AFLP analysis was performed followi

AFLP analysis was performed following the method of Vos et al. (1995) with minor modifications. For each sample, the templates were prepared by digesting 250 ng DNA with the restriction enzyme combination EcoRI-MseI and by ligating with T4 DNA ligase (Fermentas; Burlington, Ontario, Canada) the corresponding oligonucleotide adaptors in a total volume of 10 μL. The ligation products were diluted 10 times with deionized H2O. Pre-selective PCR amplification with primers corresponding to adaptor core sequences (E+A and M+C) was performed in a 25 μL reaction containing 2.5 μL of AFLP template. PCR contained 1X PCR buffer [750 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25 °C), 200 mM (NH4)2SO4 0.1% (v/v)], 1.5 mM MgCl2, 0.2 μM of each primer, 0.2 mM dNTP and 1U Taq DNA polymerase and was performed using the T1 Thermocycler. The temperature profile for preamplification involved: 20 cycles: 30 s at 94 °C for DNA denaturation, 1 min at 56 °C for annealing, and 1 min at 72 °C for extension, and finally a hold for 5 min at 72 °C

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวิเคราะห์ AFLP ได้ดำเนินวิธีของแนว et al. (1995) ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย อย่าง แบบมีเตรียมฝึก 250 ฉบับ DNA ด้วยชุดข้อจำกัดเอนไซม์ EcoRI MseI และ ligating กับ T4 DNA ligase (Fermentas เบอร์ลิงตัน ออนตาริโอ แคนาดา) อะแดปเตอร์ oligonucleotide สอดคล้องกันในปริมาณรวมของ 10 μL ผลิตภัณฑ์ ligation ถูกเจือจาง 10 เท่า ด้วย H2O จุ Pre-selective ปลัก ด้วยไพรเมอร์ที่สอดคล้องกับอะแดปเตอร์หลักลำดับ (E + A และ M + C) ทำในปฏิกิริยา 25 μL ที่ประกอบด้วย μL 2.5 ของ AFLP แม่ PCR อยู่ 1 X PCR บัฟเฟอร์ [750 มม.ทริ HCl (ค่า pH 8.8 ที่ 25 ° C), 200 mM (NH4) 2SO4 0.1% (v/v)], 1.5 มม. MgCl2, 0.2 ไมครอนของรองพื้นแต่ละ 0.2 มม. dNTP และ 1U Taq DNA พอลิเมอเรส และดำเนินการใช้ T1 Thermocycler ค่าอุณหภูมิสำหรับ preamplification ที่เกี่ยวข้อง: รอบ 20:30 s ที่ 94 ° C สำหรับ DNA denaturation, 1 นาทีที่ 56 ° C สำหรับหลอม และ 1 นาทีที่อุณหภูมิ 72 ° C สำหรับส่วนขยาย และสุดท้ายค้างไว้ 5 นาทีที่อุณหภูมิ 72 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิเคราะห์ AFLP ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้วิธีการ Vos et al, (1995) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สำหรับแต่ละตัวอย่างแม่แบบที่ถูกจัดทำขึ้นโดยการย่อย 250 ดีเอ็นเอ NG มีการรวมกันเอนไซม์ จำกัด EcoRI-MseI และ ligating กับ T4 ดีเอ็นเอลิกาเซ (Fermentas; เบอร์ลิงตัน, Ontario, แคนาดา) อะแดปเตอร์ oligonucleotide ที่สอดคล้องกันในปริมาณรวม 10 ไมโครลิตร ผลิตภัณฑ์ ligation ถูกปรับลด 10 ครั้งด้วยปราศจากไอออน H2O ขยาย PCR Pre-เลือกด้วยไพรเมอร์ที่สอดคล้องกับอะแดปเตอร์ลำดับหลัก (E + A และ M + C) คือการดำเนินการในการเกิดปฏิกิริยา 25 ไมโครลิตรมี 2.5 ไมโครลิตรของ AFLP แม่แบบ PCR มี 1X PCR บัฟเฟอร์ [750 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.8 ที่ 25 ° C) 200 มิลลิเมตร (NH4) 2SO4 0.1% (v / V)] 1.5 มิลลิ MgCl2 0.2 ไมครอนของแต่ละไพรเมอร์ 0.2 มิลลิ dNTP และ 1U โพลิเมอร์ Taq DNA และได้รับการดำเนินการโดยใช้ T1 thermocycler รายละเอียดของอุณหภูมิ preamplification มีส่วนร่วม: 20 รอบ: 30 วินาทีที่ 94 ° C เป็นเวลา denaturation ดีเอ็นเอ 1 นาทีที่ 56 องศาเซลเซียสเป็นเวลาหลอมและ 1 นาทีที่ 72 ° C สำหรับการขยายและในที่สุดก็ถือเป็นเวลา 5 นาทีที่ 72 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ AFLP มีการปฏิบัติตามวิธีการที่คุณ et al . ( 1995 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สำหรับแต่ละตัวอย่างแม่แบบที่เตรียมโดยการย่อยด้วยเอนไซม์ดีเอ็นเอ 250 นาโนผสมด้วย msei และ ligating กับดีเอ็นเอไลเกส T4 ( fermentas ; Burlington Ontario , แคนาดา ) ที่สอดคล้องกัน ซึ่งอะแดปเตอร์ในเล่มทั้งหมด 10 μล. Ligation ผลิตภัณฑ์ลด 10 ครั้งด้วยคล้ายเนื้อเยื่อประสานก่อน ( selective PCR กับ H2O ไพรเมอร์ที่สอดคล้องกับลำดับแกนอะแดปเตอร์ ( e + M + c ) แสดงใน 25 μ L ปฏิกิริยาที่มี 2.5 ลิตรμแม่แบบเอเอฟ . PCR PCR buffer [ 750 มม. มี 1 บริษัท HCl ( 8.8 pH ที่ 25 ° C ) , 200 มม. ( NH4 ) 2so4 0.1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ] , 1.5 มม. ชุดμ 0.2 M แต่ละไพรเมอร์ 0.2 มม. dntp วิดได้ดีและ DNA polymerase และถูกดำเนินการโดยใช้ T1 เทอมอไซเคล ์ . โปรไฟล์อุณหภูมิ preamplification เกี่ยวข้อง : 20 รอบ 30 s ที่ 94 ° C ( DNA 1 นาทีที่ 56 ° C สำหรับการอบและ 1 นาทีที่ 72 ° C เพื่อการส่งเสริม และสุดท้ายค้างไว้ 5 นาทีที่ 72 ° C