suspension plates so that the popul

suspension plates so that the population of dying cells can be
transferred easily to the well containing attached macrophages.
In L929sAhFas cells, apoptosis is induced by agonistic anti-Fas antibody
(250 ng/ml, for at least 1 h) and necrosis by mTNF (10,000 IU/
ml, for at least 7 h). The choice of time points depends on the kinetics
of cell death and has to be optimized for each cell line and death
inducer. Macrophages are coincubated with target cells in a 1:1
ratio for at least 1 h. After that, cocultures of macrophages and target
cells are fixed overnight at 4 C in the 6-well plate by immersion
in TEM fixation buffer (2% glutaraldehyde containing 1 mM
CaCl2 and 0.1 M sucrose buffered with 0.1 M Na-cacodylate, pH
7.4). Following several rinses in 100 mM Na-cacodylate containing
7.5% w/v sucrose, the samples are post-fixed overnight at 4 C in 1%
w/v OsO4 in the same buffer (without sucrose).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แขวนแผ่นเพื่อให้ประชากรของเซลล์ตายได้โอนย้ายได้ไปบังเอิญแนบดีมีในเซลล์ L929sAhFas, apoptosis จะเกิดจากแอนติบอดี agonistic Fa ที่ต่อต้าน(250 ng/ml สำหรับน้อย 1 h) และการตายเฉพาะส่วน โดย mTNF (10000 IU /มล. สำหรับน้อย 7 h) หลากหลายจุดเวลาขึ้นอยู่กับการจลนพลศาสตร์เซลล์ตาย และมีการปรับให้เหมาะสำหรับแต่ละบรรทัดของเซลล์และการตายinducer บังเอิญมี coincubated กับเซลล์เป้าหมาย 1:1อัตราส่วนที่ 1 h หลังจากนั้น cocultures บังเอิญและเป้าหมายเซลล์จะคงค้างคืนที่ 4 C ในจาน 6 บ่อ โดยแช่ในบัฟเฟอร์เบียการ (2% glutaraldehyde ประกอบด้วย 1 มม.ซูโครส CaCl2 และ 0.1 M buffered ด้วย 0.1 M cacodylate นา ค่า pH7.4) ดังต่อไปนี้ rinses หลายใน 100 มม. cacodylate นาประกอบด้วย7.5 ซูโครส% w/v ตัวอย่างหลังคงค้างคืนที่ 4 C ใน 1%w/v OsO4 ในบัฟเฟอร์ที่เดียว (ไม่มีซูโครส)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แผ่นระงับเพื่อให้ประชากรของเซลล์ตายที่สามารถ
โอนได้อย่างง่ายดายไปยังดีที่มีขนาดใหญ่ที่แนบมา.
ในเซลล์ L929sAhFas, apoptosis ถูกชักนำโดยแอนติบอดีต่อต้าน Fas กระชับมิตร
(250 ng / มิลลิลิตรเป็นเวลาอย่างน้อย 1 ชั่วโมง) และเนื้อร้ายโดย mTNF ( 10,000 IU /
มลอย่างน้อย 7 ชั่วโมง) ทางเลือกของจุดเวลาขึ้นอยู่กับจลนศาสตร์
การตายของเซลล์และจะต้องมีการปรับให้เหมาะสมกับแต่ละสายพันธุ์ของเซลล์และการตาย
ชักนำ macrophages จะ coincubated กับเซลล์เป้าหมายใน 1: 1
อัตราส่วนเป็นเวลาอย่างน้อย 1 ชั่วโมง หลังจากนั้น cocultures ของ macrophages และเป้าหมาย
เซลล์ได้รับการแก้ไขในชั่วข้ามคืนที่ 4 องศาเซลเซียสในแผ่น 6 ดีโดยการแช่
ในบัฟเฟอร์ตรึง TEM (glutaraldehyde 2% มี 1 มิลลิ
CaCl2 และ 0.1 M ซูโครสเป็นกลางกับ 0.1 M นา cacodylate ค่า pH
7.4 ) ต่อไปนี้การล้างหลายแห่งใน 100 มิลลินา cacodylate ที่มี
7.5% w / v ซูโครสตัวอย่างที่มีการโพสต์ในชั่วข้ามคืนคงที่ 4 องศาเซลเซียสใน 1%
w / v OsO4 ในบัฟเฟอร์เดียวกัน (ไม่รวมน้ำตาลซูโครส)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แผ่นระงับ เพื่อให้ประชากรของการตายเซลล์สามารถโอนได้อย่างง่ายดายเพื่อดี

l929sahfas ประกอบด้วยแนบแมโครเฟจ . ในเซลล์ ( เกิดจากแอนติบอดีต่อต้าน agonistic )
( 250 นาโนกรัมต่อมิลลิลิตรเป็นเวลาอย่างน้อย 1 ชั่วโมง ) และตายโดย mtnf ( 10 , 000 IU /
มิลลิลิตร เป็นเวลาอย่างน้อย 7 H ) . เลือกจุดเวลาขึ้นอยู่กับจลนศาสตร์
การตายของเซลล์ และมีการเพิ่มประสิทธิภาพสำหรับเซลล์แต่ละบรรทัดและความตาย
เอนไซม์ . macrophages จะ coincubated กับเซลล์เป้าหมาย ในอัตราส่วน 1 : 1
อย่างน้อย 1 ชั่วโมง หลังจากนั้น cocultures ของ macrophages และเซลล์เป้าหมาย
คงค้างคืนที่ 4  C ใน 6-well จานโดยการแช่
ในบัฟเฟอร์การตรึง TEM ( 2 % glutaraldehyde ที่มี CaCl2 1 mm
2 M sucrose 0.1 และ 0.1 M จากนั้นนำนา , PH
7.4 )ต่อไปนี้หลาย rinses 100 มม. จากนั้นนำที่มีนา
7.5 % w / v โดยจำนวนโพสต์คงค้างคืนที่ 4  C 1 %
w / v oso4 ในบัฟเฟอร์เดียวกัน ( ซูโครส )