Pollen Collection The two transgeni

Pollen Collection The two transgenic Bt cotton cultivars ZMSJ (expressing Cry1Ac/Cry2Ab) and ZMKCKC (expressing Cry1Ac/EPSPS) used in this study were gifts from the Institute of Cotton Research, the Chinese Academy of Agricultural Science. The local cotton variety, Emian 24 (non-GM cotton), was a gift from the National Key Laboratory of Crop Genetic Improvement, Huazhong Agricultural University. The ZMSJ cotton expresses two Bt proteins for the control of lepidopteran pests, such as the cotton bollworm Helicoverpa armigera. The ZMKCKC cotton expresses one gene for insect resistance and one gene for herbicide tolerance. All cultivars were cultivated under recommended agronomic practices at the experiment field at Huazhong Agricultural University in early May 2011 without exposure to any pesticide. Pollen samples of each cultivar were collected using the multi- point field sampling method [18] on June 20th, July 20th, and August 20th (early bloom, mid-stage bloom and late bloom respectively). The freshly collected cotton pollen samples were sieved (830 mm mesh size) and stored at –80uC until they were used for experiments or analyses.
ELISA Quantitative Detection of Bt Proteins in Pollen The quantities of Cry1Ac and Cry2Ab in each pollen sample were estimated using Envirologix Qualiplate Kits (EnviroLogix Quantiplate Kit, Portland, ME, USA). The detection limits for the two proteins were 0.1 ng/g and 0.52 ng/g, respectively. Before analysis, the fresh pollen samples were homogenized in 4 ml of extraction buffer and then kept at 4uC overnight for extraction of insecticidal proteins. After being centrifuged for 15 min at 7000 g, the supernatants of the extraction were used for the analyses.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ละอองเกสรชุดสองถั่วเหลืองบีทีฝ้ายพันธุ์ ZMSJ (แสดง Cry1Ac/Cry2Ab) และ ZMKCKC (แสดง Cry1Ac/EPSPS) ใช้ในการศึกษานี้ได้ของขวัญจากสถาบันของฝ้ายการวิจัย การจีนวิทยาลัยเกษตรวิทยาศาสตร์ ฝ้ายท้องถิ่นหลากหลาย Emian 24 (ฝ้ายไม่ใช่กรัม), เป็นของขวัญจากชาติคีย์ห้องปฏิบัติของพืชพันธุกรรมพัฒนา มหาวิทยาลัยเกษตร Huazhong ฝ้าย ZMSJ แสดงโปรตีนบีทีสองตัววรณ์ lepidopteran เช่นฝ้าย bollworm Helicoverpa armigera ฝ้าย ZMKCKC แสดงยีนหนึ่งสำหรับต้านทานแมลงและยีนหนึ่งการยอมรับสารกำจัดวัชพืช พันธุ์ทั้งหมดที่ปลูกภายใต้แนวทางลักษณะทางแนะนำที่ฟิลด์การทดลองที่มหาวิทยาลัยเกษตร Huazhong ในช่วง 2554 พฤษภาคมโดยไม่ต้องสัมผัสกับสารพิษใด ๆ ละอองเกสร cultivar แต่ละตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมใช้วิธีการสุ่มตัวอย่างการฟิลด์หลายจุด [18] 20 มิถุนายน 20 กรกฎาคม และ 20 สิงหาคม (ช่วงบลูม บลูมขั้นกลาง และบานปลายตามลำดับ) ตัวอย่างผ้าฝ้ายสดรวบรวมละอองเกสรถูก sieved (830 มม.ขนาด) และเก็บที่ – 80uC จนกว่าจะใช้สำหรับการทดลองหรือวิเคราะห์ELISA เชิงปริมาณตรวจของ Bt โปรตีนในปริมาณ Cry1Ac และ Cry2Ab ในแต่ละตัวอย่างละอองเกสรได้ประเมินการใช้ชุด Qualiplate Envirologix (EnviroLogix Quantiplate Kit พอร์ตแลนด์ ME สหรัฐอเมริกา) ละอองเกสร ตรวจสอบข้อจำกัดสำหรับโปรตีนสองได้ 0.1 ng/g และ 0.52 ng/g ตามลำดับ ก่อนการวิเคราะห์ ตัวอย่างละอองเกสรสด homogenized เป็นกลุ่มใน 4 ml สกัดบัฟเฟอร์แล้ว เก็บไว้ที่ 4uC สำหรับสกัดโปรตีน insecticidal ค้างคืน หลังจากการ centrifuged สำหรับ 15 นาทีที่ 7000 g, supernatants สกัดใช้สำหรับการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเก็บเกสรทั้งสองสายพันธุ์ฝ้ายบีทีพันธุ์ ZMSJ (แสดง Cry1Ac / Cry2Ab) และ ZMKCKC (แสดง Cry1Ac / EPSPS) ที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้รับของขวัญจากสถาบันการวิจัยฝ้ายจีนสถาบันวิทยาศาสตร์การเกษตร ความหลากหลายฝ้ายท้องถิ่น Emian 24 (Non-GM ผ้าฝ้าย) เป็นของขวัญจากห้องปฏิบัติการที่สำคัญแห่งชาติของพันธุกรรมพืชปรับปรุง Huazhong มหาวิทยาลัยเกษตร ผ้าฝ้าย ZMSJ แสดงออกโปรตีนสองบาทสำหรับการควบคุมศัตรูพืช Lepidopteran เช่นหนอนเจาะสมอฝ้าย Helicoverpa armigera ผ้าฝ้าย ZMKCKC หนึ่งเป็นการแสดงออกของยีนต้านทานแมลงและเป็นหนึ่งในยีนสำหรับความอดทนสารกำจัดวัชพืช ทุกสายพันธุ์ได้รับการปลูกฝังภายใต้การปฏิบัติทางการเกษตรที่แนะนำที่สนามทดลองที่ Huazhong มหาวิทยาลัยเกษตรในช่วงต้นเดือนพฤษภาคม 2011 โดยไม่ต้องสัมผัสกับสารกำจัดศัตรูพืชใด ๆ ตัวอย่างเกสรของแต่ละพันธุ์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยใช้จุดหลายวิธีการสุ่มตัวอย่างสนาม [18] ในวันที่ 20 มิถุนายน 20 กรกฎาคมและ 20 สิงหาคม (บานในช่วงต้นบานกลางเวทีและบานปลายตามลำดับ) กลุ่มตัวอย่างที่เก็บรวบรวมเกสรฝ้ายสดใหม่ถูกร่อน (830 มมขนาดตา) และเก็บไว้ที่ -80uC จนกว่าพวกเขาจะถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองหรือการวิเคราะห์.
ELISA ตรวจหาปริมาณโปรตีนบาทในปริมาณละอองเกสรของ Cry1Ac และ Cry2Ab ในแต่ละตัวอย่างเกสรประมาณโดยใช้ Envirologix ชุด Qualiplate (EnviroLogix Quantiplate Kit, พอร์ตแลนด์, ME, สหรัฐอเมริกา) ข้อ จำกัด การตรวจสอบทั้งสองมีโปรตีน 0.1 ng / กรัมและ 0.52 นาโนกรัม / กรัมตามลำดับ ก่อนที่จะวิเคราะห์ตัวอย่างเกสรสดถูกปั่นใน 4 มล. ของบัฟเฟอร์สกัดแล้วเก็บไว้ที่ 4uC ในชั่วข้ามคืนสำหรับการสกัดโปรตีนฆ่าแมลง หลังจากที่ถูกปั่นเป็นเวลา 15 นาทีที่ 7,000 กรัม supernatants ของการสกัดที่ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เกสรดอกไม้คอลเลกชันสองต้นฝ้ายบีทีสายพันธุ์ zmsj ( แสดง cry1ac / cry2ab ) และ zmkckc ( แสดง cry1ac / epsps ) ที่ใช้ในการศึกษา คือ ของขวัญจากสถาบันวิจัยฝ้าย , จีน Academy of Science เกษตรกรรม ความหลากหลายผ้าฝ้ายพื้นเมือง , 24 emian ( ไม่ใช่จีเอ็มฝ้าย ) คือของขวัญจากห้องปฏิบัติการแห่งชาติหลักของการปรับปรุงพันธุ์พืช , มหาวิทยาลัยเกษตร Huazhong .การ zmsj ฝ้ายแสดงโปรตีนทั้งสอง lepidopteran BT สำหรับการควบคุมศัตรูพืช เช่น หนอนเจาะสมอฝ้าย Helicoverpa armigera . การ zmkckc ฝ้ายแสดงยีนต้านทานแมลงและยีนทนสารเคมี .ทุกพันธุ์ที่ปลูกภายใต้การแนะนำการปฏิบัติทางการเกษตรในแปลงทดลองที่มหาวิทยาลัยเกษตร Huazhong ในช่วงต้นเดือนพฤษภาคม 2011 โดยการสัมผัสกับยาฆ่าแมลง เรณูตัวอย่างของแต่ละพันธุ์ที่ใช้ในการเก็บรวบรวมข้อมูลโดยวิธีการสุ่มตัวอย่างหลายจุด [ 18 ] 20 มิถุนายน 20 กรกฎาคมและ 20 สิงหาคม ( ต้น บาน บาน เวทีกลางและปลายบาน ตามลำดับ )ใหม่เก็บเกสรฝ้ายจำนวนขนาด ( ตาข่ายขนาด 830 มม. ) และเก็บไว้ที่ - 80uc จนกว่าพวกเขาจะถูกใช้เพื่อการทดลองหรือการวิเคราะห์เชิงปริมาณการตรวจหาโปรตีน .
+ BT เรณู ปริมาณและ cry1ac cry2ab ในแต่ละกลุ่มตัวอย่าง โดยใช้เกสรประมาณ envirologix qualiplate อิสระ ( envirologix quantiplate Kit , พอร์ตแลนด์ , ฉัน , สหรัฐอเมริกา .การตรวจสอบข้อ จำกัด สำหรับโปรตีนทั้งสองเป็น 0.1 ng / g และ 0.52 กรัม / กรัม ตามลำดับ ก่อนการวิเคราะห์ เกสรสดจำนวนโฮโม 4 มิลลิลิตรการสกัดแล้วเก็บไว้ในบัฟเฟอร์ 4uc ค้างคืนสำหรับการสกัดโปรตีนที่ผลิต หลังจากถูกไฟฟ้า 15 นาทีที่ 7 g , supernatants ของการสกัดที่ใช้สำหรับวิเคราะห์ข้อมูล