2.3. Sampling and tissue preparatio

2.3. Sampling and tissue preparation
The previously identified piglets from each group were euthanized on 12 ± 1 (n = 6), 26 ± 1 (n = 6), 34 ± 1 (n = 7) and 54 ± 2
(n = 8) d of age such that treatment groups were balanced for litter and gender. The piglets were sedated with 20 mg/kg BW
of ketamine hydrochloride (Ursotamin®, Serumwerk Bernburg AG, Germany) and 2 mg/kg BW of azaperone (Stresnil®,
Jansen-Cilag, Neuss, Germany) prior to euthanasia with intracardial injection of 10 mg/kg BW of tetracaine hydrochloride,
mebezonium iodide and embutramide (T61®, Intervet, Unterschleißheim, Germany). Following euthanasia and a midline
abdominal incision, the pyloric valve and ileo-cecal junction were clamped and the entire intestinal tract was removed from
the peritoneum. The small intestine was dissected from the large intestine at the ileo-cecal junction and both segments dissected
from the mesentery. Digesta was collected from the entire ileum (defined as distal 1.0 m before the ileo-cecal valve)
and rectum. One tissue section (45 cm) was obtained from the mid jejunum and immediately placed on ice for mucosal
sample preparation. Additionally, a 2 cm section was immediately placed in Bouin’s solution for fixation. For mucosa sample
preparation, the jejunal segment was flushed with ice-cold 0.85% (w/v) NaCl solution containing 0.2 mM phenylmethylesulfonyl
fluoride (PMSF) and cut longitudinally. The mucosa was gently scraped from the underlying muscle layers with a
glass slide. The mucosal scrapings were homogenized in 30 ml of ice-cold preparation buffer (Tris–HCl; 20 mM; pH 7.4 with
5 mM ethylene glycol tetraacetic acid (EGTA) using an homogenizer (Ultra-Turrax, IKA, Staufen, Germany), snap-frozen in
liquid nitrogen and stored at −80 ◦C until further analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การเก็บตัวอย่างและการเตรียมเนื้อเยื่อ
ลูกสุกรระบุก่อนหน้านี้จากแต่ละกลุ่มถูก euthanized เมื่อวันที่ 12 ± 1 (n = 6) 26 ± 1 (n = 6) 34 ± 1 (n = 7) และ 54 ± 2
(n = 8) d อายุดังกล่าวว่ากลุ่มการรักษาความสมดุลในการทิ้งขยะและเพศ ลูกสุกรได้รับการผ่อนคลายกับ 20 mg / kg BW
ของไฮโดรคลอไรคีตา (Ursotamin®, Serumwerk Bernburg เอจี, เยอรมนี) 2 mg / kg BW ของ azaperone (Stresnil®,
Jansen-Cilag, นอยซ์, เยอรมนี) ก่อนที่จะนาเซียด้วยการฉีด intracardial ของ 10 mg / kg BW ของไฮโดรคลอไร tetracaine,
ไอโอไดด์ mebezonium และ embutramide (T61®, Intervet, Unterschleißheim, เยอรมนี) ต่อไปนี้นาเซียและกึ่ง
แผลท้อง pyloric วาล์วและทางแยก ileo-cecal ถูกยึดและทางเดินลำไส้ทั้งหมดถูกลบออกจาก
เยื่อบุช่องท้อง ลำไส้เล็กถูกชำแหละจากลำไส้ใหญ่ที่แยก ileo-cecal และทั้งสองส่วนชำแหละ
จากน้ำเหลือง Digesta ถูกเก็บรวบรวมจากทั้ง ileum (หมายถึงปลาย 1.0 เมตรก่อนที่วาล์ว ileo-cecal)
และทวารหนัก ส่วนหนึ่งของเนื้อเยื่อ (45 ซม.) ที่ได้รับจาก jejunum กลางและวางไว้บนน้ำแข็งสำหรับเยื่อเมือก
การเตรียมสารตัวอย่าง นอกจากนี้ส่วนที่ 2 ซม. ถูกวางไว้ในการแก้ปัญหา Bouin สำหรับการตรึง สำหรับเยื่อบุตัวอย่าง
การเตรียมการส่วน jejunal ถูกล้างด้วยน้ำแข็งเย็น 0.85% (w / v) การแก้ปัญหาที่มีโซเดียมคลอไรด์ 0.2 มิลลิ phenylmethylesulfonyl
ลูออไรด์ (PMSF) และตัดตามยาว เยื่อเมือกถูกขูดเบา ๆ จากชั้นกล้ามเนื้อต้นแบบที่มี
สไลด์แก้ว scrapings เยื่อเมือกถูกปั่นใน 30 มล. ของ buffer เตรียมเย็น (Tris-HCl 20 มิลลิ; ค่า pH 7.4 ที่มี
5 มิลลิกรดไกลคอลเอทิลีน tetraacetic (EGTA) โดยใช้ homogenizer (อัลตร้า Turrax, IKA, Staufen, เยอรมนี), สแน็ป แช่เย็นใน
ไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่ -80 ◦Cจนการวิเคราะห์ต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การสุ่มตัวอย่างและการเตรียมเนื้อเยื่อ
ระบุก่อนหน้านี้ลูกสุกรแต่ละกลุ่ม euthanized 12 ± 1 ( n = 6 ) , 26 ± 1 ( n = 6 ) , 34 ± 1 ( n = 7 ) และ 54 ± 2
( n = 8 ) D อายุ เช่น การรักษากลุ่มที่สมดุลสำหรับทิ้งขยะและเพศ . ลูกสุกรเธอถูกมอมยา 20 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักตัว 1 กิโลกรัมของคีตามีนไฮโดรคลอไรด์ (
ursotamin ® serumwerk bernburg , AG , Germany ) และ 2 มิลลิกรัมต่อน้ำหนักตัว 1 กิโลกรัมของ azaperone ( stresnil ®
,cilag neuss Jansen , Germany ) ก่อนการการุณยฆาตกับการฉีด intracardial 10 มก. / น้ำหนักตัว 1 กิโลกรัมของเททระเคนไฮโดรคลอไรด์
mebezonium ไอโอไดด์และ embutramide ( t61 ® intervet unterschlei , , ßไฮม์ , เยอรมนี ) ต่อไปนี้เซียสและจาก
ช่องท้องแผล , pyloric วาล์วและ ileo ชุมทางถูกบีบลำไส้ใหญ่ซีคัมและระบบทางเดินอาหารทั้งหมดถูกลบออกจาก
เยื่อบุช่องท้อง .ลําไส้เล็กคือผ่าจากลำไส้ใหญ่ที่ ileo ลำไส้ใหญ่ซีคัมและทั้งสองกลุ่มแยกชำแหละ
จากเยื่อแขวนลำไส้ . digesta รวบรวมจากลำไส้เล็กส่วนปลาย ( distal ทั้งหมดเช่น 1.0 M ก่อน ileo ลำไส้ใหญ่ซีคัมวาล์ว )
และทวารหนัก . เนื้อเยื่อหนึ่งส่วน ( 45 เซนติเมตร ) ได้จากลำไส้เล็กกลางและวางไว้บนน้ำแข็ง เพื่อการเตรียมสารตัวอย่างที่ถูก

นอกจากนี้2 เซนติเมตร ส่วนที่ถูกวางไว้ในการแก้ปัญหา bouin สำหรับการตรึง . สำหรับการเตรียมสารตัวอย่าง
เยื่อเมือก , jejunal สัดส่วนกลั้วกับเย็น 0.85 % ( w / v ) สารละลายที่มีเกลือโซเดียมฟลูออไรด์ 0.2 มิลลิเมตร phenylmethylesulfonyl
( PMSF ) และตัดตามยาว . เยื่อบุก็ค่อยๆขูดจากต้นแบบกล้ามเนื้อชั้นด้วย
เลื่อนแก้วการรวบรวม ( ถูกบดใน 30 ml ของน้ำแข็งเย็นเตรียมบัฟเฟอร์ ( ทริส– HCl ; 20 มม. ; พีเอช 7.4 กับ
5 มิลลิเมตร เอทิลีนไกลคอล tetraacetic acid ( หน่วย ) โดยใช้เครื่องปั่น ( Ultra turrax , อิกะ Staufen , เยอรมนี ) , snap แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิ−
และ 80 ◦ C จนถึงการวิเคราะห์เพิ่มเติม .