The term Cint(t) represents the gra

The term Cint(t) represents the gradual change of the initial
internal solute concentration due to cellular volume changes. Also,
during the on-chip merging of two droplets, proper mixing of
droplets will require a finite amount of time. In order to include the
delay in reaching the target concentration Ctarget in the droplet, an
additional differential equation based on first order kinetics characterized
by a rate constant (kc) was introduced in the model:
dCs
dt = kc (Cs − Ctarget) (10)
In our model we assumed that protoplast shape and aspect does
not change over time. Hence to obtain two differential equations
for the two evolving axis, an additional constant k was introduced
in the model which was defined as
k = D1
D2
(11)
This assumption was based on the fact that from our measurements
it appeared that the aspect of the protoplast does not change
over time. Hence, from Eqs.(6)–(11),the rate of change ofthe major
and minor axis can be deduced as:
d(D1)
dt = −

1 +
k2
k2 − 1
sin−1

1 − 1
k2

PVw ×


Cs − Cint(0)6V(0)k2
D3
2

(12)
d(D2)
dt = −

1
k +
k
k2 − 1
sin−1

1 − 1
k2

PVw ×


Cs − Cint(0)6V(0)
kD3
2

(13)
Using Eq. (12)–(13), permeability coefficient value (P) is determined.
The model simulates the change over time of D1 and D2
on the basis of the changing internal solute concentration Cint(t)
within a protoplast. Cint is an unknown and dynamic value which is
in turn calculated from the measured change of volume over time
using Eqs. (7)–(10). The changing Cint is further used for simulating
major and minor axis values that can best model the monitored
data. The developed model (Eqs. (8)–(13)) was implemented and
model parameters (P, D1(t) and D2(t)) were estimated using OptiPa
[29], a dedicated optimization tool that was developed for use with
Matlab (Matlab R2011b, The MathWorks, Inc., Natick, MA, USA).
Model parameters were estimated on the basis of least-square
non-linear optimization. To take into account the reliability of subsequent
measured points, a weighting vector was introduced. As
some time series showed clear artifact toward the end of the measured
data, the weighting was used to down weight the influence
of latter measurements, as compared to earlier measurements, on
the calculated P.
3. Results and discussion
3.1. Magnetic microparticle labeling of protoplasts
The non-adhering nature of suspension cells sets a major limitation
in monitoring and tracking the responses of single isolated
cells. Hence immobilization strategies are required to effectively
limit the spatial motility of such cells in three dimensions. We
choose magnetic labeling as a strategy to anchor cells on a fixed
position. Due to the unavailability of adequate antibodies which
could conjugate with epitopes located on the exterior of the
A. thaliana plasma membrane, we looked for a versatile linker
molecule with applicability over a wide range of suspension cell
types Concanavalin A is a protein molecule, that selectively recognizes
-linked mannose present as part of a core oligosaccharide
in many serum and membrane glycoproteins. It has been demonstrated
in the literature for isolating DNA, proteins and various cell
types [25,26,30,31]. Here, for coupling streptavidin coated MMP
to protoplasts, biotinylated ConA was chosen as a linker molecule
Protoplast were isolated from A. thaliana plants (Fig. 2(a)) and functionalized
with biotinylated ConA. During the functionalization a
reduction in the number of cells was observed after incubation with
ConA concentrations higher than 10 ng L−1, suggesting a negative
effect of ConA on cell integrity, which caused protoplasts to burst
(Fig. 2(b)).
Toxic effects of ConA have been previously described in literature
and are due to the activation of intracellular pathways
that leads to apoptosis, possibly after ConA internalization [32,33].
However in the presented experiments, this toxic effect of ConA
was negligible at concentrations lower than 10 ng L−1 which was
thus defined as the highest dosage to be used in further experiments.
ConA treatment of protoplasts also had an effect on the
clustering of cells, defined as two or more cells physically interacting
(Fig. 2(c)). Clustering became more prominent at higher ConA
concentrations with about 70% of the cells clustered at the highest
concentration tested (Fig. 2(d)). Such effect is not surprising as
it is known that ConA is a multivalent molecule and can bind to
more than one -linked mannose group at the time hence forming
bridges between cells [33–35]. For the purposes of this work,
overcrowding of cells needed to be avoided as it would hinder
accurate monitoring of protoplasts morphology during the water
permeability measurements, thereby compromising the quality of
measurements on the DMF chip. Based on these considerations and
the preliminary experiments, 1–10 ng L−1 ConA was selected as
the working range for the next experiments. The second step of
the procedure required incubation of biotinylated ConAprotoplas

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คำว่า Cint(t) หมายถึงการค่อย ๆ เริ่มต้นตัวถูกละลายเข้มข้นภายในเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงระดับเซลลูลาร์ ยังระหว่างในชิรวมสองหยด การผสมหยดน้ำจะต้องมีระยะเวลาจำกัด เพื่อรวมตัวความล่าช้าในการเข้าถึงเป้าหมายความเข้มข้น Ctarget ในหยด การสมการเชิงอนุพันธ์เพิ่มเติมตามลักษณะจลนพลศาสตร์ลำดับแรกโดยมีอัตรา คง (kc) ถูกนำมาใช้ในรูปแบบ:dCsdt = kc (Cs − Ctarget) (10)ในรูปแบบของเรา เราสันนิษฐานว่า protoplast รูปร่างและลักษณะที่ไม่ไม่เปลี่ยนแปลงตลอดเวลา ดังนั้นการขอรับสองสมการแนะนำที่สองพัฒนาแกน k เป็นค่าคงเพิ่มเติมในรูปแบบที่ถูกกำหนดเป็นk = D1D2(11)สมมติฐานนี้ตามข้อเท็จจริงที่ได้จากการวัดของเราก็ปรากฏว่า ในส่วนของ protoplast ไม่เปลี่ยนแปลงช่วงเวลานี้ ดังนั้น จาก Eqs (6) – (11) อัตราการเปลี่ยนแปลงใหญ่และสามารถสามารถ deduced แกนรองเป็น:d(D1)dt =−1 +k2k2 − 1sin−11 − 1k2 PVw ×Cs − Cint (0) 6V k2 (0)D32(12)d(D2)dt =−1k +kk2 − 1sin−11 − 1k2 PVw ×Cs − Cint(0)6V(0)kD32(13)ใช้ Eq. (12)–(13) ค่าสัมประสิทธิ์การซึมผ่าน (P) จะถูกกำหนดแบบจำลองการเปลี่ยนแปลงช่วงเวลาของ D1 และ D2บนพื้นฐานของการเปลี่ยนแปลงภายในตัวถูกละลายความเข้มข้น Cint(t)ภายใน protoplast Cint เป็นค่าไม่รู้จัก และไดนามิกซึ่งเป็นในการคำนวณปริมาณการวัดช่วงเวลาusing Eqs. (7)–(10). The changing Cint is further used for simulatingmajor and minor axis values that can best model the monitoreddata. The developed model (Eqs. (8)–(13)) was implemented andmodel parameters (P, D1(t) and D2(t)) were estimated using OptiPa[29], a dedicated optimization tool that was developed for use withMatlab (Matlab R2011b, The MathWorks, Inc., Natick, MA, USA).Model parameters were estimated on the basis of least-squarenon-linear optimization. To take into account the reliability of subsequentmeasured points, a weighting vector was introduced. Assome time series showed clear artifact toward the end of the measureddata, the weighting was used to down weight the influenceof latter measurements, as compared to earlier measurements, onthe calculated P.3. Results and discussion3.1. Magnetic microparticle labeling of protoplastsThe non-adhering nature of suspension cells sets a major limitationin monitoring and tracking the responses of single isolatedcells. Hence immobilization strategies are required to effectivelylimit the spatial motility of such cells in three dimensions. Wechoose magnetic labeling as a strategy to anchor cells on a fixedposition. Due to the unavailability of adequate antibodies whichcould conjugate with epitopes located on the exterior of theA. thaliana plasma membrane, we looked for a versatile linkermolecule with applicability over a wide range of suspension celltypes Concanavalin A is a protein molecule, that selectively recognizes-linked mannose present as part of a core oligosaccharidein many serum and membrane glycoproteins. It has been demonstratedin the literature for isolating DNA, proteins and various celltypes [25,26,30,31]. Here, for coupling streptavidin coated MMPto protoplasts, biotinylated ConA was chosen as a linker moleculeProtoplast were isolated from A. thaliana plants (Fig. 2(a)) and functionalizedwith biotinylated ConA. During the functionalization areduction in the number of cells was observed after incubation withConA concentrations higher than 10 ng L−1, suggesting a negativeeffect of ConA on cell integrity, which caused protoplasts to burst(Fig. 2(b)).Toxic effects of ConA have been previously described in literatureand are due to the activation of intracellular pathwaysthat leads to apoptosis, possibly after ConA internalization [32,33].However in the presented experiments, this toxic effect of ConAwas negligible at concentrations lower than 10 ng L−1 which wasthus defined as the highest dosage to be used in further experiments.ConA treatment of protoplasts also had an effect on theclustering of cells, defined as two or more cells physically interacting(Fig. 2(c)). Clustering became more prominent at higher ConAconcentrations with about 70% of the cells clustered at the highestconcentration tested (Fig. 2(d)). Such effect is not surprising asit is known that ConA is a multivalent molecule and can bind tomore than one -linked mannose group at the time hence formingbridges between cells [33–35]. For the purposes of this work,overcrowding of cells needed to be avoided as it would hinderaccurate monitoring of protoplasts morphology during the waterpermeability measurements, thereby compromising the quality ofmeasurements on the DMF chip. Based on these considerations andthe preliminary experiments, 1–10 ng L−1 ConA was selected asthe working range for the next experiments. The second step ofthe procedure required incubation of biotinylated ConAprotoplas

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คำ Cint (T) หมายถึงการเปลี่ยนแปลงอย่างค่อยเป็นค่อยไปของเริ่มต้น
ความเข้มข้นของตัวละลายภายในเนื่องจากมีการเปลี่ยนแปลงปริมาณโทรศัพท์มือถือ นอกจากนี้
ในช่วงการควบรวมบนชิปสองหยดผสมที่เหมาะสมของ
หยดน้ำจะต้องมีจำนวน จำกัด ของเวลา เพื่อที่จะรวมถึง
ความล่าช้าในการเข้าถึงความเข้มข้นเป้าหมาย Ctarget ในหยดเป็น
สมการเชิงอนุพันธ์เพิ่มเติมตามจลนพลศาสตร์สั่งซื้อครั้งแรกโดดเด่น
ด้วยอัตราคงที่ (KC) เป็นที่รู้จักในรูปแบบ:
DCS
DT = KC (CS - Ctarget) (10 )
ในรูปแบบของเราที่เราสันนิษฐานว่ารูปร่างโปรโตพลาและด้านที่ไม่
ได้มีการเปลี่ยนแปลงอยู่ตลอดเวลา ดังนั้นเพื่อให้ได้สองสมการเชิงอนุพันธ์
สำหรับสองแกนพัฒนาเป็นคงที่ k เพิ่มเติมได้รับการแนะนำ
ในรูปแบบที่ถูกกำหนดให้เป็น
K = D1
D2
(11)
สมมติฐานนี้อยู่บนพื้นฐานของความจริงที่ว่าจากการวัดของเรา
ก็ปรากฏว่าทุกแง่มุมของ โปรโตพลาไม่เปลี่ยนแปลง
เมื่อเวลาผ่านไป . ดังนั้นจาก EQS (6) - (11), อัตราการเปลี่ยนแปลง ofthe ที่สำคัญ
แกนและรายย่อยสามารถสรุปได้ดังนี้:
D (D1)
dt = -
?
1 +
K2
? K2 - 1
บาป-1
?
1 - 1
K2 PVw × Cs - Cint (0) 6V (0) K2 ? D3 2 (12) D (D2) dt = - ? 1 K + k K2? - 1 บาป-1 ? 1 - 1 K2 PVw × Cs - Cint (0 ) 6V (0) ? Kd3 2 (13) โดยใช้สมการ (12) -. (13), การซึมผ่านของค่าสัมประสิทธิ์ค่า (P) จะถูกกำหนดรูปแบบจำลองการเปลี่ยนแปลงในช่วงเวลาของ D1 D2 และอยู่บนพื้นฐานของการเปลี่ยนแปลงความเข้มข้นของตัวละลายภายใน Cint (T) เดอะภายในโปรโตพลา CInt เป็นค่าที่ไม่รู้จักและแบบไดนามิกซึ่งเป็นในทางกลับคำนวณจากการเปลี่ยนแปลงของปริมาณที่วัดได้เมื่อเวลาผ่านไปโดยใช้ EQS (7) - (10) การเปลี่ยนแปลง Cint ถูกนำมาใช้ต่อไปสำหรับการจำลองค่าแกนหลักและรองที่สามารถรูปแบบที่ดีที่สุดการตรวจสอบข้อมูล ที่พัฒนารูปแบบ (EQS (8) -. (13)) ถูกนำมาใช้และพารามิเตอร์แบบ (P, D1 (T) และ D2 (T)) ได้รับการคำนวณโดยใช้วิธี OptiPa [29] ซึ่งเป็นเครื่องมือเพิ่มประสิทธิภาพเฉพาะที่ได้รับการพัฒนาสำหรับใช้กับMatlab (Matlab R2011b, The MathWorks, Inc เนติก, MA, USA). พารามิเตอร์แบบได้ประมาณบนพื้นฐานของอย่างน้อยตารางการเพิ่มประสิทธิภาพไม่ใช่เชิงเส้น จะต้องคำนึงถึงความน่าเชื่อถือของที่ตามมาจุดวัดเวกเตอร์น้ำหนักได้รับการแนะนำ ขณะที่บางอนุกรมเวลาแสดงให้เห็นว่าสิ่งประดิษฐ์ที่ชัดเจนในช่วงปลายที่วัดได้ข้อมูลการชั่งน้ำหนักที่ใช้ในการลงน้ำหนักอิทธิพลของการวัดหลังเมื่อเทียบกับการวัดก่อนหน้านี้เมื่อคำนวณพี3 ผลการค้นหาและการอภิปราย3.1 การติดฉลาก microparticle แม่เหล็กของโปรโตพลาธรรมชาติที่ไม่ยึดมั่นของเซลล์ระงับการกำหนดข้อ จำกัด ที่สำคัญในการตรวจสอบและติดตามการตอบสนองของบางแห่งเดียวเซลล์ ดังนั้นกลยุทธ์การตรึงจะต้องมีประสิทธิภาพในการจำกัด การเคลื่อนไหวของการกระจายตัวของเซลล์ดังกล่าวในสามมิติ เราเลือกการติดฉลากแม่เหล็กเป็นกลยุทธ์ยึดเซลล์ในการแก้ไขตำแหน่ง เนื่องจากความไม่พร้อมของแอนติบอดีที่เพียงพอที่จะผันกับ epitopes ตั้งอยู่บนด้านนอกของA. เยื่อหุ้ม thaliana เรามองหาลิงเกอร์อเนกประสงค์โมเลกุลที่มีการบังคับใช้ในช่วงกว้างของเซลล์ระงับประเภท Concanavalin เป็นโมเลกุลโปรตีนที่คัดเลือกตระหนักถึงปัจจุบัน mannose -linked เป็นส่วนหนึ่งของ Oligosaccharide หลักในหลายซีรั่มและเมมเบรนไกลโคโปรตีน มันได้รับการพิสูจน์ในวรรณคดีสำหรับการแยกดีเอ็นเอโปรตีนและเซลล์ต่างๆประเภท [25,26,30,31] ที่นี่สำหรับการมีเพศสัมพันธ์ streptavidin เคลือบ MMP เพื่อโปรโตพลา, ไบโอติน cona รับเลือกให้เป็นโมเลกุลลิงเกอร์โปรโตพลาที่แยกได้จากพืช A. thaliana (รูป. 2 (ก)) และฟังก์ชันกับ biotinylated cona ในระหว่างหมู่ฟังก์ชันที่การลดจำนวนของเซลล์พบว่าหลังจากการบ่มด้วยความเข้มข้น cona สูงกว่า 10 นาโนกรัม L-1 แนะนำเชิงลบผลกระทบของ cona กับความสมบูรณ์ของเซลล์ซึ่งเกิดจากโปรโตพลาออกมา(รูปที่ 2. (ข)). เป็นพิษ ผลกระทบของการ cona ได้รับการอธิบายก่อนหน้านี้ในวรรณคดีและเนื่องจากการเปิดใช้งานของทางเดินภายในเซลล์ที่นำไปสู่การตายของเซลล์อาจจะเป็นหลังจาก cona internalization [32,33]. อย่างไรก็ตามในการทดลองนำเสนอผลพิษของ cona ได้เล็กน้อยที่ระดับความเข้มข้นต่ำกว่า 10 NG L-1 ซึ่งถูกกำหนดไว้จึงเป็นปริมาณสูงสุดที่จะใช้ในการทดลองต่อไป. รักษา cona ของโปรโตพลายังมีผลกระทบต่อการจัดกลุ่มของเซลล์ที่กำหนดไว้สองคนหรือมากกว่าเซลล์ปฏิสัมพันธ์ทางร่างกาย(รูปที่ 2. (c)) . การจัดกลุ่มก็ยิ่งโดดเด่นที่ cona สูงกว่าความเข้มข้นที่มีประมาณ 70% ของเซลล์คลัสเตอร์ที่สูงสุดความเข้มข้นของการทดสอบ (รูป. 2 (D)) ผลกระทบดังกล่าวไม่น่าแปลกใจที่เป็นที่รู้จักกันว่า cona เป็นโมเลกุล multivalent และสามารถผูกกับกลุ่ม mannose มากกว่าหนึ่ง -linked ในเวลานั้นด้วยเหตุนี้การสร้างสะพานระหว่างเซลล์ [33-35] สำหรับจุดประสงค์ของงานนี้ที่แออัดยัดเยียดของเซลล์ที่จำเป็นในการที่จะหลีกเลี่ยงเท่าที่จะเป็นอุปสรรคต่อการตรวจสอบความถูกต้องของโปรโตพลาสัณฐานวิทยาในช่วงน้ำวัดการซึมผ่านจึงไม่สูญเสียคุณภาพของวัดชิปกรมเชื้อเพลิงธรรมชาติ ขึ้นอยู่กับการพิจารณาเหล่านี้และการทดลองเบื้องต้น 1-10 NG L-1 cona ได้รับเลือกเป็นช่วงการทำงานสำหรับการทดลองต่อไป ขั้นตอนที่สองของการบ่มที่จำเป็นขั้นตอนของการ ConAprotoplas biotinylated