2. Experimental methodology2.1. Ric

2. Experimental methodology
2.1. Rice bran
Whole rice bran was supplied by a rice institute named IRGA (Instituto Rio Grandense de Arroz), located in Rio Grande do Sul, Brazil, being kept at −10 °C, until fermentative process. Rice bran preparation as a substrate for SSF process consisted of standardizing its granulometry between 0.35 and 0.70 mm.

2.2. Inoculum preparation
Fungus strain (R. oryzae CCT 7560) used as fermentative agent was isolated from rice bran and identified in the Laboratory of Microbiology at the Food Processing Center of Passo Fundo University (UPF), RS, Brazil. The cultures were kept at 4 °C in potato-dextrose agar (PDA) medium and the spores were scraped from the slopes into Tween 80 (0.2%) aqueous emulsion. The same medium was used for spores incubation during 7 d at 30 °C until new and complete fungi sporulation in the culture. Spores were enumerated in Neubauer chamber.

2.3. Solid-state fermentation (SSF)
Fermentation was carried out in tray bioreactors, with dimensions of 29 × 17 × 5.5 cm3. Rice bran substrate (100 g) was placed in bioreactors, forming a fine layer of ∼2 cm and autoclaved, after its homogenization with 45 mL saline solution (KH2PO4 2 g L−1, MgSO4 1 g L−1, NH2CONH2 1.8 g L−1 in HCl 0.4 M). Bran initial spores concentration was 4.0 × 106 spores g−1 (Badiale-Furlong et al., 2007). Moisture was adjusted to 50% with sterilized water addition and trays were covered with sterilized gauze to allow aeration, before being incubated at 30 °C for 120 h. Fermentation chamber was previously sterilized with formaldehyde. To carry out physic-chemical characterization, samples were withdrawn at the beginning and each 24 h of SSF, being stored at −18 °C.

2.4. Fungal biomass
The fungal biomass was produced in Petri dishes containing PDA, sterilized and placed on plates in a sterile environment. Each dish was added 1 mL aliquot of R. oryzae spore suspension and incubated for 120 h in an oven at 30 °C. Fungal mycelium was recovered from PDA by scraping with the aid of a spatula, excluding PDA. FA profile as well as phospholipids were determined in the biomass in order to know the constitution of the fermenting agent.

2.5. Lipid extraction
Rice bran sample (particle size between 0.35 and 0.7 mm) was subjected to Soxhlet (AOAC, 2000) and Folch et al. (1957) extraction to verify their yield.

2.6. Phospholipids assessment
First of all, a calibration curve to determine phospholipids was prepared using potassium dihydrogen phosphate, according to Badiale-Furlong et al. (2006). To determine phospholipids in the samples, lipids extracted from fermented and not fermented rice bran by Folch et al. (1957) method were weighed between 0.3 and 1.0 g, dried, incinerated and dissolved, being measured spectrophotometrically at 800 nm. Further details are described in the Supplementary file.

2.7. Fatty acid profile
Bran lipid fraction extracted by Folch et al. (1957) method was subjected to gas chromatography (GC) for FAs separation. Lipids were esterified with 0.5 N KOH methanolic solution catalyzed by BF3 solution (15 mL of 20% BF3 diluted in methanol 1:1). The solvent was evaporated under nitrogen stream and the residue solubilized by 10 mL hexane, from which 1 μL was injected for GC analyses.

2.8. Statistical analysis
The data generated from this study were subjected to one-way analysis of variance (ANOVA) at 5% level of significance. Means were compared by Tukey test. All determinations were carried out in triplicates.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วิธีการทดลอง
2.1 รำข้าว
รำข้าวทั้งหมดถูกจัดทำโดยสถาบันข้าวชื่อ Irga (Instituto ริโอเดอ Grandense Arroz) ที่ตั้งอยู่ใน Rio Grande do Sul, บราซิลถูกเก็บไว้ที่ -10 องศาเซลเซียสจนกว่ากระบวนการหมัก เตรียมรำข้าวเป็นสารตั้งต้นสำหรับกระบวนการ SSF ประกอบด้วยเซลล์ขนาดเล็กมาตรฐานระหว่าง 0.35 และ 0.70 มม. 2.2 หัวเชื้อเตรียมสายพันธุ์เชื้อรา (R. oryzae CCT 7560) ที่ใช้เป็นตัวแทนการหมักที่แยกได้จากรำข้าวและระบุไว้ในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาที่ศูนย์การแปรรูปอาหารของ Passo Fundo มหาวิทยาลัย (UPF), RS, ประเทศบราซิล วัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสในอาหารเลี้ยงเชื้อมันฝรั่งเดกซ์โทรส (PDA) ขนาดกลางและสปอร์ที่ได้คัดลอกมาจากเนินเขาที่เป็น Tween 80 (0.2%) อิมัลชันน้ำ สูตรเดิมที่ใช้สำหรับการบ่มเพาะสปอร์ในช่วง 7 วันที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสจนกว่าจะสร้างสปอร์เชื้อราใหม่และมีความสมบูรณ์ในการเพาะเลี้ยง สปอร์ได้รับการแจกแจงในห้อง Neubauer. 2.3 การหมักแบบ solid-state (SSF) การหมักได้ดำเนินการในถังหมักถาดที่มีขนาด 29 × 17 × 5.5 cm3 พื้นผิวรำข้าว (100 กรัม) ถูกวางไว้ในถังหมักไว้ชั้นดีของ ~2 ซม. และเบาหลังจากที่เป็นเนื้อเดียวกันกับน้ำเกลือ 45 มิลลิลิตร (KH2PO4 2 กรัม L-1, MgSO4 1 กรัม L-1, NH2CONH2 1.8 กรัม L -1 ใน HCl 0.4 M) สปอร์เริ่มต้นรำเข้มข้นเท่ากับ 4.0 × 106 สปอร์กรัม-1 (Badiale-หลา et al., 2007) ความชื้นมีการปรับถึง 50% ด้วยน้ำนอกจากการฆ่าเชื้อและถาดถูกปกคลุมไปด้วยผ้ากอซฆ่าเชื้อเพื่อให้อากาศก่อนที่จะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 120 ชั่วโมง ห้องหมักได้รับการฆ่าเชื้อก่อนหน้านี้กับฟอร์มาลดีไฮด์ เพื่อดำเนินการลักษณะฟิสิกส์เคมีตัวอย่างถูกถอนออกที่จุดเริ่มต้นและแต่ละ 24 ชั่วโมง SSF ถูกเก็บไว้ที่ -18 ° C. 2.4 ชีวมวลเชื้อราเชื้อราที่ผลิตในจานเลี้ยงเชื้อที่มี PDA, การฆ่าเชื้อและวางไว้บนจานในสภาพแวดล้อมที่ผ่านการฆ่าเชื้อ อาหารแต่ละจานถูกบันทึก aliquot มิลลิลิตร 1 ของอาร์ oryzae สปอร์แขวนลอยและบ่มเป็นเวลา 120 ชั่วโมงในเตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เส้นใยเชื้อราหายจาก PDA โดยขูดด้วยความช่วยเหลือของไม้พายไม่รวม PDA รายละเอียดเอฟเอเช่นเดียวกับฟอสโฟได้รับการพิจารณาในชีวมวลเพื่อที่จะทราบรัฐธรรมนูญของตัวแทนหมัก. 2.5 การสกัดไขมันตัวอย่างรำข้าว (ขนาดอนุภาคระหว่าง 0.35 และ 0.7 มม) ก็ยังถูกวิธีหมัก (AOAC, 2000) และ Folch และคณะ (1957) การสกัดเพื่อตรวจสอบผลตอบแทนของพวกเขา. 2.6 phospholipids ประเมินแรกของทุกเส้นโค้งการสอบเทียบเพื่อตรวจสอบ phospholipids ถูกจัดทำขึ้นโดยใช้โพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟตตาม Badiale-หลาและคณะ (2006) การตรวจสอบในตัวอย่าง phospholipids ไขมันที่สกัดได้จากการหมักและไม่รำข้าวหมักโดย Folch และคณะ (1957) วิธีการได้รับการชั่งน้ำหนักระหว่าง 0.3 และ 1.0 กรัมแห้งเผาและละลายถูกวัด spectrophotometrically ที่ 800 นาโนเมตร รายละเอียดเพิ่มเติมที่อธิบายไว้ในไฟล์เสริม. 2.7 กรดไขมันไขมันส่วนรำสกัดโดย Folch และคณะ (1957) วิธีการที่ถูกยัดเยียดให้แก๊ส chromatography (GC) สำหรับการแยก FAs ไขมันถูก esterified 0.5 ไม่มี KOH การแก้ปัญหาเร่งปฏิกิริยาด้วยเมทานอล BF3 การแก้ปัญหา (15 มิลลิลิตร 20% BF3 เจือจางในเมทานอล 1: 1) ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสไนโตรเจนและสารตกค้างโดยละลายเฮกเซนมิลลิลิตร 10 จากที่ 1 ไมโครลิตรถูกฉีดสำหรับ GC วิเคราะห์. 2.8 การวิเคราะห์ทางสถิติข้อมูลที่สร้างขึ้นจากการศึกษาครั้งนี้ได้ภายใต้การวิเคราะห์ทางเดียวของความแปรปรวน (ANOVA) ที่ระดับ 5% อย่างมีนัยสำคัญ หมายถึงถูกนำมาเปรียบเทียบโดยการทดสอบ Tukey การตรวจวัดทั้งหมดถูกดำเนินการใน triplicates

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . ทดลองวิธีการ
2.1 . น้ำมันรำข้าวน้ำมันรำข้าว
ทั้งถูกจัดโดยสถาบันชื่อข้าว irga ( Instituto ริโอเดอ ที่ตั้ง grandense ) ตั้งอยู่ใน Rio Grande ทำ Sul , บราซิล , ถูกเก็บไว้ที่− 10 ° C , จนกว่ากระบวนการวิศวกรรมเคมี . น้ำมันรำข้าว เตรียมเป็นสารตั้งต้นสำหรับกระบวนการ SSF มีมาตรฐานของมัน granulometry ระหว่าง 0.35 และ 0.70 mm .

. . การเตรียมเชื้อเห็ดราสายพันธุ์
( Rข่าวจาก CCT 7560 ) ใช้เป็นตัวแทนวิศวกรรมเคมี ถูกแยกจาก น้ำมันรำข้าว และระบุในปฏิบัติการจุลชีววิทยาในการประมวลผลอาหารศูนย์ปาสซูฟูนดูมหาวิทยาลัย ( UPF ) , RS , บราซิล วัฒนธรรมที่ถูกเก็บไว้ที่ 4 ° C ในอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA ) ปานกลาง และสปอร์มีถลอกจากเนินเขาใน Tween 80 ( 0.2% ) สารละลายอิมัลชันสื่อเดียวกันถูกใช้สำหรับการบ่มสปอร์ใน 7 D 30 ° C และเชื้อราสร้างสปอร์ที่สมบูรณ์จนกว่าใหม่ในวัฒนธรรม สปอร์ถูกระบุในหอนูเบาเออร์

2.3 การหมักของแข็ง ( SSF )
การหมักเป็นการทดลองในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพถาด , ขนาด 29 17 ×× 5.5 cm3 . ใช้น้ำมันรำข้าว ( 100 กรัม ) ลงในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพสร้างชั้นที่ดีของ 2 ซม. และสังเคราะห์∼ ,หลังจากการกับ 45 ml น้ำเกลือ ( kh2po4 2 G L − 1 , − 1 กรัม MgSO4 ใ 1 L , L nh2conh2 1.8 G − 1 ใน HCL 0.4 M ) น้ำมันรำข้าวเริ่มต้นสปอร์ความเข้มข้น 4.0 × 106 สปอร์ G − 1 ( badiale เฟอร์ลอง et al . , 2007 ) ปรับความชื้น 50% กับฆ่าเชื้อน้ำจากถาดที่ถูกปกคลุมด้วยผ้ากอซฆ่าเชื้อเพื่อให้อากาศ ก่อนถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 120 ชั่วโมงห้องหมักไว้ฆ่าเชื้อด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ ต่อคุณสมบัติทางเคมีฟิสิกส์ ตัวอย่างที่ถูกถอนที่จุดเริ่มต้นและแต่ละชั่วโมงที่ 24 ของ SSF ถูกเก็บไว้ที่ 18 °− C .

2.4 . ชีวมวลมวลชีวภาพเชื้อราเชื้อรา
ถูกผลิตในจานเลี้ยงเชื้อที่มี PDA , ฆ่าเชื้อและวางไว้บนจานในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อ แต่ละจานเพิ่ม 1 มิลลิลิตร การเทศนาของข่าวจากสปอร์ ระงับ และบ่มเป็นเวลา 120 ชั่วโมงในเตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศา เส้นใยเชื้อราก็หายจาก PDA โดยขูดด้วยความช่วยเหลือของไม้พาย ยกเว้น PDA ฟาโปรไฟล์เช่นเดียวกับดตัดสินใจในชีวมวล เพื่อให้ทราบว่า รัฐธรรมนูญของหมักแทน

2.5 การสกัดไขมัน
น้ำมันรำข้าวตัวอย่าง ( ขนาดอนุภาคระหว่าง 0.35 และ 07 มิลลิเมตร ) ถูกยัดเยียดให้เหมาะสม ( ไม่ , 2000 ) และฟอล์ช et al . ( 1957 ) สกัดเพื่อตรวจสอบผลผลิตของพวกเขา .

2.6 ดการประเมิน
ครั้งแรกของทั้งหมด เป็นรูปโค้งเพื่อกำหนดกลุ่มเป้าหมายที่เตรียมไว้โดยใช้โพแทสเซียม dihydrogen ฟอสเฟต ตาม badiale เฟอร์ลอง et al . ( 2006 ) กำหนดกลุ่มเป้าหมายในตัวอย่างไขมันที่สกัดจากรำข้าวหมักและไม่หมักฟอล์ช et al . ( 1957 ) วิธีการชั่งน้ำหนักระหว่าง 0.3 และ 1.0 กรัม , แห้ง , เผาและละลายอยู่ในวัดนี้ 800 nm . รายละเอียดเพิ่มเติมที่อธิบายไว้ในแฟ้มเพิ่มเติม

2.7 . กรดไขมัน
รำข้าวสกัดไขมันส่วนฟอล์ช et al .( 1957 ) ภายใต้ก๊าซโครมาโทกราฟี ( GC ) ) แยก ไขมันเป็น esterified 0.5 N เกาะโซลูชันที่เร่งปฏิกิริยาด้วยสารละลายเมทานอล BF3 ( 15 มิลลิลิตรในเมทานอล 20% BF3 เจือจาง 1 : 1 ) ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสและมีไนโตรเจนตกค้าง 10 ml สารละลายเฮกเซน ที่ 1 μผมฉีดวิเคราะห์ GC

2.8 .
สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลข้อมูลที่สร้างขึ้นจากการวิจัยภายใต้การวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) ที่ 5 % ที่ระดับ . 05 ค่าเฉลี่ยทดสอบทดสอบ . ทั้งหมดข้างต้นได้ทดลอง 3 ซ้ำ .