The specific primers were designed

The specific primers were designed based on the highly conserve region of amino acid sequence deduced from BOR1s sequences of NCBI database. The amplification reaction was carried out in a total volume of 20 µl, with 100 ng of cDNA, 1 µl of 1mM dNTPs, 1U of Taq polymerase (5u/µl) (Fermentas, Canada), 4 µl of 25 mM of MgCl2, 2 µl of 10x buffer (Fermentas, Canada), and 0.5 µl of 5 µM of forward and reverse of each primer (Table 1). The amplification was performed under the following conditions: preliminary denaturation at 95 °C for 3 min; then 30 cycles of denaturing at 94°C for 30 sec, annealing at 58°C for 30 sec, and extension at 72°C for 1 min; and final extension at 72°C for 5 min. The amplification product was resolved on a 0.7% (w/v) agarose gel electrophoresis at 100 V for 40 min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไพรเมอร์เฉพาะถูกออกแบบตามขออนุรักษ์พื้นที่ของกรดอะมิโนลำดับ deduced จาก BOR1s ลำดับของฐานข้อมูล NCBI ปฏิกิริยาขยายถูกดำเนินการในปริมาณรวม 20 µl, 100 ฉบับของ cDNA, 1 µl ของ dNTPs มม. 1U ของพอลิเมอเรส Taq (5u/µl) (Fermentas แคนาดา), 4 µl MgCl2 25 มม. 2 µl ของบัฟเฟอร์ 10 เท่า (Fermentas แคนาดา), และ 0.5 µl ขนาด 5 µm ไปข้างหน้า และย้อนหลังของแต่ละสี (ตาราง 1) ขยายการดำเนินการภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: denaturation เบื้องต้นที่อุณหภูมิ 95 ° C 3 นาที denaturing 94° c นาน 30 วินาที การหลอมที่ 58° C สำหรับ 30 วินาที และส่วนขยายที่ 72° C เป็นเวลา 1 นาที แล้ว 30 รอบ และสุดท้ายขยายที่ 72° C เป็นเวลา 5 นาที ขยายผลิตภัณฑ์ได้รับการแก้ไขในแบบอิเจ agarose 0.7% (w/v) ที่ 100 V สำหรับ 40 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงได้รับการออกแบบบนพื้นฐานของการอนุรักษ์สูงภูมิภาคของลำดับกรดอะมิโน deduced จากลำดับ BOR1s ของฐานข้อมูล NCBI ปฏิกิริยาขยายได้ดำเนินการในปริมาณรวมของ 20 ไมโครลิตรกับ 100 นาโนกรัมของยีน 1 ไมโครลิตรของ 1 mM dNTPs, 1U ของโพลิเมอร์ Taq (5U / ไมโครลิตร) (Fermentas, แคนาดา) 4 ไมโครลิตร 25 มิลลิของ MgCl2 2 ไมโครลิตร 10 เท่าบัฟเฟอร์ (Fermentas แคนาดา) และ 0.5 ไมโครลิตร 5 ไมครอนของไปข้างหน้าและย้อนกลับของแต่ละไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) เครื่องขยายเสียงที่ได้รับการดำเนินการภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้: denaturation เบื้องต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 3 นาที; จากนั้นวันที่ 30 รอบของ denaturing ที่ 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, การอบที่ 58 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีและส่วนขยายที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที; และการขยายสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที การขยายผลิตภัณฑ์ได้รับการแก้ไขใน 0.7% (w / v) ข่าวคราว agarose ที่ 100 V สำหรับ 40 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไพร์เมอร์จำเพาะออกแบบตามสูงอนุรักษ์ภูมิภาคของลำดับกรดอะมิโนที่ได้จาก bor1s ลำดับฐานข้อมูล ncbi . โดยการเพิ่มปฏิกิริยาออกมาในปริมาณ 20 µ L 100 นาโนยีน 1 µ L 1 มิลลิเมตร dntps วิดของแท็ก , เมอเรส ( 5U / µ l ) ( fermentas , แคนาดา ) , 4 µ L 25 มม. ชุด 2 µผม 10x บัฟเฟอร์ ( fermentas , แคนาดา ) และµ 0.5 ลิตร 5 µ M ไปข้างหน้าและย้อนกลับของแต่ละหลัก ( ตารางที่ 1 ) การเพิ่มปริมาณได้ดำเนินการภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้ : เบื้องต้น ( 95 องศา C เป็นเวลา 3 นาที จากนั้น 30 รอบ ที่ 94 ° C ี่ 30 วินาที annealing ที่ 58 องศา C เป็นเวลา 30 วินาที และนามสกุลที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที และส่วนขยายสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 5 นาที โดยการเพิ่มผลิตภัณฑ์ ได้รับการแก้ไขใน 0.7 % ( w / v ) เจลอิเลคโตรโฟรีซีสที่ 100 V สำหรับ 40 นาที