Moreover, the protein (c) also preferably includes a protein consisting of
an amino acid sequence formed such that a signal peptide engaging in transport or secretion of the protein is added to the amino acid sequence of the protein (a) or (b). Specific examples of addition of the signal peptide include addition to an N terminus of chloroplast transit peptide.
The เอซิล-ACP thioesterase activity of the protein of the present invention can be measured by, for example, introducing a fusion gene produced by linking the เอซิล-ACP thioesterase gene to the downstream of a promoter which functions
in a host cell such as Escherichia coli, into a host cell which lacks a fatty acid
degradation system, culturing the thus-obtained cell under the conditions suitable
for the expression of the introduced เอซิล-ACP thioesterase gene, and analyzing
any change caused thereby in the fatty acid composition of the cell or the cultured liquid by using a gas chromatographic analysis or the like.
Alternatively, the เอซิล-ACP thioesterase activity can be measured by
introducing a fusion gene produced by linking the เอซิล-ACP thioesterase gene to
the downstream of a promoter which functions in a host cell such as Escherichia
coli, into a host cell, culturing the thus-obtained cell under the conditions suitable 5 for the expression of the introduced เอซิล-ACP thioesterase gene, and subjecting
a disruption liquid of the cell to a reaction which uses เอซิล-ACPs, as substrates,
prepared according to the method of Yuan (Yuan L, Voelker TA, Hawkins DJ.
"Modification of the substrate specificity of an เอซิล-เอซิล carrier protein
thioesterase by protein engineering", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1995 Nov 7;
92 (23), p.10639-10643).
{0024}
There are no particular limitations on the method for obtaining the protein
of the present invention, and the protein may be obtained by chemical techniques
or genetic engineering techniques that are ordinarily carried out. For example, a 15 natural product-derived protein can be obtained through isolation, purification and
the like from Nannochloropsis gaditana. Furthermore, the protein can also be
artificially synthesized based on the information for the amino acid sequence set
forth in SEQ ID NO: 1, and protein synthesis may be carried out by chemical
synthesis, or a recombinant protein may also be produced by gene recombination 20 technologies. In the case of producing a recombinant protein, the เอซิล-ACP
thioesterase gene of the present invention described below can be used.
นอกจากนี้โปรตีน (ค) โดยเฉพาะอย่างยิ่งยังมีโปรตีนที่ประกอบด้วย
ลำดับกรดอะมิโนที่เกิดขึ้นดังกล่าวว่าสัญญาณเปปไทด์ที่มีส่วนร่วมในการขนส่งหรือการหลั่งของโปรตีนจะถูกเพิ่มในลำดับกรดอะมิโนโปรตีน (ก) หรือ (ข) ตัวอย่างที่เฉพาะเจาะจงของการเพิ่มของเปปไทด์สัญญาณรวมถึงการเพิ่มการไม่มีปลายทางของเปปไทด์ขนส่ง chloroplast. เอซิล -ACP กิจกรรม thioesterase ของโปรตีนของการประดิษฐ์ในปัจจุบันสามารถวัดได้โดยยกตัวอย่างเช่นการแนะนำยีนฟิวชั่นที่ผลิตโดยการเชื่อมโยง เอซิล -ACP thioesterase ยีนปลายน้ำของผู้ก่อการซึ่งทำหน้าที่ในเซลล์โฮสต์เช่นเชื้อ Escherichia coli, เป็นเซลล์โฮสต์ซึ่งขาดกรดไขมัน ระบบการย่อยสลายการเพาะเลี้ยงเซลล์จึง-ได้รับภายใต้สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแสดงออกของ แนะนำเอซิล -ACP thioesterase ยีนและการวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงใด ๆ ที่เกิดเหตุนั้นในองค์ประกอบของกรดไขมันของเซลล์หรือของเหลวเพาะเลี้ยงโดยใช้การวิเคราะห์สารก๊าซหรือชอบ. อีกวิธีหนึ่งคือเอซิล -ACP กิจกรรม thioesterase สามารถ วัดได้จากการแนะนำของยีนฟิวชั่นที่ผลิตโดยการเชื่อมโยงเอซิล -ACP thioesterase ยีนปลายน้ำของผู้ก่อการซึ่งทำหน้าที่ในเซลล์โฮสต์เช่น Escherichia coli, เข้าไปในเซลล์โฮสต์เพาะเลี้ยงเซลล์จึง-ได้ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม 5 สำหรับการแสดงออกของการแนะนำเอซิล -ACP thioesterase ยีนและหนอนบ่อนไส้ของเหลวการหยุดชะงักของเซลล์ที่จะเกิดปฏิกิริยาที่ใช้เอซิล -ACPs เป็นพื้นผิวที่เตรียมไว้ตามวิธีการของหยวน (หยวน L, Voelker TA, ฮอว์กินดีเจ. "การเปลี่ยนแปลงพื้นผิวจำเพาะของเอซิล - เอซิลเพชรรัตน์thioesterase วิศวกรรมโปรตีน "พร Natl Acad วิทย์ สหรัฐอเมริกา, 7 พฤศจิกายน 1995; . 92 (23), p.10639-10643) {} 0024 มีข้อ จำกัด ไม่มีโดยเฉพาะอย่างยิ่งกับวิธีการสำหรับการได้รับโปรตีนที่มีการประดิษฐ์ปัจจุบันและโปรตีนที่อาจจะได้รับโดยใช้เทคนิคทางเคมีหรือทางพันธุวิศวกรรม เทคนิคที่จะดำเนินการตามปกติออก ยกตัวอย่างเช่น 15 โปรตีนธรรมชาติที่ได้มาจากสินค้าที่ได้ผ่านการแยกบริสุทธิ์และชอบจาก Nannochloropsis gaditana นอกจากนี้โปรตีนยังสามารถสังเคราะห์เทียมบนพื้นฐานของข้อมูลสำหรับลำดับกรดอะมิโนตั้งไว้ใน SEQ ID NO: 1 และการสังเคราะห์โปรตีนอาจจะดำเนินการโดยสารเคมีสังเคราะห์หรือโปรตีนนอกจากนี้ยังอาจจะเกิดจากการรวมตัวกันอีกยีน 20 เทคโนโลยี ในกรณีที่มีการผลิตโปรตีน, เอซิล -ACP ยีนของการประดิษฐ์ในปัจจุบันระบุไว้ด้านล่าง thioesterase สามารถนำมาใช้
การแปล กรุณารอสักครู่..

นอกจากนี้ โปรตีน ( C ) ยังควรรวมถึงโปรตีนที่ประกอบด้วยกรดอะมิโนที่เกิดขึ้นเป็นลำดับ
เช่นสัญญาณเปปไทด์มีส่วนร่วมในการขนส่งหรือการหลั่งโปรตีนเพิ่มให้กับลำดับกรดอะมิโนของโปรตีน ( ก ) หรือ ( ข ) เฉพาะเจาะจงตัวอย่างเพิ่มสัญญาณเปปไทด์ รวมถึงยังเป็นปลายทางของเปปไทด์คลอขนส่ง N .
การเอซิล - ACP thioesterase กิจกรรมของโปรตีนของการประดิษฐ์ในปัจจุบันสามารถวัดได้ด้วย ตัวอย่างเช่น การฟิวชั่นของยีนที่ผลิตโดยการเชื่อมโยงเอซิล - ACP thioesterase ยีนไปยังท้ายน้ำ ซึ่งฟังก์ชั่นการ
ในเซลล์โฮสต์ เช่น เชื้อ Escherichia coli ในเซลล์โฮสต์ที่ขาดกรดไขมัน
ระบบการย่อยสลาย ,การเพาะเลี้ยงเซลล์จึงได้ภายใต้เงื่อนไขที่เหมาะสม
สำหรับการแสดงออกของแนะนำเอซิล - ACP thioesterase ยีนและการวิเคราะห์การเปลี่ยนแปลงใด ๆที่เกิดขึ้นจึง
ในองค์ประกอบของกรดไขมันในเซลล์เพาะเลี้ยงหรือของเหลวโดยใช้การวิเคราะห์แก๊สโครมาโตกราฟีหรือชอบ
อีกวิธีหนึ่งคือ เอซิล - กิจกรรม thioesterase ACP สามารถวัดได้ โดย
แนะนำของยีนที่ผลิตโดยการเชื่อมโยงเอซิล - ACP thioesterase ยีน
ตามน้ำของโปรโมเตอร์ที่ฟังก์ชันในเซลล์เจ้าบ้าน Escherichia coli เช่น
เข้าสู่เซลล์เจ้าบ้านซึ่งได้รับการเพาะเลี้ยงเซลล์ภายใต้สภาวะที่เหมาะสมสำหรับการแสดงออกของยีน thioesterase แนะนำเอซิล - ACP และ subjecting
การหยุดชะงักของของเหลวเซลล์เป็นปฏิกิริยาที่ใช้เอซิล - acps , พื้นผิว ,
เตรียมตามวิธีการของหยวน ( หยวน L , voelker ทา ฮอว์กินส์ ดีเจ
" การเปลี่ยนแปลงของพื้นผิวเฉพาะเจาะจงของเอซิล - เอซิลพาหะโปรตีน
thioesterase โดยโปรตีนวิศวกรรม " proc . NATL . ราช . สภาวะโลกร้อน สหรัฐอเมริกา , 1995 พ.ย. 7 ;
92 ( 23 ) , p.10639-10643
{ }
0024 )ไม่มีข้อจำกัดในวิธีการเฉพาะสำหรับการได้รับโปรตีน
ของการประดิษฐ์ในปัจจุบัน และโปรตีนที่อาจจะได้รับโดยใช้เทคนิคเคมี
หรือเทคนิคทางพันธุวิศวกรรมที่โดยปกติการ ตัวอย่างเช่น โปรตีน 15 ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติที่สามารถได้รับผ่านการแยกบริสุทธิ์และ
ชอบจาก nannochloropsis gaditana . นอกจากนี้โปรตีนยังสามารถ
เทียมสังเคราะห์ตามข้อมูลที่ให้ไว้ในชุดลำดับของกรดอะมิโน
seq หมายเลข 1 และการสังเคราะห์โปรตีนอาจจะดำเนินการโดยการสังเคราะห์สารเคมี
หรือรีคอมบิแนนท์โปรตีนอาจจะผลิต โดยเทคโนโลยีของยีนการ 20 ในกรณีของการผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ , เอซิล - ACP
thioesterase ยีนของปัจจุบันการประดิษฐ์อธิบายไว้ด้านล่างนี้สามารถใช้
การแปล กรุณารอสักครู่..
