2. Materials and methods2.1. Chemic

2. Materials and methods
2.1. Chemicals and raw materials
Polyethylene glycol (PEG), sodium dodecyl sulfate (SDS), bovine serum albumin (BSA), casein and l-cysteine were obtained from Fluka (Buchs, Switzerland). Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 and R-250 were purchased from Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Ammonium sulfate ((NH4)2SO4), trichloroacetic acid (TCA) and other chemicals with analytical grade were obtained from Merck (Darmstadt, Germany).

Carica papaya fruits were harvested from 3 to 4 months maturation at Mae Fah Luang University, Chiang Rai, Thailand.

2.2. Extraction of proteases from papaya peels
Papaya peels were prepared by peeling the fruits and cutting them into small pieces. The peels were dried in a tray-dryer at 55 oC until 90% (w/w) of moisture content was removed according to previously reported [1]. The fresh or dried papaya peels were ground in a blender before mixed with the extraction media (H2O and 50 mM phosphate buffers, pH 7.0) at a ratio of 1:9 (w/v), and it was then let stand for 30 min. The extracted samples were then centrifuged at 9000 × g at 4 °C for 20 min. The obtained supernatant was filtered through a Whatman paper No. 1. This sample was referred to as the “crude extract” and used for further experiment.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมีและวัตถุดิบ
Polyethylene glycol (PEG), โซเดียมซัลเฟต dodecyl (SDS), วัว serum albumin (บีเอสเอ), เคซีน และ l-cysteine ได้รับมาจาก Fluka (Buchs สวิตเซอร์แลนด์) Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250 และ R-250 ที่ซื้อจาก บริษัทเคมีซิก (เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) แอมโมเนียซัลเฟต ((NH4) 2SO4), กรด trichloroacetic (TCA) และสารเคมีอื่น ๆ ด้วยเกรดวิเคราะห์ได้รับมาจากบริษัทเมอร์ค (ดาร์มส เยอรมนี)

ผลไม้มะละกอ Carica ถูกเก็บเกี่ยวจาก 3 ไป 4 เดือนพ่อแม่ที่มหาวิทยาลัยแม่ฟ้าหลวง จังหวัดเชียงราย ประเทศไทย.

2.2 Proteases สกัดจากมะละกอ peels
peels มะละกอได้เตรียมผลไม้ปอกเปลือก และตัดให้เป็นชิ้นเล็ก ๆ Peels ถูกอบแห้งในถาดอบที่ 55 องศาเซลเซียสจนกว่า 90% (w/w) ของชื้นถูกเอาตามรายงานก่อนหน้านี้ [1] มะละกอสด หรือแห้ง peels ถูกพื้นในเบลนเดอร์ก่อนผสมกับแยกสื่อ (บัฟเฟอร์ฟอสเฟต H2O และ 50 มม. ค่า pH 7.0) ในอัตราส่วน 1:9 (w/v), และมันได้แล้วให้ถึง 30 นาที ตัวอย่างที่แยกได้แล้ว centrifuged ที่ 9000 × g ที่ 4 ° C สำหรับ 20 นาที Supernatant ได้รับถูกกรองผ่าน Whatman กระดาษหมายเลข 1 อย่างนี้เรียกว่า "สารสกัดหยาบ" และใช้ในการทดลองต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2 วัสดุและวิธีการ
2.1 สารเคมีและวัตถุดิบ
เอทิลีนไกลคอล (PEG) โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS), วัวซีรั่มอัลบูมิ (บีเอสเอ), เคซีนและ L-cysteine ​​ที่ได้รับจาก Fluka (Buchs วิตเซอร์แลนด์) Coomassie สดใสสีฟ้า (CBB) G-250 และ R-250 ที่ซื้อมาจากซิกเคมิคอล จำกัด (เซนต์หลุยส์, MO, USA) แอมโมเนียมซัลเฟต ((NH4) 2SO4) ไตรคลอโรกรด (TCA) และสารเคมีอื่น ๆ ที่มีการวิเคราะห์คะแนนที่ได้รับจากเมอร์ (Darmstadt, เยอรมนี) ฝากผลไม้มะละกอเก็บเกี่ยว 3-4 เดือนที่สุกที่มหาวิทยาลัยแม่ฟ้าหลวงเชียงราย ประเทศไทย2.2 การสกัดโปรตีเอสจากเปลือกมะละกอเปลือกมะละกอถูกจัดทำขึ้นโดยการปอกเปลือกผลไม้และตัดพวกเขาเป็นชิ้นเล็ก ๆ เปลือกแห้งในถาดเครื่องเป่าที่ 55 องศาเซลเซียสจน 90% (w / w) ความชื้นจะถูกลบออกตามที่รายงานก่อนหน้านี้ [1] สดหรือแห้งเปลือกมะละกอมาบดในเครื่องปั่นก่อนที่จะผสมกับสื่อการสกัด (H2O และ 50 มิลลิบัฟเฟอร์ฟอสเฟต pH 7.0) ในอัตรา 1: 9 (w / v) และจากนั้นก็ให้ยืน 30 นาที . ตัวอย่างที่สกัดได้จากนั้นหมุนเหวี่ยงที่ 9000 ×กรัมที่ 4 ° C เป็นเวลา 20 นาที สารละลายที่ได้ถูกกรองผ่านกระดาษที่เบอร์ 1 ตัวอย่างนี้ถูกเรียกว่า "สารสกัด" และใช้สำหรับการทดลองต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . เคมีภัณฑ์และวัตถุดิบ
polyethylene glycol ( PEG ) , โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) อัลบูมิน ( BSA ) เคซีน แอลซิสเตอีน ได้จาก fluka ( buchs , สวิตเซอร์แลนด์ ) เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส ( cbb ) และ g-250 r-250 ซื้อมาจาก Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO , USA ) แอมโมเนียม ซัลเฟต ( ( NH4 ) 2so4 )กรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA ) และสารเคมีอื่น ๆ กับเกรดที่ได้รับการวิเคราะห์จากเมอร์ค ( ดาร์มสตัดท์ , เยอรมนี ) .

มะละกอผลเก็บเกี่ยวจาก 3 ไป 4 เดือน วุฒิภาวะ มหาวิทยาลัยแม่ฟ้าหลวง , เชียงราย , ไทย .

. . สกัดจากมะละกอเพื่อเปลือก
มะละกอเปลือกเตรียมปอกผลไม้และตัดให้เป็นชิ้นเล็กๆเปลือกแห้งในเครื่องอบแห้งแบบถาดที่ 55 องศาเซลเซียส จนถึง 90 % ( w / w ) ของความชื้นจะถูกลบออกตามที่เคยรายงาน [ 1 ] สดหรือแห้งเปลือกมะละกอบดในเครื่องปั่นก่อนผสมกับการสกัดสื่อ ( H2O และ 50 มิลลิเมตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ พีเอช 7.0 ) ในอัตราส่วน 1 : 9 ( w / v ) และก็ให้ยืนเป็นเวลา 30 นาทีสกัดไฟฟ้าจำนวนแล้วที่ 9000 × g 4 °องศาเซลเซียส 20 นาที ได้นำถูกกรองผ่าน whatman กระดาษเปล่า 1 ตัวอย่างนี้จะถูกเรียกว่า " แยก " น้ำมันที่ใช้ในการทดลองต่อไป