Determination of protein concentrat

Determination of protein concentration of crude
enzyme samples:
Protein concentration was determined using
Bovine serum albumin (BSA) as standard by using
Bradford reagent. Different concentrations of BSA
were prepared. The volume was made up to 3 ml using
distilled water; 1 ml of Bradford reagent was added to
each test tube and mixed well. After 30 min of
incubation, the absorbance was measured at 595 nm
by spectrophotometer and the protein content
determined. The crude enzyme samples were
processed in a similar manner as described above.
Purification of L-asparaginase:
Purification of intracellular L-asparaginase of
E. coli VRY-15 was done using gel permeation column
chromatography using Sephadex G-100 and its purity
was checked using SDS PAGE. Sodium dodecyl sulfate
polyacrylamide gel electrophoresis was carried out in
using slab gel of 7% acrylamide in a Tris-HCl buffer
pH 8.3 containing 0.1% SDS. The gels were stained
with 0.025 Coomassie brilliant blue R-250 and destained
(Stegemann, 1979).
Results:
A total of 35 bacterial strains were isolated
from 14 different sewage samples (Table I). All the
isolated bacterial cultures were found to be Gramnegative.
Their shape varied from bacillus to coccobacillus.
They all were found to be motile and possessed
green metallic sheen when inoculated on EMB agar
plates. Lactose fermentation along with production of
acid and gas was observed with all the isolates. They
Table I: Isolation of bacterial cultures from sewage water
samples
Fig. Ia: Agar diffusion test for L-asparaginase activity in E. coli
VRY-15.
showed a positive response to indole test and methyl
red test and negative response to VP and citrate
utilization test. Results of morphological and
biochemical studies showed that the isolates belong to
the genus Escherichia.
Asparaginase activity varied upto great extent
among different isolates. Maximum activity of
intracellular L-asparaginase was recorded in E. coli
VRY-15 showing 2.0 cm zone of enzyme activity (Fig.
Ia & Ib)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การกำหนดความเข้มข้นของโปรตีนของตัวอย่างดิบเอนไซม์

ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนดโดยใช้
วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA) เป็นมาตรฐานโดยใช้
แบรดฟอสาร ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของบีเอสเอได้เตรียม
ปริมาณที่ถูกสร้างขึ้นถึง 3 มล. ใช้น้ำกลั่น
; 1 มิลลิลิตรของแบรดฟอสารถูกบันทึกอยู่ใน
แต่ละหลอดทดลองและผสมดี หลังจาก 30 นาทีของการ
บ่มการดูดกลืนแสงที่วัดที่ 595 นาโนเมตร
โดย spectrophotometer ที่และปริมาณโปรตีน
กำหนด ตัวอย่างเอนไซม์ดิบถูก
ประมวลผลในลักษณะที่คล้ายกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้นการทำให้บริสุทธิ์ของ
L-asparaginase.
การทำให้บริสุทธิ์ของเซลล์ L-asparaginase ของ
อี coli VRY-15 ได้รับการดำเนินการโดยใช้เจลซึมผ่านคอลัมน์
โคใช้ Sephadex G-100 และความบริสุทธิ์ของตน
ถูกตรวจสอบโดยใช้หน้า sdsโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต
polyacrylamide เจลอิเล็กโทรฟดำเนินการในการใช้เจล
แผ่น 7% acrylamide ในบัฟเฟอร์ tris-hcl
ph 8.3 ที่มี sds 0.1% เจลมีการย้อมด้วย
0.025 Coomassie สดใสสีฟ้า r-250 และ destained
(stegemann, 1979)
ผล.
ทั้งหมด 35 สายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียที่แยกได้จาก
14 ตัวอย่างน้ำเสียที่แตกต่างกัน (ตารางที่ i) ทั้งหมด
วัฒนธรรมของแบคทีเรียที่แยกได้พบว่ามี gramnegative.
รูปร่างแตกต่างกันไปจากบาซิลลัส coccobacillus ของพวกเขา.
พวกเขาทั้งหมดพบว่ามีการเคลื่อนที่และครอบครอง
เงาโลหะสีเขียวเมื่อเชื้อบน EMB วุ้น
แผ่น การหมักแลคโตสพร้อมกับการผลิต
กรดและก๊าซก็พบกับสายพันธุ์ทั้งหมด พวกเขา
ตาราง i: การแยกของวัฒนธรรมแบคทีเรียจากน้ำเน่า

ตัวอย่างมะเดื่อ เอี:วุ้นทดสอบการกระจายกิจกรรม L-asparaginase ในอีเมล coli
VRY-15.
แสดงให้เห็นการตอบสนองในเชิงบวกต่อการทดสอบอินโดลและเมธิล
ทดสอบสีแดงและการตอบสนองเชิงลบต่อ VP และซิเตรท
ทดสอบการใช้ ผลจากการศึกษาลักษณะทางสัณฐานวิทยาและชีวเคมี
แสดงให้เห็นว่าสายพันธุ์เป็นพันธุ์ Escherichia
.
กิจกรรม asparaginase แตกต่างกันไม่เกินระดับที่ดี
ในหมู่สายพันธุ์ที่แตกต่างกัน กิจกรรมสูงสุดของ
ภายในเซลล์ L-asparaginase ได้รับการบันทึกไว้ในอีเมล coli
VRY-15 แสดง 2.0 ซม. โซนของเอนไซม์ (รูป
เอี& IB)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนของดิบ
ตัวอย่างเอนไซม์:
กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนใช้
วัว serum albumin (บีเอสเอ) เป็นมาตรฐานโดย
รีเอเจนต์แบรดฟอร์ด ความเข้มข้นแตกต่างกันของบีเอสเอ
ถูกเตรียมไว้ ไดรฟ์ข้อมูลจะขึ้น 3 ml ใช้
กลั่นน้ำ 1 ml ของรีเอเจนต์แบรดฟอร์ดได้เพิ่ม
แต่ละหลอดทดสอบ และผสมกัน หลังจาก 30 นาทีของ
คณะทันตแพทยศาสตร์ มีที่วัด absorbance ที่ 595 nm
โดยเครื่องทดสอบกรดด่างและโปรตีน
กำหนด ตัวอย่างเอนไซม์ดิบดี
ประมวลผลในลักษณะที่คล้ายกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น
ฟอกของ L-asparaginase:
ฟอก L asparaginase intracellular ของ
E. coli ทำ VRY-15 ใช้เจลซึมผ่านคอลัมน์
chromatography Sephadex G-100 และความบริสุทธิ์
ถูกตรวจสอบโดยใช้ SDS หน้า โซเดียมซัลเฟต dodecyl
เจ polyacrylamide electrophoresis ทำออกใน
ใช้เจลพื้นของอะคริลาไมด์ 7% ในทริสเรทติ้ง HCl บัฟเฟอร์
SDS 0.1% มีค่า pH ที่ 8.3 เจได้สี
0.025 Coomassie ใสสีน้ำเงิน R-250 และ destained
(Stegemann, 1979)
ผลลัพธ์:
จำนวน 35 สายพันธุ์แบคทีเรียที่แยก
จากตัวอย่างน้ำเสียแตกต่างกัน 14 (ตารางฉัน) ทั้งหมด
วัฒนธรรมแยกแบคทีเรียพบเป็น Gramnegative.
รูปร่างของพวกเขาแตกต่างจากคัดเพื่อ coccobacillus.
พวกเขาทั้งหมดพบ motile และมอบ
กรีนชีนโลหะเมื่อ inoculated ใน EMB agar
แผ่น แล็กโทสหมักพร้อมผลิต
กรดและแก๊สได้สังเกต ด้วย isolates ทั้งหมด พวกเขา
i:ตารางแยกวัฒนธรรมแบคทีเรียจากสิ่งโสโครกน้ำ
ตัวอย่าง
ฟิก Ia: ทดสอบแพร่ agar สำหรับกิจกรรม L-asparaginase ใน E. coli
VRY 15.
พบตอบทดสอบอินโดลและ methyl
แดงทดสอบและ VP และซิเตรตตอบลบ
ทดสอบใช้ประโยชน์ ผลกระทบ และ
ชีวเคมีศึกษาพบว่า ที่ isolates เป็น
สกุล Escherichia.
Asparaginase กิจกรรมแตกต่างกันสำหรับระดับดี
ระหว่าง isolates แตกต่างกัน กิจกรรมสูงสุดของ
บันทึกใน E. coli intracellular L-asparaginase
VRY-15 แสดง 2.0 ซม.โซนของเอนไซม์ (Fig.
Ia & Ib)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกำหนดค่าความเข้มข้นของการรวมศูนย์อาหารโปรตีน:

โปรตีนตัวอย่างน้ำมันดิบเอนไซม์ตั้งใจไว้แล้วว่าการใช้
วัวอีกเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ไข่ขาว( BSA )เป็นอุปกรณ์มาตรฐานโดยการใช้ยาซัด
Bradford ความเข้มข้นแตกต่างกันไปของ BSA
ได้เตรียมความพร้อม ระดับเสียงที่ถูกสร้างขึ้นได้ถึง 3 มล.ใช้
น้ำกลั่น 1 มล.ของยาซัด Bradford ถูกเพิ่มใน
ท่อดูดฝุ่นแต่ละการทดสอบและได้รับการตกแต่งอย่างดีแบบผสม หลังจาก 30 นาทีของ
อบabsorbance วัดได้ 595 nm
โดยใช้ในเนื้อหาและโปรตีนที่
กำหนด ราคาน้ำมันดิบที่เอนไซม์ตัวอย่างเป็น
ซึ่งจะช่วยดำเนินการในลักษณะเช่นที่อธิบายไว้ข้างต้น.
ทำน้ำบริสุทธิ์ของ L - asparaginase :
ทำน้ำบริสุทธิ์ของ intracellular L - asparaginase ของ
ซึ่งจะช่วย e .ผล vry - 15 ทำได้โดยใช้เจลซึมแทรกคอลัมน์
ซึ่งจะช่วย chromatography โดยใช้ sephadex G - 100 และความบริสุทธิ์
ซึ่งจะช่วยเป็นการตรวจสอบโดยใช้เซิร์ฟเวอร์ SDS หน้า.เจล dodecyl จุนสี
polyacrylamide โซเดียม electrophoresis ก็ถูกหามออกจากใน
การใช้เจลชะพลูของอะคริลาไมด์ 7% ในบริษัททริสเรทติ้งจำกัด sds. - HCL /บัฟเฟอร์
pH 8.3 ที่มี 0.1% ผลิตภัณฑ์ ประเภท แวกซ์,เจลที่มีแต้มสี
พร้อมด้วย 0.025 coomassie สดใสสีฟ้า R -250 และ destained
( stegemann , 1979 )..
ผล:
รวม 35 เกิดจากเชื้อแบคทีเรียพันธุ์ก็แยก
ซึ่งจะช่วยการระบายสิ่งปฏิกูลจาก 14 ตัวอย่าง( i ) ที่
ตามมาตรฐานทั้งหมดวัฒนธรรมแยกเชื้อแบคทีเรียพบว่ามี gramnegative .
ของรูปทรงที่หลากหลายจากเชื้อเพื่อ coccobacillus .
เขาก็พบว่าเป็น motile และยึดสุกปลั่งสีเมทัลลิก
สีเขียวเมื่อ inoculated บนแผ่นทำความร้อนสาหร่ายทะเล
emb หมักแลคโตสพร้อมด้วยการผลิตและก๊าซชนิดตะกั่วกรดแบบซีล
ซึ่งจะช่วยได้สังเกตเห็นด้วยทั้งหมดที่แยก พวกเขา
โต๊ะผมมีการขจัดวัฒนธรรมเกิดจากเชื้อแบคทีเรียจากน้ำการระบายสิ่งปฏิกูล

ตัวอย่างรูป IAการทดสอบการแพร่สาหร่ายทะเลสำหรับ L - กิจกรรม asparaginase ในผล
vry - 15 .
แสดงให้เห็นการตอบรับเป็นอย่างดีในการทดสอบการทดสอบและ indole Methyl
สีแดงและการตอบสนองทางลบกับ VP และการทดสอบ citrate
การใช้กำลังการผลิต ผลการศึกษาเกี่ยวกับวิชาว่าด้วยรูปร่างลักษณะ
ทางชีวเคมีและแสดงให้เห็นว่าแยกเป็นส่วนมากได้ถึงความหลากหลายพืชริคีอา.

ซึ่งจะช่วยให้การทำงานของ asparaginase
ท่ามกลางแตกต่างกันแยก การทำงานสูงสุดของ
ตามมาตรฐานintracellular L - asparaginase ถูกบันทึกไว้ในโซนและมีเพียงเชื้ออี. E .
vry - 15 แสดง 2.0 ซม.ของการทำงานของเอนไซม์(รูป.วาณิชธนกิจ
IA &)