVEIKR


โดยที่ X5 คือ V หรือ P; และ
X6 คือ F หรือ Y.
25 ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the
VH ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino acid sequence ของ SEQ ID NO: 134, optionally having 1, 2 หรือ 3 amino acid substitutions in the VH ของ SEQ ID NO: 134.


SEQ ID NO: 134
30 QVQLVQSGAEXIKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHVVVRQAPGQRLEWX2GYI
NPYNX3GTKYNEKFKGRX4TX5TSDXGSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYYGSS LSX7DYWGQGTLVTVSS;







25


โดยที่
X1 คือ V หรือ L; X2 คือ M หรือ I;
X3 คือ D, G, A, S หรือ E;
5 X4 คือ V หรือ A;
X5 คือ L หรือ I;
X6 คือ T หรือ K; และ X7 คือ M, L หรือ I
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the 10 VH ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino acid sequence ของ SEQ ID NO: 97, optionally having 1, 2
or 3 amino acid substitutions in the VH ของ SEQ ID NO: 97.


SEQ ID NO: 97:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHWVRQAPGQRLEWXIGYIN 15 PYNDGTKYNEKFKGRX2TX3TSDX4SASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYYGSSL
SMDYWGQGTLVTVSS;


โดยที่
Xi คือ I หรือ M;
20 X2 คือ A หรือ V;
X3 คือ L หรือ I; และ X4 คือ K หรือ T.
In some embodiment described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the VL ของ SEQ ID NO: 99 and the VH ของ SEQ ID NO: 134.
25 ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the
HCDR3 ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino the amino acid sequence ของ SEQ ID NO: 8, 139 หรือ 140.
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the
HCDR2 ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino the amino acid sequence ของ SEQ ID NO: 7, 135, 136,
30 137 หรือ 138.
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย the HCDR1 ประกอบรวมด้วย the amino acid sequence ของ SEQ ID NO: 6.
ในบาง รูปลักษณะ described herein, the isolated antibody ประกอบรวมด้วย







26
a. the VL ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino acid sequence ของ SEQ ID NO: 62 หรือ 63;
and
the VH ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino acid sequence ของ SEQ ID NOs; 64, 65, 66,
101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115,
5 116, 117, 118, 149, 150 หรือ 151, optionally having 1, 2 หรือ 3 amino acid
substitutions at the VH linear amino acid residue positions11, 56 หรือ 106;

Or
b. the VL and the VH ซึ่งประกอบรวมด้วย the amino acid sequences of
i. SEQ ID NOs; 62 and 64, ตามลำดับ;
10 ii. SEQ ID NOs; 62 and 65, ตามลำดับ;
iii. SEQ ID NOs; 62 and 66, ตามลำดับ; iv. SEQ ID NOs; 63 and 64, ตามลำดับ;
v. SEQ ID NOs; 63 and 65, ตามลำดับ; หรือ vi. SEQ ID NOs; 63 and 66, ตามลำดับ.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เป็นไปได้ อาจระบุโครงสร้าง destabilizing ตกตามโครงสร้างของผลึก แอนติบอดีที่ และผลของการตกแอนติบอดี เสถียรภาพสามารถทดสอบโดย สร้าง และประเมินตัวแปรที่มีการกลายพันธุ์ในตกระบุในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ แยกแอนติบอดีประกอบรวมด้วย 1, 2หรือ 3 แทนกรดอะมิโนที่สารตกค้างเส้น VH ตำแหน่ง 11, 55 หรือ 99ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ 1, 2 หรือ 3 กรดอะมิโนแทนที่ตำแหน่งตกค้างเส้น VH มี V11L, N55Q, N55A, N55E, M99L หรือ M99I30 การทดแทนที่ตำแหน่งตกค้างเส้น VH 11, 55 หรือ 99 อาจปรับปรุงเสถียรภาพแอนติบอดี หรือเพิ่มกิจกรรมของ อะโกนิสต์icกรดอะมิโนทดแทนโดยเช่น PCR mutagenesis (เราผัด หมายเลข 4,683,195) สามารถสร้างไลบรารีของตัวแปรโดยใช้รู้จักวิธีการ ตัวอย่าง การใช้สุ่ม (NNK) หรือไม่ใช่สุ่ม codons ตัวอย่างDVK codons ซึ่งเข้ารหัสกรดอะมิโน 11 (อลา Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn อาร์กิวเมนต์ของค่า Ser, Tyr, Trp) และการคัดกรองไลบรารีสำหรับตัวแปรที่มีคุณสมบัติที่ต้องการ แม้ว่า embodiments ที่แสดงในตัวอย่างคู่ประกอบรวมด้วย 5 ตัวแปรภูมิภาค จากโซ่หนักและจากสายไฟ การฝีมือศิลปินจะรู้จักว่า embodiments อื่นอาจประกอบรวมด้วยเดียวหรือหนักบริเวณแปรผัน สายเบาs สามารถใช้ตัวแปรภูมิภาคเดียวหน้าจอสำหรับโดเมนตัวแปรความสามารถในการขึ้นรูปเป็นสองโดเมนเฉพาะตรวจหาผูกส่วนความสามารถ เช่น ผูกฮิวเมน CD134 มีลำดับของเลขรหัสลำดับ 10:1. อาจดำเนินการคัดกรอง โดย phage แสดงคัดกรอง ลำดับสองปัญหาวิธีการเปิดเผยในตัวอย่างใช้วิธี ของดอกเบี้ย Pat หมายเลข publ. W01992/01047 ในวิธีการนี้ เป็นโคโลนีแต่ละ ประกอบด้วยทั้งเป็น H หรือ L โซ่โคลนคือใช้ในการติดเชื้อรีสมบูรณ์ของโคลน การเข้ารหัสอื่น ๆ สาย (L หรือ H), และผลลัพธ์สองโซ่เฉพาะตรวจหา-15 ผูกคือโดเมนที่เลือกตาม phage แสดงเทคนิคเป็น อธิบาย ดังนั้น การละ VH และ VL โพลีเปปไทด์โซ่มีประโยชน์ใน ระบุแอนตี้เพิ่มเติมเฉพาะผูกฮิวเมน CD134 มีการ ลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 1 โดยใช้วิธีการเปิดเผยใน Pat ของดอกเบี้ย หมายเลข publ. W01992/01047ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ประกอบรวมด้วยแยกแอนติบอดีHCDR1, HCDR2 และลำดับกรดอะมิโน HCDR3ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ การแอนตี้ซึ่งประกอบรวมด้วยบางหนักโซ่และโซ่ไฟ CDR ลำดับตามนี้คือ ฮิวเมไนซ์ ฮิวเมนหรือ DelmmunizedTM แอนตี้แอนตี้ deImmunizedTM หรือฮิวเมนสามารถทำได้ตามนี้แอนตี้ฮิวเมไนซ์ 5 โดยทั่วไปหมายถึงมีแอนติบอดีซึ่งรวมการตรวจหาไซต์คือมาจากสายพันธุ์ไม่ใช่ฮิวเมน และกรอบภูมิภาคแปรเป็น มาฮิวเมน immunoglobulin ลำดับ แอนตี้ฮิวเมไนซ์อาจ รวมถึงทดแทนในภูมิภาคกรอบให้กรอบอาจไม่ สำเนาแสดงฮิวเมน immunoglobulin หรือ germline ยีนลำดับ ฮิวเมไนซ์แอนตี้ที่ 10 กับ CD134 อาจจะสร้างตัวอย่างในหนู Balb/c ใช้วิธีการมาตรฐาน แอนตี้ใน Balb/c หนูหรืออื่น ๆ ไม่ใช่-ฮิวเมน สัตว์สามารถใช้เทคโนโลยีต่าง ๆ เพื่อสร้างเพิ่มเติมเช่นฮิวเมนฮิวเมไนซ์ ลำดับนั้น ฮิวเมนization โทษเทคนิคการที่รวมถึงตัวเลือกฮิวเมน กรอบ acceptor ทราบว่าผู้เชี่ยวชาญใน CDR ศิลปะและรวมถึง grafting 15 (Pat สหรัฐอเมริกา หมายเลข 5,225,539), SDR grafting (Pat สหรัฐอเมริกา หมายเลข 6,818,749), Resurfacing (Palin โมล Immunol 28:489-499, 1991), Specificity กำหนดตก Resurfacing (Pat ในสหรัฐอเมริกา Publ. หมายเลข 2010/0261620), ปรับฮิวเมน (หรือฮิวเมน ปรับกรอบ) (Pat สหรัฐอเมริกา หมายเลข publ. US2009/0118127), ซุปเปอร์ ฮิวเมนization (Pat สหรัฐอเมริกา หมายเลข 7,709, 226) และตัวเลือก (al. ออสบอร์ประกันภัยร้อยเอ็ด วิธี 36:61-6820 2005 สหรัฐอเมริกาพัฒน์ หมายเลข 5,565,332)แอนตี้ฮิวเมไนซ์สามารถมีปรับเพิ่มเติมเพื่อปรับปรุงวิธีการสนับสนุนกรอบการเปลี่ยนแปลงความสัมพันธ์หรือการตรวจหาต้องตามเพจ ตกเพื่อรักษาความสัมพันธ์ผูก (กลายพันธุ์กลับ) ด้วยเทคนิคเช่นการเปิดเผยใน Pat ของดอกเบี้ย หมายเลข publ. W01990/007861 และ Pat ของดอกเบี้ย Publ.25 หมายเลข W01992/22653คุณสมบัติเอฟเฟคเตอร์ภูมิคุ้มกันของแอนตี้ของการประดิษฐ์อาจสันทัดผ่าน Fc การดัดแปลง โดยเทคนิคที่เรียกว่าผู้เชี่ยวชาญในการ ศิลปะ ตัวอย่าง Fc เอฟเฟคเตอร์ฟังก์ชันเช่นผูก Clq ส่วนเติมเต็ม ขึ้น cytotoxicity (CDC), แอนติบอดีขึ้นอยู่กับเซลล์ mediated cytotoxicity 30 (ADCC), phagocytosis ลงระเบียบของเซลล์ผิวรีเซปเตอร์ (เช่น บีเซลล์ รีเซปเตอร์ BCR), สามารถสันทัดฯลฯ โดยปรับตกใน Fc รับผิดชอบ สำหรับกิจกรรมเหล่านี้ผ่านการผูกการเรียกใช้รีเซปเตอร์แกมมา Fc (FcyR) FcyRI FcyRIIa หรือ FcyRIII หรือไปรีเซปเตอร์ลิปกลอสไข FcyRIIb คุณสมบัติ pharmacokinetic 24อาจพัฒนา โดย mutating ตกในโดเมน Fc ที่ขยายแอนติบอดี ฮาล์ฟ-ไลฟ์ โดยเกี่ยวความสัมพันธ์ผูก Fc กับ Fc ทารกแรกเกิดรีเซปเตอร์ FcRn เอฟซีเตรียมการดัดแปลง IgG4 S228P/L234A/L235A, IgG2 M252Y/S254T/T256E (Dall'Acqua et al, 281:23514 J Biol เคมี-24, 2006); หรือ IgG2 หรือ V234A/G237A/P238S, V234A/G237AJH268Q, H268A/V309L/A330S/P331 5 V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S (สนามบินนานาชาติพัฒน์ หมายเลข publ. W02011/066501), หรือที่ที่อธิบายไว้ในสหรัฐอเมริกา Pat หมายเลข 6,737,056 (ตกค้างกำหนดหมายเลข ตามดัชนี EU) ความสัมพันธ์ Fc แอนติบอดีเพื่อ FcyRIIb ลิปกลอสไขอาจ ออกเมนต์เพื่อเพิ่มสัญญาณ cross-linking และ อะโกนิสต์ic ของแอนติบอดี การดัดแปลง Fc 10 เยี่ยงที่เพิ่ม Fc ผูกกับ FcyRIIb เป็น S267E/L328F และE233D/G237D/H268D/P271G/A330R (ตกค้างที่กำหนดหมายเลขตามดัชนี EU)ศูนย์รวมแห่งอื่นคือการประดิษฐ์แอนติบอดีการแยกที่ bindsฮิวเมน CD134 ซึ่งประกอบรวมด้วยบริเวณแปรผันสายเบา (VL) นั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 98 และ 15 เป็นบริเวณแปรผันสายหนัก (VH) ซึ่งประกอบรวมด้วยโซ่หนัก complementarity กำหนดขอบเขต (HCDR) s HCDR1, HCDR2 และ HCDR3 อาจมี 1, 2 หรือไม่มีรหัส 3 แทนกรดอะมิโนในนั้น ๆ VL ลำดับ: 98ลำดับ ID NO: 98:20 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISNYLNVVYQQKPGKAX5KLLIYYTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYX6CQQGNTLPWTFGQGTKVEIKRโดยที่ X 5 คือ V หรือ P และX 6 คือ F หรือ Y25 ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ประกอบรวมด้วยแยกแอนติบอดีVH ซึ่งประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 134 อาจมี 1, 2 หรือกรดอะมิโน 3 แทนในนั้น ๆ VH ลำดับรหัสไม่: 134เลขลำดับ ID: 13430 QVQLVQSGAEXIKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHVVVRQAPGQRLEWX2GYINPYNX3GTKYNEKFKGRX4TX5TSDXGSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYYGSS LSX7DYWGQGTLVTVSS 25โดยที่X 1 คือ V หรือ L X 2 คือ M หรือฉันX 3 คือ D, G, A, S หรือ E5 X 4 คือ V หรือตัวX 5 คือ L หรือฉันX 6 คือ T หรือ K และ X 7 คือ M, L หรือฉันในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ซึ่งประกอบรวมด้วย VH ประกอบรวมด้วย 10 แอนติบอดีแยกกรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 97 อาจมี 1, 2 หรือไม่มีรหัส 3 แทนกรดอะมิโนในนั้น ๆ VH ลำดับ: 97ลำดับ ID ไม่: 97:QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHWVRQAPGQRLEWXIGYIN 15 PYNDGTKYNEKFKGRX2TX3TSDX4SASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYYGSSL SMDYWGQGTLVTVSSโดยที่Xi คือฉันหรือ M20 X 2 คือหรือ VX 3 คือ L หรือฉัน และ X 4 คือ K หรือต.ในบางลื่นอธิบายนี้ แยกแอนติบอดีประกอบรวมด้วย VL นั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 99 และนั้น ๆ VH ลำดับรหัส NO: 13425 ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ประกอบรวมด้วยแยกแอนติบอดีHCDR3 ซึ่งประกอบรวมด้วยอะมิโนกรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 8, 139 หรือ 140ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ประกอบรวมด้วยแยกแอนติบอดีHCDR2 ซึ่งประกอบรวมด้วยอะมิโนกรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 7, 135, 13630 137 หรือ 138ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ประกอบรวมด้วยประกอบรวมด้วย HCDR1 แอนติบอดีแยกกรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 6 ในบางรูปลักษณะอธิบายนี้ ประกอบรวมด้วยแอนติบอดีแยก 26ซึ่งประกอบรวมด้วย a. VL กรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับ ID ไม่: 62 หรือ 63 และซึ่งประกอบรวมด้วย VH กรดอะมิโนลำดับนั้น ๆ ลำดับรหัสชุดหมายเลข 64, 65, 66101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 1155 116, 117, 118, 149, 150 หรือ 151 อาจมี 1, 2 หรือ 3 กรดอะมิโนแทนที่ positions11 VH เส้นกรดอะมิโนสารตกค้าง 56 หรือ 106หรือb. VH ซึ่งประกอบรวมด้วยและ VL ลำดับกรดอะมิโนของi. หมายเลข ID ลำดับ 62 และ 64 ตามลำดับ10 ii หมายเลขลำดับ ID 62 และ 65 ตามลำดับiii. ลำดับรหัสชุดหมายเลข 62 และ 66 ตามลำดับ หมายเลข ID ลำดับ iv 63 และ 64 ตามลำดับหมายเลขลำดับ ID; v. 63 และ 65 ตามลำดับ หรือ vi หมายเลขลำดับ ID 63 และ 66 ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่อาจเกิดสารตกค้างที่ทำให้เกิดความวุ่นวายโครงสร้างอาจมีการระบุขึ้นอยู่กับโครงสร้างผลึกของแอนติบอดีและผลกระทบของสารตกค้างในเสถียรภาพแอนติบอดีที่สามารถทดสอบโดยการสร้างและตัวแปรการประเมินมีการกลายพันธุ์ในตกค้างระบุ. ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีแยก ประกอบรวมด้วย 1, 2 หรือ 3 แทนกรดอะมิโนที่ตำแหน่ง VH เชิงเส้นที่เหลือ 11, 55 หรือ 99 ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในเอกสารฉบับที่ 1, 2 หรือ 3 กรดอะมิโนแทนในตำแหน่งที่เหลือVH เชิงเส้น V11L, N55Q, N55A, N55E, M99L หรือ M99I. 30 แทนในตำแหน่ง VH ตกค้างเชิงเส้น 11, 55 หรือ 99 อาจปรับปรุงเสถียรภาพแอนติบอดีและ/ หรือเพิ่มของอะโกนิสต์กิจกรรมไอซี. แทนกรดอะมิโนที่สามารถทำได้เช่นโดยฉับ PCR (US แพ็ต. ฉบับที่ 4683195) ห้องสมุดของสายพันธุ์ที่สามารถสร้างขึ้นโดยใช้ที่รู้จักกันดีวิธีเช่นใช้การสุ่ม (NNK) หรือ codons ที่ไม่สุ่มเช่น codons DVK ซึ่งเข้ารหัส 11 กรดอะมิโน (Ala, Cys, ASP, Glu, Gly, ลิซ, Asn, Arg , Ser, เทอร์, Trp) และคัดกรองห้องสมุดสำหรับสายพันธุ์ที่มีคุณสมบัติที่ต้องการ. แม้ว่า embodiments ที่แสดงในตัวอย่างประกอบรวมด้วยคู่ของ 5 ภูมิภาคตัวแปรหนึ่งจากห่วงโซ่หนักและหนึ่งจากห่วงโซ่แสงที่มีทักษะฝีมือจะรับรู้embodiments ทางเลือกที่อาจจะประกอบรวมด้วยหนักเดียวหรือบริเวณแปรผันสายเบา s ภูมิภาคตัวแปรเดียวที่สามารถใช้ในการคัดกรองสำหรับโดเมนตัวแปรความสามารถในการขึ้นรูปเฉพาะสองโดเมนแอนติเจนผูกพันส่วนความสามารถในการยกตัวอย่างเช่นผูกพันกับฮิวเมน CD134 มีลำดับของ 10 SEQ ID NO: 1. การตรวจคัดกรองอาจ ทำได้โดยการทำลายจุลินทรีย์แสดงผลการตรวจคัดกรองวิธีการใช้เช่นวิธีการลำดับชั้นคู่combinatorial เปิดเผยในInt ตบเบา ๆ Publ ฉบับที่ W01992 / 01047 ในวิธีนี้อาณานิคมของแต่ละบุคคลที่มีทั้ง H หรือ L โคลนคือห่วงโซ่ที่ใช้ในการติดเชื้อห้องสมุดที่สมบูรณ์ของโคลนเข้ารหัสห่วงโซ่อื่นๆ (L หรือ H) และส่งผลให้สองห่วงโซ่ที่เฉพาะเจาะจง antigen- 15 โดเมนที่มีผลผูกพันคือเลือกตาม ด้วยเทคนิคการแสดงผลทำลายจุลินทรีย์เป็นอธิบาย ดังนั้นบุคคลที่ VH และ VL โพลีเปปไทด์โซ่มีประโยชน์ในการระบุเพิ่มเติมแอนติบอดีที่มีผลผูกพันเฉพาะฮิวเมนCD134 มีลำดับของSEQ ID NO: 1 โดยใช้วิธีการที่เปิดเผยใน Int ตบเบา ๆ Publ ฉบับที่W01992 / 01047. ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วยHCDR1 ที่ HCDR2 และลำดับกรดอะมิโน HCDR3 ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีซึ่งประกอบรวมด้วยห่วงโซ่บางอย่างหนักและห่วงโซ่แสง CDR ลำดับตามที่อธิบายไว้ในที่นี้เป็นฮิวเมไนซ์, ฮิวเมนหรือ DelmmunizedTM แอนติบอดี. ฮิวเมนหรือ deImmunizedTM แอนติบอดีที่สามารถทำตามที่อธิบายไว้ในเอกสารฉบับนี้. 5 ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี้มักจะหมายถึงแอนติบอดีที่แอนติเจนผูกพันเว็บไซต์คือไม่ได้มาจากฮิวเมนชนิดและกรอบภูมิภาคตัวแปรจะมาจากฮิวเมนอิมมูโนลำดับ ฮิวเมไนซ์แอนติบอดี้อาจรวมถึงการแทนในภูมิภาคกรอบเพื่อให้กรอบการทำงานอาจจะไม่เป็นสำเนาถูกต้องของแสดงฮิวเมนลำดับยีนอิมมูโนหรือgermline 10 ฮิวเมไนซ์แอนติบอดีต่อ CD134 อาจถูกสร้างขึ้นเช่นในหนู Balb / c โดยใช้วิธีการมาตรฐาน แอนติบอดีที่เกิดขึ้นในหนู Balb / c หรืออื่น ๆ ที่ไม่ใช่ฮิวเมนสัตว์สามารถฮิวเมไนซ์โดยใช้เทคโนโลยีต่างๆในการสร้างมากขึ้นฮิวเมนเหมือนลำดับ ที่เป็นแบบอย่างฮิวเมนเทคนิค ization ที่รวมถึงการเลือกของฮิวเมนกรอบยอมรับเป็นที่รู้จักกันมีความสามารถในศิลปะและรวมถึงการปลูกถ่ายอวัยวะCDR 15 (US แพ็ต. ฉบับที่ 5225539) การปลูกถ่ายอวัยวะ SDR (US แพ็ต. ฉบับที่ 6818749) ผิวหนัง(Palin, Mol Immunol 28: 489-499, 1991) การกำหนดความจำเพาะตกค้างผิวหนัง(.. สหรัฐแพ็ตครั้งที่ 2010/0261620 Publ), ฮิวเมน -adaptation (หรือฮิวเมน. ปรับตัวกรอบ) (US แพ็ต Publ ฉบับที่ US2009 / 0118127) ซูเปอร์ฮิวเมน ization (US แพทเลขที่ 7709, 226) และการเลือกไกด์ (ออสบอร์, et al, วิธีการ 36:.. 61-68,.. 20 2005 สหรัฐแพทเลขที่ 5565332) ฮิ วเมไนซ์แอนติบอดี้ที่สามารถเพิ่มประสิทธิภาพในการปรับปรุงต่อไปของพวกเขาเลือกที่จะเป็นพี่น้องกันหรือแอนติเจนที่ต้องการโดยการใช้มาตรการการสนับสนุนกรอบการเปลี่ยนแปลงสารตกค้างที่จะรักษาความสัมพันธ์ที่ใกล้ชิดผูกพัน(กลายพันธุ์หลัง) โดยใช้เทคนิคดังกล่าวเป็นผู้ที่เปิดเผยตามที่อธิบายไว้ใน Int ตบเบา ๆ Publ ฉบับที่ W01990 / 007,861 และ Int ตบเบา ๆ Publ. 25 ฉบับที่ W01992 / 22653. ภูมิคุ้มกันเอฟเฟคเตอร์คุณสมบัติของแอนติบอดีของการประดิษฐ์อาจจะปรับ Fc ผ่านการดัดแปลงโดยใช้เทคนิคที่รู้จักกันให้กับผู้ที่มีความเชี่ยวชาญในศิลปะ ยกตัวอย่างเช่น Fc เอฟเฟคเตอร์ฟังก์ชั่นเช่น Clq ผูกพันเสริมพิษขึ้นอยู่กับ(CDC), แอนติบอดี้ขึ้นอยู่กับพิษ cell-mediated 30 (ADCC) เซลล์ทำลายลงกฎระเบียบของเซลล์ผิวรีเซปเตอร์ (เช่นเซลล์ B รีเซปเตอร์; BCR) ฯลฯ สามารถปรับโดยการปรับเปลี่ยนตกค้างใน Fc ผู้รับผิดชอบสำหรับกิจกรรมเหล่านี้ผ่านการใช้งานที่มีผลผูกพันFc แกมมารีเซปเตอร์ (FcyR) FcyRI, FcyRIIa หรือ FcyRIII, หรือการยับยั้งรีเซปเตอร์ FcyRIIb . คุณสมบัติทางเภสัชจลนศาสตร์24 ก็อาจจะเพิ่มขึ้นโดยกรรมวิธีตกค้างในโดเมน Fc ที่ขยายแอนติบอดีครึ่งชีวิตโดยการปรับความสัมพันธ์ผูกพันFc กับ Fc ทารกแรกเกิดรีเซปเตอร์ FcRn. เป็นแบบอย่าง Fc การดัดแปลงเป็น IgG4 S228P / L234A / L235A, IgG2 M252Y / S254T / T256E (Dall'Acqua et al, เจ Biol Chem 281: 23514-24, 2006); หรือ IgG2 5 V234A / G237A / P238S, V234A / G237AJH268Q, H268A / V309L / เครื่องบิน A-330 / P331 หรือV234A / G237A / P238S / H268A / V309L / เครื่องบิน A-330 / P331S (สนามบินนานาชาติ. แพ็ต. Publ. ฉบับที่W02011 / 066501) หรือผู้ที่ อธิบายในสหรัฐอเมริกา ตบเบา ๆ หมายเลข 6737056 (หมายเลขตกค้างตามดัชนีของสหภาพยุโรป) ความสัมพันธ์แอนติบอดี Fc ไปยับยั้ง FcyRIIb อาจจะเติมเพื่อเพิ่มแอนติบอดีเชื่อมโยงข้ามและอะโกนิสต์สัญญาณไอซี ที่เป็นแบบอย่าง Fc 10 การดัดแปลงที่เพิ่ม Fc ผูกพันกับ FcyRIIb มี S267E / L328F และE233D / G237D / H268D / P271G / A330R (สารตกค้างนับตามดัชนีของสหภาพยุโรป). ศูนย์รวมของการประดิษฐ์คือแอนติบอดีแยกที่ผูกอีกฮิวเมน CD134, ซึ่งประกอบรวมด้วยบริเวณแปรผันสายเบา (VL) ของ SEQ ID NO: 98 และ 15 บริเวณแปรผันสายหนัก (VH) ซึ่งประกอบรวมด้วย complementarity ห่วงโซ่หนักกำหนดภูมิภาค(HCDR) s HCDR1, HCDR2 และ HCDR3, เลือกที่มี 1, 2 หรือ 3 แทนกรดอะมิโนใน VL ของ SEQ ID NO: 98 SEQ ID NO: 98: 20 X5 คือ V หรือ P; และX6 คือ F วายหรือ25 ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วยVH ซึ่งประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนลำดับของ SEQ ID NO: 134, เลือกที่มี 1, 2 หรือ 3 แทนกรดอะมิโนใน VH ของ SEQ ID NO: 134 SEQ ID NO: 134 30 LSX7DYWGQGTLVTVSS; 25 โดยที่X1 คือ V หรือ L; X2 คือ M หรือฉัน; X3 คือ D, G, A, S หรือ E; 5 X4 คือ V หรือ; X5 คือ L หรือฉัน; X6 คือ T หรือ K; และ X7 คือ M, L หรือฉันในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วย10 VH ซึ่งประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนลำดับของ SEQ ID NO: 97 ทางเลือกที่มี 1, 2 หรือ 3 แทนกรดอะมิโนใน VH ของ SEQ ID NO: 97 SEQ ID NO: 97: QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYVMHWVRQAPGQRLEWXIGYIN 15 PYNDGTKYNEKFKGRX2TX3TSDX4SASTAYMELSSLRSEDTAVYYCANYYGSSL SMDYWGQGTLVTVSS; โดยที่จินคือฉันหรือ M; 20 X2 คือหรือ V; X3 คือ L หรือฉัน; และ X4 คือ K ตันหรือในบางศูนย์รวมบรรยายในที่นี้, แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วย VL ของ SEQ ID NO: 99 และ VH ของ SEQ ID NO: 134 25 ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีที่แยกประกอบรวม ด้วยHCDR3 ซึ่งประกอบรวมด้วยอะมิโนกรดอะมิโนลำดับของ SEQ ID NO: 8, 139 หรือ 140 ในบางรูปลักษณะที่อธิบายไว้ในที่นี้แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วยHCDR2 ซึ่งประกอบรวมด้วยอะมิโนลำดับของกรดอะมิโน SEQ ID NO: 7, 135, 136, 30 137 หรือ 138 ในบางรูปลักษณะอธิบายในที่นี้แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วย HCDR1 ประกอบรวมด้วยลำดับกรดอะมิโนของ SEQ ID NO: 6. ในบางรูปลักษณะบรรยายในที่นี้ , แอนติบอดีที่แยกประกอบรวมด้วย26 VL ซึ่งประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนลำดับของ SEQ ID NO: 62 หรือ 63; และVH ซึ่งประกอบรวมด้วยกรดอะมิโนลำดับของ SEQ ID NOS; 64, 65, 66, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 5 116, 117, 118, 149, 150 หรือ 151 ทางเลือก มี 1, 2 หรือ 3 กรดอะมิโนแทนที่ตกค้างกรดอะมิโนเชิงเส้นVH positions11 56 หรือ 106; หรือข VL และ VH ซึ่งประกอบรวมด้วยลำดับกรดอะมิโนของฉัน SEQ ID NOS; 62 และ 64 ตามลำดับ; 10 ii SEQ ID NOS; 62 และ 65 ตามลำดับ; iii SEQ ID NOS; 62 และ 66 ตามลำดับ; iv SEQ ID NOS; 63 และ 64 ตามลำดับ; โวลต์ SEQ ID NOS; 63 และ 65 ตามลำดับ; หรือ vi SEQ ID NOS; 63 และ 66 ตามลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ศักยภาพ
โครงสร้างตกค้างของอาจจะระบุตามโครงสร้างคริสตัล
ของแอนติบอดี และผลของสารพิษตกค้างต่อเสถียรภาพแอนติบอดีสามารถทดสอบได้โดยการสร้างและการประเมินสายพันธุ์มีการกลายพันธุ์

ในบางในระบุ ตกค้าง รูปลักษณะอธิบายในที่นี้ แยกแอนติบอดี 2
ประกอบรวมด้วย 1หรือ 3 กรดอะมิโนที่ VH แทนเส้นกากตำแหน่ง 11 55 ค็อค 99 .
ในบางรูปลักษณะอธิบายในที่นี้ ทั้ง 1 , 2 ค็อค 3 กรดอะมิโน
เปลี่ยนที่แต่เส้นกากตำแหน่งมี v11l n55q n55a n55e , , , , m99l ค็อค m99i .
30 ที่ VH แทนเส้นกากตำแหน่ง 11 55 ค็อค 99 อาจ
ปรับปรุงเสถียรภาพของแอนติบอดีและ / หรือเพิ่มกิจกรรมอะโกนิสต์ IC .
กรดอะมิโนแทนสามารถทำได้ตัวอย่างโดยวิธี PCR ฉับเราแพท ไม่ 4683195 ) ห้องสมุดของสายพันธุ์ที่สามารถสร้างขึ้นโดยใช้รู้จักกันดี


วิธีการ ตัวอย่างเช่น ใช้สุ่ม ( nnk ) ค็อคแบบไม่สุ่ม ras , ras dvk ตัวอย่าง
ซึ่งเข้ารหัส 11 กรดอะมิโน ( ala , ภาวะ , ASP , GLU GLY . , , asn , arg ,
เซอร์tyr , TRP ) และคัดกรองห้องสมุดสำหรับสายพันธุ์ที่มีคุณสมบัติที่ต้องการ
ถึงแม้ว่า embodiments ที่อธิบายในตัวอย่างประกอบรวมด้วยคู่ 5 ภาคส่วน หนึ่งจากโซ่หนักและหนึ่งจากโซ่แสง เป็นช่างฝีมือที่มีทักษะ
จะรับรู้ว่า embodiments ทางเลือกที่อาจประกอบรวมด้วยเดียวค็อคหนักบริเวณแปรผันสายเบา sขอบเขตตัวแปรเดียวสามารถใช้หน้าจอสำหรับตัวแปรโดเมนสามารถสร้างสองโดเมนเฉพาะแอนติเจนผูกพัน
ส่วนความสามารถ ตัวอย่างเช่น ผูกฮิวเมน cd134 มีลำดับ 10 seq id : 1 การคัดกรองอาจจะได้แสดงการฟา
ใช้วิธีตัวอย่างเช่นการลำดับชั้นสองวิธีการเปิดเผยใน
Int . แพท PUBL . ไม่w01992 / 01047 . ในวิธีการนี้ แต่ละอาณานิคม
ที่มีทั้ง H ค็อคผมโซ่โคลนความเคยติดห้องสมุดที่สมบูรณ์ของโคลน
โซ่การเข้ารหัสอื่น ๆ ( L ค็อค H ) และเกิดสองโซ่เฉพาะแอนติเจน -
15 ผูกโดเมนเลือกตามความว่าแสดงเทคนิค
อธิบาย ดังนั้นVH บุคคลและ VL โพลีเปปไทด์โซ่จะเป็นประโยชน์ในการเพิ่มภูมิต้านทานโดยเฉพาะฮิวเมนผูกพัน

cd134 มีลำดับของ seq id : 1 โดยใช้วิธีการเปิดเผย ในพื้นที่ แพท PUBL . ไม่ w01992 / 01047
.
ในบางรูปลักษณะอธิบายในที่นี้ แยกประกอบรวมด้วย
hcdr1 แอนติบอดี ,การ hcdr2 และ hcdr3 กรดอะมิโน
ในบางรูปลักษณะอธิบายในที่นี้ ดังนั้นซึ่งประกอบรวมด้วยบางอย่างหนักโซ่และโซ่ไฟ CDR ลำดับตามที่อธิบายไว้ในที่นี้เป็นฮิวเมไนซ์ฮิวเมนค็อค , delmmunizedtm antibodies .
ฮิวเมนค็อค deimmunizedtm แอนติบอดีได้
ตามที่อธิบายไว้ในที่นี้