2.3.3. Enzyme hydrolysis of inulins

2.3.3. Enzyme hydrolysis of inulins
About 15 g of extracted sample solution in Section 2.3.1 was
weighed into a 100 mL screw cap bottle. An equal amount of 0.2 M
acetate buffer (pH 4.5) was added. The pH of mixture solution was
adjusted to 4.5 0.5 with 0.2 M acetic acid or 0.2 M Na-acetate.
Sufficient amount of inulinase (i.e. 400 mL of inulinase (Sigma–
Aldrich
1
, USA, I2017 inulinase from Aspergillus niger, CAS Number
9025-67-6) which has enzyme activity of 1740 INU/G) was added and
incubated for 30 min in shaking water bath, at 60 2 8C. After cooling,
5 g of sample solution after hydrolysis was transferred into a 25 mL
volumetric flask which contained 0.01 g of rhamnose as an internal
standard. The volume of the mixture was made up to 25 mL with
deionised water. The final solution was used for derivatisation step.
2.3.4. Standard sugar preparation
Each standard sugar was prepared in appropriate concentra-tions of 4 levels, from 0.2 to 0.8 mg/mL of fructose, glucose and
sucrose (Fluka
1
, USA) and 0.2 to 1.0 mg/mL for GF2
(1-kestose, 1-kestotriose), GF3
(nystose, 1,1-kestotetraose) and GF4
(1F- b -fructofuranosylnystose, 1,1,1-kestopentaose) (Wako Pure Chemi-cal Industries, Ltd., Osaka, Japan) which contained 0.01 g of
rhamnose (Sigma
1
, USA) as an internal standard.
K. Judprasong et al. / Journal of Food Composition and Analysis 24 (2011) 642–649 643
2.3.5. Sugar derivatisation
Solutions of extracted samples and standards from Sections 2.3.2
to 2.3.4 were pipetted (200 mL) into a set of 10 mL screw cap tubes.
They were dried in a vacuum desiccator (approximately 3 h; longer, if
solutions were not dried). Two steps of sugar derivatisation
(oximation and trimethysilylation) were carried out as follows:
(1) 400 mL of hydroxylamine chloride in pyridine was added into
each tube; the solution was mixed for 10 min on a vortex mixer; it
was incubated at 60 8C for 5 min in a water bath; then centrifuged at
2000 g for 5 min; the supernatant was discarded; (2) 200 mL of
silylating agent (tri-methysilylimidazole, TSIM) was added into each
tube, shaked again for 10 min on vortex mixer and removed the
excess of TSIM with 1000 mL of deionised water. Two mL of isooctane
was added and the tube shaken again for 3 min. After complete
reaction, the mixture was centrifuged at 2000 g for 5 min. Finally,
the upper layer (isooctane) was transferred into a 2 mL gas
chromatography (GC) vial and then sugars were determined by GC.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3.3. เอนไซม์ไฮโตรไลซ์ของ inulinsมีประมาณ 15 กรัมของตัวอย่างแยกการแก้ปัญหาในหัวข้อ 2.3.1น้ำหนักลงในขวดฝาครอบสกรู 100 มล จำนวนเงินเท่ากับ 0.2 เมตรมีเพิ่มบัฟเฟอร์ acetate (pH 4.5) ค่า pH ของส่วนผสมได้ปรับปรุง 0.5 4.5 ด้วยกรดอะซิติก 0.2 M หรือ 0.2 M Na-acetateจำนวนเพียงพอ (เช่น 400 mL ของ inulinase (ซิกมา-inulinaseAldrich1สหรัฐอเมริกา inulinase I2017 จากสาธารณรัฐไนเจอร์ Aspergillus หมายเลข CAS9025-67-6) ซึ่งมีเอนไซม์ของ 1740 INU/G) เพิ่ม และincubated สำหรับ 30 นาทีในการสั่นที่อาบน้ำ ที่ 60 2 8C. หลังจากทำความเย็น5 กรัมของตัวอย่างหลังจากที่มีการโอนย้ายไฮโตรไลซ์เป็น 25 mLหนาว volumetric ซึ่งมีอยู่ 0.01 g ของ rhamnose เป็นภายในมาตรฐาน ปริมาณของส่วนผสมจะมีถึง 25 mLน้ำ deionised ทางออกสุดท้ายถูกใช้สำหรับขั้นตอน derivatisation2.3.4 เตรียมน้ำตาลมาตรฐานน้ำตาลแต่ละมาตรฐานมีเตรียมใน concentra tions ที่เหมาะสมของระดับ 4 จาก 0.2 ถึง 0.8 mg/mL ของฟรักโทส กลูโคส และซูโครส (Fluka1สหรัฐอเมริกา) และ 0.2-1.0 mg/mL สำหรับ GF2(1 kestose, 1-kestotriose), GF3(nystose, kestotetraose 1.1) และ GF4(1F-บี - fructofuranosylnystose, 1,1,1-kestopentaose) (Wako Pure Chemi cal จำกัด โอซาก้า ญี่ปุ่น) ซึ่งมีอยู่ 0.01 g ของrhamnose (ซิกมา1สหรัฐอเมริกา) เป็นมาตรฐานภายในคุณ Judprasong et al. / สมุดรายวันของส่วนประกอบอาหารและวิเคราะห์ 24 (2011) 642-649 6432.3.5. น้ำตาล derivatisationโซลูชั่นของแยกตัวอย่างและมาตรฐานจากส่วน 2.3.2การ 2.3.4 ได้ pipetted (200 มล.) เป็นชุดของ 10 mL สกรูฝาท่อพวกเขาถูกอบแห้งใน desiccator สูญญากาศ (ประมาณ 3 h ถ้ายาวโซลูชั่นได้ไม่แห้ง) ขั้นตอนที่สองของ derivatisation น้ำตาล(oximation และ trimethysilylation) ได้ดำเนินการดังนี้:(1) 400 mL ของคลอไรด์ hydroxylamine ใน pyridine ถูกเพิ่มเข้าไปในหลอดละ โซลูชันถูกผสมใน 10 นาทีโดยผสม vortex มันมี incubated ที่ 8C 60 สำหรับ 5 นาทีในการอาบน้ำ centrifuged แล้ว ที่g 2000 สำหรับ 5 นาที supernatant ถูกละทิ้ง (2) 200 mL ของตัวแทน silylating (tri-methysilylimidazole, TSIM) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละท่อ ขนาดเลอีกใน 10 นาทีบนเครื่องผสม vortex และเอาการส่วนเกินของจิกับ 1000 mL น้ำ deionised 2 mL ของ isooctaneเพิ่ม และหลอดเขย่าอีกครั้งสำหรับ 3 นาที หลังจากเสร็จสมบูรณ์ปฏิกิริยา ส่วนผสมถูก centrifuged ที่ g 2000 สำหรับ 5 นาที สุดท้ายชั้นบน (isooctane) ถูกโอนย้ายไปยังแก๊ส 2 mLคอนแทค chromatography (GC) แล้วน้ำตาลถูกกำหนด โดย GC

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3.3 การย่อยสลายของเอนไซม์ inulins
ประมาณ 15 กรัมของการแก้ปัญหาตัวอย่างที่สกัดในมาตรา 2.3.1 ได้รับการ
ชั่งน้ำหนักเป็น 100 มิลลิลิตรขวดฝาเกลียว จำนวนเท่ากับ 0.2 M
บัฟเฟอร์อะซิเตท (pH 4.5) ถูกเพิ่มเข้ามา พีเอชของการแก้ปัญหาส่วนผสมที่ถูก
ปรับ 4.5 0.5 0.2 M ที่มีกรดอะซิติกหรือ 0.2 M นาอะซิเตท.
จำนวนเงินที่เพียงพอของ inulinase (คือ 400 มิลลิลิตร inulinase (Sigma-
ดิช
1
, อเมริกา, I2017 inulinase จากเชื้อรา Aspergillus ไนเจอร์, หมายเลข CAS
9025- 67-6) ซึ่งมีกิจกรรมของเอนไซม์ของ 1740 INU / G) ถูกบันทึกและ
บ่มเป็นเวลา 30 นาทีในการเขย่าอาบน้ำที่ 60 2 8C หลังจากที่ระบายความร้อน
5 กรัมของการแก้ปัญหาการย่อยสลายตัวอย่างหลังจากถูกย้ายเป็น 25 มิลลิลิตร
ขวดที่มีปริมาตร 0.01 กรัมแรมโนสเป็นภายใน
มาตรฐาน ปริมาณของส่วนผสมที่ถูกสร้างขึ้นถึง 25 มิลลิลิตร
น้ำ deionised ทางออกสุดท้ายที่ใช้สำหรับขั้นตอน derivatisation.
2.3.4 มาตรฐานการจัดทำน้ำตาล
น้ำตาลแต่ละมาตรฐานถูกจัดทำขึ้นในข้อเข้มข้นที่เหมาะสม 4 ระดับ 0.2-0.8 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรฟรุกโตสกลูโคสและ
ซูโครส (Fluka
1
สหรัฐอเมริกา) และ 0.2-1.0 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรสำหรับ GF2
(1 kestose, 1 kestotriose) GF3
(nystose, 1,1-kestotetraose) และ GF4
(1F- ข -fructofuranosylnystose, 1,1,1-kestopentaose) (Wako บริสุทธิ์อุตสาหกรรม Chemi-แคล จำกัด , โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น) ที่มี 0.01 กรัมของ
แรมโนส (ซิกม่า
1
, USA) เป็นมาตรฐานภายใน.
เค Judprasong et al, / วารสารส่วนประกอบอาหารและการวิเคราะห์ 24 (2011) 642-649 643
2.3.5 น้ำตาล derivatisation
โซลูชั่นของกลุ่มตัวอย่างและมาตรฐานสกัดจากส่วน 2.3.2
ไป 2.3.4 ได้รับการปิเปต (200 มิลลิลิตร) เป็นชุดของ 10 มิลลิลิตรสกรูฝาท่อ.
พวกเขาแห้งในสูญญากาศเดซิ (ประมาณ 3 ชั่วโมง; อีกต่อไปถ้า
มีการแก้ปัญหา ไม่แห้ง) ขั้นตอนที่สองของ derivatisation น้ำตาล
(oximation และ trimethysilylation) ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้
(1) 400 มิลลิลิตรไฮดรอกซิคลอไรด์ใน pyridine ถูกเพิ่มเข้าไปใน
แต่ละหลอด; การแก้ปัญหาที่ได้รับการผสมเป็นเวลา 10 นาทีในการผสมน้ำวน; มัน
ถูกบ่มที่ 60 8C เป็นเวลา 5 นาทีในอ่างน้ำ; ปั่นแล้วที่
2,000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที; ใสทิ้ง; (2) 200 มล
ตัวแทน silylating (ไตร methysilylimidazole, จิมซา) ได้ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ
หลอดเขย่าอีกครั้งเป็นเวลา 10 นาทีในการผสมน้ำวนและลบออก
ส่วนที่เกินจากจิมซา 1000 มิลลิลิตรน้ำ deionised สองมิลลิลิตรไอโซออกเท
ถูกบันทึกและหลอดเขย่าอีกครั้งเป็นเวลา 3 นาที หลังจากที่เสร็จสมบูรณ์
ปฏิกิริยาส่วนผสมที่ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 2,000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที สุดท้าย
ชั้นบน (ไอโซออกเท) ที่ถูกย้ายเข้าก๊าซมิลลิลิตร 2
โค (GC) ขวดแล้วน้ำตาลถูกกำหนดโดย GC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3.3 . เอนไซม์ย่อยสลายของ inulins
ประมาณ 15 กรัมสกัดตัวอย่างวิธีแก้ปัญหาในส่วน 2.3.1 คือ
หนักเป็น 100 ml สกรูฝาขวด มีปริมาณเท่ากับ 0.2 M
อะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 4.5 ) ถูกเพิ่มเข้ามา pH ของสารละลายผสม
ปรับ 4.5 0.5 0.2 M กรดอะซิติกหรือ 0.2 M
na เตท ปริมาณที่เพียงพอของ inulinase ( เช่น 400 มิลลิลิตร inulinase ( Sigma )
ดิช
1
, สหรัฐอเมริกาi2017 inulinase จาก Aspergillus niger , CAS หมายเลข
9025-67-6 ) ซึ่งมีกิจกรรมของเอนไซม์ Inu / 740 กรัม ) คือการเพิ่มและ
บ่ม 30 นาที ในสั่น น้ำที่อาบ ที่ 60 2 8C หลังจากเย็น ,
5 g สารละลายตัวอย่างหลังจากการย่อยถูกถ่ายโอนลงในขวดที่มีปริมาตร 25 ml
0.01 กรัม rhamnose เป็นมาตรฐานภายใน

ปริมาณของส่วนผสมที่ถูกสร้างขึ้นด้วย
25 มล.deionised น้ำ ทางออกสุดท้ายคือใช้สำหรับขั้นตอน derivatisation .
2.3.4 . การเตรียมมาตรฐานแต่ละมาตรฐาน น้ำตาล น้ำตาล
เตรียมเหมาะสมครุ่นคิด tions 4 ระดับ ตั้งแต่ 0.2 ถึง 0.8 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ฟรุคโตส กลูโคส และซูโครส ( fluka

1
, USA ) และ 0.2 1.0 mg / ml ( 1-kestose gf2
,
( nystose 1-kestotriose ) gf3 , gf4 1,1-kestotetraose ) และ
( ชั้น 1 - B - fructofuranosylnystose 1 , 1 , ,1-kestopentaose ) ( Wako บริสุทธิ์เคมีแคลอุตสาหกรรม จำกัด , Osaka , Japan ) ซึ่งประกอบด้วย 0.01 กรัม
rhamnose ( Sigma
1
, USA ) เป็นมาตรฐานภายใน
K . judprasong et al . / วารสารการวิเคราะห์อาหาร ส่วนประกอบ และ 24 ( 2011 ) – 642 649 643
2.3.5 . น้ำตาล derivatisation
โซลูชั่นที่สกัดได้จากตัวอย่างและมาตรฐานส่วน 2.3.2
ไป 2.3.4 อยู่ pipetted ( 200 ml ) เป็นชุดของ 10 ml
สกรูฝาท่อจะแห้งในสูญญากาศเดซิกเคเตอร์ ( ประมาณ 3 H ;
โซลูชั่นอีกต่อไป ถ้าไม่แห้ง ) สองขั้นตอนของน้ำตาล derivatisation
( oximation และ trimethysilylation ) ได้ดำเนินการดังนี้ :
( 1 ) 400 ml ของไฮดรอกชีลามีนคลอไรด์ใน pyridine ถูกเพิ่มลงในแต่ละหลอด
; สารละลายผสมสำหรับ 10 นาทีใน Vortex Mixer ;
คืออุณหภูมิ 60 8C เป็นเวลา 5 นาทีในการอาบน้ำ แล้วไฟฟ้าที่
2000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที ; น่านถูกทิ้ง ( 2 ) 200 มล.
เจ้าหน้าที่ silylating ( ไตร methysilylimidazole , Tsim ) ถูกเพิ่มลงในแต่ละ
หลอดสั่นอีก 10 นาทีเครื่อง Vortex และลบออก
ส่วนเกินของซิมกับ 1000 มิลลิลิตร deionised น้ำ 2 ml ของไอโซ
เพิ่มและท่อสั่นอีก 3 นาที หลังจากปฏิกิริยาสมบูรณ์
, ส่วนผสมที่ระดับ 2000 g
5 นาที สุดท้ายชั้นบน ( ไอโซ ) ได้รับการโอนเป็น 2
+ แก๊สโครมาโทกราฟี ( GC ) ขวดและน้ำตาลซึ่ง GC .